王會生，王文會，趙四正，杜逢艷，馬小蘭，韓慶彥

（1.甘肅省禮縣畜牧獸醫(yī)站，甘肅 禮縣 742200；2.甘肅省動物疫病預防控制中心，甘肅 蘭州 730030）

抗生素或抗菌藥物在一定濃度下能抑制和殺滅細菌類微生物，且使用抗生素可以提高料肉比，如20世紀40年代Moore等[1]國外科學家首次報道添加抗生素可以顯著提高肉雞的日增重，降低料肉比。這些年來抗生素作為預防和增重性添加劑在畜牧業(yè)的使用范圍和劑量都越來越大，但是長期過多地使用抗生素會造成環(huán)境污染，尤其是影響畜禽機體免疫力[2]和腸道微生態(tài)平衡[3]、降低肉蛋品質(zhì)和風味[4]，最重要的是造成微生物對抗生素的耐藥性增強，使得畜禽疫病防治用藥量不斷增加，進而造成肉蛋中抗生素藥物的殘留[5]，對人體健康與食品安全產(chǎn)生危害。對于養(yǎng)雞業(yè)來說，抗生素的使用更為廣泛，長期、大量使用抗生素會抑制機體免疫功能下降，發(fā)病率增加[6]。研究表明，抗生素長期大量使用可能會干擾機體的免疫球蛋白，降低體內(nèi)淋巴細胞的有絲分裂[7]，造成機體抵抗力下降。

我國部分中草藥具有提高免疫力的作用，其有效成分可分為有機酸類、生物堿類、多糖類、甙類、芳香揮發(fā)油類等，這是我國中醫(yī)學的瑰寶。如黃芪、刺五加、黨參、當歸、淫羊藿、穿心蓮、大蒜、茯苓、水牛角、豬苓等[8]，都有增強機體抵抗力、促進消化吸收的作用。

在飼料中添加中草藥防病治病，也是中獸醫(yī)學的一個研究方向。中草藥無耐藥性，不會在體內(nèi)殘留，有利于解決使用抗生素造成的耐藥性、畜產(chǎn)品藥物殘留和環(huán)境污染等問題。同時利用中草藥刺激機體產(chǎn)生一定的免疫力，有利于機體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生更多抗體[9]。微生物制劑也能促進動物的消化吸收，對于機體的免疫能力也有影響。本試驗選擇在其他飼養(yǎng)管理因素相同的條件下，檢測不同藥物對雞的免疫抗體效價的影響，為規(guī)模養(yǎng)雞場如何利用中草藥等添加劑代替抗生素提供數(shù)據(jù)支持，同時為如何做好雞的免疫和飼養(yǎng)管理提供資料。

1 材料與方法

1.1 試驗雞群

雛雞于2021年3月18日引進，2021年6月22日出售。引進雛雞均來自四川涼山美姑縣某家禽養(yǎng)殖公司，為同一批次的七日齡雛公雞，品種為青腳麻雞。共引進2 000只，選擇500只進行試驗。

1.1.1雞群分組與用藥 將500只雛雞平均分成5組，飼喂無添加抗生素及免疫增效劑的飼料。試驗設1個對照組、4個試驗組。試驗組分別添加清瘟敗毒散、扶正解毒散、牛蟾顆粒、益生源4種藥物。其中清瘟敗毒散主要成分為黃連、青黛、荊芥、防風、羌活等，按0.3%拌料；扶正解毒散主要成分為板藍根、黃芪、淫羊藿等，每只雞按照0.5～1.5 g/d劑量使用；牛蟾顆粒主要成分為人工牛黃、蟾蜍、冰片、黃芩、甘草等，按0.3%拌料；益生源有效成分是枯草芽孢桿菌、嗜酸乳桿菌和釀酒酵母等，按0.3%拌料。其中清瘟敗毒散和扶正解毒散由武威新天馬生物制品有限公司生產(chǎn)，牛蟾顆粒和益生源由濰坊牧易生物科技有限公司生產(chǎn)，均符合國家獸藥生產(chǎn)標準。

1.1.2雞群的飼養(yǎng)管理 采用封閉式籠養(yǎng)的方式，所有試驗雞群在同一個雞舍進行飼養(yǎng)，飼養(yǎng)方式相同，自由飲水，自21日齡開始投藥，一直到采血后結(jié)束。注意飼料在添加中成藥時，要確保中成藥和飼料完全混合均勻。

1.1.3疫苗注射 雞群30日齡時，注射禽流感三價苗滅活苗（H5N2亞型，D7株，大華農(nóng)生物公司），7 d后再注射禽新重組二聯(lián)活疫苗（哈爾濱維科生物技術(shù)有限公司），以上兩種疫苗均為配發(fā)。

雞群30日齡時，選擇在早晨進行頸部皮下注射0.5 ml上述疫苗，免疫接種時要觀察雞群的健康狀況，選擇健康雞。

1.2 試驗試劑

采用市售的高致病性禽流感病毒H5亞型血凝抑制試驗抗原（Re-8株）和陽血清（Re-8株）（哈爾濱維科生物技術(shù)有限公司，2018007）。新城疫血凝抑制試驗抗原和陽性血清（青島立見生物科技有限公司，010131801）。

1.3 器械及耗材

準備10～200 μl單道、8道和12道移液器各1把，90°和110°一次性V型8×12反應板若干，無菌移液槍頭若干。

1.4 待檢血清處理方法

在雞群注射疫苗后19 d在雞的翅靜脈采血，每組至少采集50只雞的全血，每只3～5 ml。采用全血放置于0～4 ℃冰箱過夜24 h自然析出血清的方法收集血清，進行禽流感和新城疫的抗體效價測定。

1.5 檢測方法及抗體合格標準

按照《高致病性禽流感防治技術(shù)規(guī)范》等動物疫病防治技術(shù)規(guī)范中的相關(guān)規(guī)定，抗體檢測采用血凝（HA）和血凝抑制（HI）試驗法，具體按照GB/T 18936-2003《高致病性禽流感診斷技術(shù)》和GB/T 16550-2008《新城疫診斷技術(shù)》執(zhí)行，其抗體滴度達到≥4log2為合格，＜4log2為不合格。在具體試驗分析中，由于抗體效價判斷是人為操作，主觀性較大，不利于分析，為了解中成藥對于抗體的效價影響，將抗體滴度＜4log2定為不合格，4log2～6log2為合格，＞6log2為良好，以有利于抗體效價的判斷。

1%的RBC液的制備：采用當?shù)匚醋⑸溥^高致病性禽流感和新城疫疫苗的3只公雞，翅靜脈采血，制作1%的RBC液，同時測定禽流感和新城疫的抗原效價。嚴格按照操作規(guī)程進行試驗，注意要做抗原血凝回歸試驗，以確保試驗的準確性。

雖然注射禽新重組二聯(lián)苗理論上禽流感抗體和新城疫抗體應該是同時產(chǎn)生的，可實際上，往往其抗體效價峰值不會同時出現(xiàn)，大多數(shù)是禽流感抗體效價先達到峰值，新城疫次之，因此選擇在免疫注射后19 d進行采血而不是常見的15 d，是為了讓兩種抗體效價都達到峰值。為了保證抗體效價獲得足夠的免疫力，采取的是配發(fā)疫苗，第一劑禽流感N2亞型疫苗注射7 d后，又加強了一次禽新重組二聯(lián)苗，以提高抗體的檢出率。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

本試驗數(shù)據(jù)釆用SPSS19.0進行單因素方差分析，并LSD多重比較。當P＜0.01為差異極顯著，P＜0.05為差異顯著，P＞0.05為差異不顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 抗體檢測結(jié)果

由表1可知，5組的禽流感抗體合格率（合格數(shù)/同組樣品總數(shù)，下同）分別為76%、78%、69.4%、74%和64%，新城疫抗體合格率分別為58%、68%、54%、60%和46%?？梢钥闯鲋兴幗M的抗體合格率明顯高于普通飼料組，在不合格的檢測樣本里（滴度＜4log2），也可以看出中藥組的抗體滴度要高于普通飼料組。具體來說，三種中藥試驗組產(chǎn)生的禽流感和新城疫的抗體效價相對于對照組差異顯著（P＜0.05）,而益生源組相對于對照組差異不顯著。這說明在飼料中添加中草藥對于肉雞的免疫系統(tǒng)有一定作用，可促使肉雞對于注射疫苗產(chǎn)生較強的應答反應，從而產(chǎn)生較強的抗體，而微生物制劑對于機體的免疫增強作用不太明顯。

表1 不同飼養(yǎng)組禽流感和新城疫抗體的效價

2.2 抗體情況

通過對250份血清分別進行禽流感和雞新城疫的血凝（HA）和血凝抑制（HI）試驗，每份血清同時檢測禽流感和新城疫兩種抗體的滴度。試驗結(jié)果顯示，中藥組的抗體良好數(shù)明顯高于益生源組和對照組，說明在提高機體免疫力方面中藥的效果要比微生物制劑好，它有助于機體產(chǎn)生較多的抗體。而在3組中藥組中，扶正解毒散、清瘟敗毒散兩組的抗體效價明顯高于牛蟾顆粒組，說明清瘟敗毒散和扶正解毒散更能夠刺激機體產(chǎn)生相對較高的免疫力，讓機體在免疫應答中更具優(yōu)勢。因此規(guī)模養(yǎng)雞場應盡量使用以扶正解毒散、清瘟敗毒散為基礎(chǔ)的中藥制劑代替抗生素，既有利于提高雞的抵抗力，又有利于提高雞注射疫苗后的抗體產(chǎn)生。

3 結(jié)語

為了保障畜牧業(yè)的健康發(fā)展，在養(yǎng)雞業(yè)中使用中草藥代替抗生素是畜牧業(yè)的發(fā)展方向。甘肅是千年藥鄉(xiāng)，尤其是隴東南山區(qū)，更是一座天然的中藥材寶庫，有豐富的野生藥材，如甘草、當歸、大黃、黨參、青黛、荊芥、防風、羌活、板藍根、淫羊藿等，不僅品種大，而且質(zhì)量好。隨著鄉(xiāng)村振興的推進，中草藥的人工種植也在加快步伐，產(chǎn)生了不少廢棄物及半成品，應充分利用這些資源，篩選出經(jīng)濟、高效益的中草藥添加劑，從而推動綠色畜牧業(yè)的發(fā)展。