劉媛媛 田煦瑩 周益剛 李玉澤 張化為 鄧翀 宋小妹 張東東 王薇

(陜西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，陜西 咸陽 712046)

華中五味子為五味子科五味子屬植物，習稱“南五味子”，為攀援灌木，主要分布于四川、湖北、陜西、山西、云南等地，其果實作為南五味子藥材，應(yīng)用廣泛；其莖藤、根在民間作為血藤使用，具有養(yǎng)血消瘀、理氣化濕的效用[1]；華中五味子中的化學(xué)成分為木脂素、三萜、黃酮和簡單苯丙素等化合物[2-3]，其藥理活性主要有保肝[4]、抗氧化[5]、抗炎[6]、抗腫瘤[7]、抗病毒[8]、免疫調(diào)節(jié)[9]、神經(jīng)保護等[10]。長勝七，為五味子科五味子屬華中五味子(SchisandrasphenantheraRehd.et Wils)的根皮，作為陜西秦嶺特色中藥“太白七藥”之一，主要分布于秦嶺山脈和大巴山區(qū)各地，具有健脾消積、止咳化痰、活血消腫之功效[11-17]。近年來，對華中五味子的研究主要集中在地上部分，而對其根或根皮研究較少[18-19]。因此，本實驗對長勝七乙醇提取物的乙酸乙酯部位進行系統(tǒng)分離，以期尋找結(jié)構(gòu)新穎且具有良好活性的化合物，為進一步開發(fā)應(yīng)用長勝七提供科學(xué)依據(jù)，同時對合理開發(fā)和有效利用秦巴山區(qū)藥用植物資源提供理論基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

1.1儀器 Burker AVANCE 400核磁共振波譜儀(瑞士Burker公司)；6550Q-TOF質(zhì)譜儀(美國 Agilent Technologies)；WFH-203三用紫外分析儀(上海精科實業(yè)有限公司)；Sephadex LH-20(美國GE公司)；島津LC-6AD型半制備液相色譜儀(檢測器SPD-20A)；CAPCELL PAK C18MGⅡ半制備色譜柱，(10 mm×250 mm，5 μm)；薄層色譜用硅膠GF254(青島海洋化工有限公司)；硅膠柱色譜(100～200和200～300目；青島海洋化工廠產(chǎn)品)。

1.2試藥 長勝七藥材于2019年9月采自陜西秦嶺太白山，經(jīng)陜西中醫(yī)藥大學(xué)王薇教授鑒定為五味子科五味子屬華中五味子(SchisandrasphenantheraRehd.et Wils)的根皮；色譜甲醇，色譜乙腈(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司)；其他試劑均為分析純(天津市天力化學(xué)試劑有限公司)。

2 提取與分離

長勝七15 kg，用80%乙醇提取3次(每次5 kg，30 L，提取1.5 h)，減壓回收乙醇后得到浸膏，用水分散浸膏，依次用石油醚，乙酸乙酯萃取，得到乙酸乙酯部位(450 g)。乙酸乙酯部位(450 g)經(jīng)硅膠柱分離，以二氯甲烷-甲醇 (1∶0～0∶1)梯度洗脫，得到14個組分(SSE1 ～ SSE14)，SSE9經(jīng)硅膠柱層析，以二氯甲烷-甲醇(1∶0～0∶1)梯度洗脫，得到6個亞組分，(SSE9-1 ～ SSE9-6)，SSE9-3經(jīng)過sephadex LH-20(三氯甲烷-甲醇1∶1)凝膠柱色譜洗脫后，經(jīng)島津制備液相，甲醇-水(42∶58)等度洗脫得到化合物1(tR=24 min，12 mg)，化合物2(tR=28 min，16 mg)，化合物3(tR=35 min，9 mg)，化合物4(tR=40 min，8 mg)和化合物5(tR=44 min，10 mg)。SSE9-4通過半制備液相，乙腈-水(34∶66)等度洗脫得到化合物6(tR=13 min，8 mg)，化合物7(tR=16 min，9 mg)，化合物8(tR=20 min，11 mg)和化合物9(tR=31 min，13 mg)。其化學(xué)結(jié)構(gòu)見圖1。

圖1 化合物1～9結(jié)構(gòu)圖

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色粉末(甲醇)，ESI-MSm/z:257 ([M+H]+)。1H-NMR (400 MHz，CD3OD)δ:3.75 (2H，dd，J=5.1，2.2 Hz，CH2-1)，4.15 (1H，m，H-2)，3.75 (2H，dd，J=5.1，2.2 Hz，CH2-3)，3.56 (2H，t，J=6.5 Hz，CH2-1′)，1.94-1.74 (2H，m，CH2-2′)，2.63 (2H，t，J=8.0，CH2-3′)，6.85 (1H，d，J=2.0 Hz，H-2″)，6.99 (1H，d，J=8.1 Hz，H-5″)，6.73 (1H，dd，J=8.1，2.0 Hz，H-6″)，3.83 (3H，s，-OCH3)；13C-NMR (100 MHz，CD3OD)δ:62.0 (CH2-1，CH2-3)，83.3 (C-2)，62.2 (CH2-1′)，35.5 (CH2-2′)，32.7 (CH2-3′)，138.3 (C-1″)，114.1 (C-2″)，152.0 (C-3″)，146.8 (C-4″)，119.4 (C-5″)，121.9 (C-6″)，56.5 (-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道[20]基本一致，鑒定化合物1為lawsorosemarinol。

化合物2：白色粉末(甲醇)，ESI-MSm/z:149 ([M+H]+)。1H-NMR (400 MHz，CD3OD)δ:7.66 (1H，d，J=16.0 Hz，H-β)，6.48 (1H，d，J=16.0 Hz，H-α)，7.61 ～ 7.34 (5H，m，Ar-H)；13C-NMR (100 MHz，CD3OD)δ:170.3 (-COOH)，146.0 (C-1)，129.1 (C-2，C-6)，135.9 (C-4)，129.9 (C-3，C-5)，131.3 (C-β)，119.7 (C-α)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道[21]基本一致，鑒定化合物2為cinnamic acid。

化合物3：白色粉末(甲醇)，ESI-MSm/z:229 ([M+H]+)。1H-NMR (400 MHz，CD3OD)δ:6.91 (1H，d，J=1.7 Hz，H-2)，6.80 (1H，d，J=7.8 Hz，H-5)，6.74 (1H，dd，J=7.8，1.7 Hz，H-6)，4.07 (1H，d，J=6.5 Hz，H-7)，3.66 (1H，td，J=6.5，3.8 Hz，H-8)，3.42 (1H，dd，J=11.3，3.8 Hz，H-9a)，3.31 (1H，dd,J=11.3，6.5 Hz，H-9b)，3.85 (3H，s，3-OCH3)，3.21 (3H，s，7-OCH3)；13C-NMR (100 MHz，CD3OD)δ：131.5 (C-1)，111.8 (C-2)，149.1 (C-3)，147.5 (C-4)，116.0 (C-5)，121.6 (C-6)，77.1 (C-7)，85.6 (C-8)，63.9 (CH2-9)，56.8 (3-OCH3)，56.3 (7-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道[22]基本一致，鑒定化合物3為erythro-7-methoxyguaiacylglycerol。

化合物4：白色粉末(甲醇)，ESI-MSm/z:213 ([M+H]+)。1H-NMR (400 MHz，CD3OD)δ:4.39 (1H，d，J=5.3 Hz，H-1)，3.82 (1H，m，H-2)，1.12 (3H，d，J=6.4 Hz，CH3-3)，6.98 (1H，d，J=1.8 Hz，H-2′)，6.74 (1H，d,J=8.2 Hz，H-5′)，6.74 (1H，dd,J=8.2，1.8 Hz，H-6′)，3.86 (3H，s，-OCH3)；13C-NMR (100 MHz，CD3OD)δ:134.8 (C-1′)，111.7 (C-2′)，148.7 (C-3′)，146.8 (C-4′)，115.6 (C-5′)，120.9 (C-6′)，72.4 (C-1)，79.0 (C-2)，18.4 (CH3-3)，56.3 (-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道[23]基本一致，鑒定化合物4為erythro-1-(3-methoxy-4-hydroxy-phenyl)-propan-1,2-diol。

化合物5：白色粉末(甲醇)，ESI-MSm/z:199 ([M+H]+)。1H-NMR (400 MHz，CD3OD)δ:6.81 (1H，d，J=1.9 Hz，H-2)，6.70 (1H，d，J=8.0 Hz，H-5)，6.65 (1H，dd，J=8.0，1.9 Hz，H-6)，2.73 (1H，dd，J=13.8，5.8 Hz，H-7a)，2.59 (1H，dd，J=13.8，7.4 Hz，H-7b)，3.76 (1H，m，H-8)，3.49 (1H，dd，J=11.1，4.5 Hz，H-9a)，3.43 (1H，dd，J=11.1，6.3 Hz，H-9b)，3.83 (3H，s，-OCH3)；13C-NMR (100 MHz，CD3OD)δ:131.4 (C-1)，114.1 (C-2)，148.8 (C-3)，146.1 (C-4)，116.1 (C-5)，122.8 (C-6)，40.5 (CH2-7)，74.7 (C-8)，66.5 (CH2-9)，56.3 (-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道[24]基本一致，鑒定化合物5為3-(4-Hydroxy-3-methoxy phenyl)propan-1,2-diol。

化合物6：白色粉末(甲醇)，ESI-MSm/z:199 ([M+H]+)。1H-NMR (400 MHz，CD3OD)δ:4.24 (1H，d，J=7.3 Hz，H-1)，3.82 (1H，m，H-2)，0.95 (3H，d，J=6.3 Hz，CH3-3)，6.76 (1H，d，J=8.2 Hz，H-2′)，6.94 (1H，d，J=1.5 Hz，H-5′)，6.73 (1H，dd,J=8.2，1.5 Hz，H-6′)，3.85 (3H，s，-OCH3)；13C-NMR (100 MHz，CD3OD)δ:73.0 (C-1)，80.3 (C-2)，19.3 (CH3-3)，134.8 (C-1′)，111.6 (C-2′)，148.9 (C-3′)，147.2 (C-4′)，115.8 (C-5′)，121.0 (C-6′)，56.4 (-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道[25]基本一致，鑒定化合物6為threo-1-(3-methoxy-4-hydroxy-phenyl)-propan-1,2-diol。

化合物7：白色粉末(甲醇)，ESI-MSm/z:213 ([M+H]+)。1H-NMR (400 MHz，CD3OD)δ:5.11 (1H，dd，J=5.2，3.7 Hz，H-2)，3.74 (1H，dd，J=11.7，5.2 Hz，H-3a)，3.87 (1H，dd，J=11.7，3.7 Hz，H-3b)，7.56 (1H，brs，H-2′)，6.88 (1H，d，J=8.1 Hz，H-5′)，7.58 (1H，dd，J=2.4，8.4 Hz，H-6′)，3.92 (3H，s，-OCH3)；13C-NMR (100 MHz，CD3OD)δ:199.6 (C-1)，75.5 (C-2)，66.3 (CH2-3)，128.1 (C-1′)，112.5 (C-2′)，149.3 (C-3′)，153.9 (C-4′)，115.9 (C-5′)，125.1 (C-6′)，56.5 (-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道[26]基本一致，鑒定化合物7為C-veratroylglycol。

化合物8：白色粉末(甲醇)，ESI-MSm/z:215 ([M+H]+)。1H-NMR (400 MHz，CD3OD)δ:7.02 (1H，d，J=1.8 Hz，H-2)，6.79 (1H，d，J=8.1 Hz，H-5)，6.83 (1H，dd，J=8.1，1.8 Hz，H-6)，4.54 (1H，d，J=6.4 Hz，H-7)，3.69 (1H，m，H-8)，3.50 (1H，dd，J=11.3，3.9 Hz，H-9a)，3.42 (1H，J=11.3，6.5 Hz，H-9b)，3.88 (3H，s，-OCH3)；13C-NMR (100 MHz，CD3OD)δ:134.8 (C-1)，111.5 (C-2)，148.8 (C-3)，147.1 (C-4)，115.8 (C-5)，120.6 (C-6)，77.6 (C-7)，75.4 (C-8)，64.2 (CH2-9)，56.3 (-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道[27]基本一致，鑒定化合物8為guaiacylglycerol。

化合物9：白色粉末(甲醇)，ESI-MSm/z:215 ([M+H]+)。1H-NMR (400 MHz，CD3OD)δ:7.03 (1H，d，J=1.9 Hz，H-2)，6.79 (1H，d，J=8.1 Hz，H-5)，6.85 (1H，dd，J=8.1，1.9 Hz，H-6)，4.55 (1H，d，J=6.3 Hz，H-7)，3.76 (1H，m，H-8)，3.69 (1H，dd，J=11.3，3.8 Hz，H-9a)，3.60 (1H，dd，J=11.3，6.6 Hz，H-9b)，3.89 (3H，s，-OCH3)；13C-NMR (100 MHz，CD3OD)δ:134.8 (C-1)，111.9 (C-2)，148.8 (C-3)，147.0 (C-4)，115.7 (C-5)，121.0 (C-6)，76.6 (C-7)，76.1 (C-8)，64.5 (CH2-9)，56.4 (-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道[27]基本一致，鑒定化合物9為erythro- guaiacylglycerol。

4 細胞毒活性測試

采用MTT法測定了化合物1～9對三種腫瘤細胞(人肺癌細胞A549、人結(jié)直腸癌細胞HCT116和SW620)的細胞毒活性，實驗所用儀器材料以及實驗過程均與本課題組前期報道一致[18]，順鉑為陽性對照，對A549、HCT116和SW620細胞的IC50值分別為(32.06±1.31)μM，(43.54±3.30)μM和(32.47±3.39)μM。實驗結(jié)果表明化合物3對HCT116細胞株具有細胞毒活性，IC50值為(20.40±1.37)μM，其余化合物的IC50值均大于50 μM。

5 結(jié)論

從長勝七中共分離鑒定了9個簡單苯丙素類化合物，其中化合物1～5，8，9首次從該植物中分離得到，這進一步豐富了長勝七的化學(xué)成分。細胞毒活性實驗顯示化合物3具有細胞毒活性，但本文僅測定了9個化合物的體外細胞毒活性，關(guān)于這些化合物的其他活性有待于進一步研究。