常利民 張洋 蔣文菊 施鵬婓 鄭園 汪春明 王姝葦

（1.中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院綜合檢測中心 北京 100123；2.中輕檢驗(yàn)認(rèn)證有限公司；3.中檢科（北京）測試技術(shù)有限公司）

1 前言

中國作為世界最大的漁業(yè)養(yǎng)殖國和水產(chǎn)品貿(mào)易國，水產(chǎn)品產(chǎn)量多年穩(wěn)居世界首位，隨著魚、蝦等水產(chǎn)品的消耗量不斷增加，水產(chǎn)品的質(zhì)量安全問題受到廣泛關(guān)注。擬除蟲菊酯類農(nóng)藥被普遍應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖[1]和農(nóng)業(yè)作業(yè)[2]，其性質(zhì)穩(wěn)定、不易降解，殘留物會(huì)引起哺乳動(dòng)物的神經(jīng)、遺傳和免疫系統(tǒng)的病變[3]，可隨食物鏈傳遞，在人體內(nèi)富集。

但多年來水產(chǎn)品質(zhì)量安全的關(guān)注點(diǎn)多集中于獸藥殘留類項(xiàng)目[4-6]，對水產(chǎn)品中農(nóng)藥的殘留關(guān)注較少，關(guān)于擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留的分析也主要集中于果蔬方面，一般采用凝膠滲透色譜凈化的前處理方法，所用設(shè)備昂貴，且操作復(fù)雜，不適合大范圍推廣。乙腈飽和正己烷的除脂效果良好[7-8]，氟羅里硅土柱凈化是常用且成熟的農(nóng)藥殘留檢測手段，與凝膠滲透色譜凈化相比，具有簡單、易操作、經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn)，故本文對此進(jìn)行研究，以期為相關(guān)人員提供參考。

2 材料與方法

2.1 儀器與試劑

氣相色譜儀（Agilent7890，美國安捷倫公司）；氣相色譜柱（HP-5，規(guī)格：30 m×0.25 mm，0.25 μm，美國安捷倫公司）；渦旋混勻器（VORTEX GENIE2，美國Scientific Industries公司）；固相萃取裝置（VISIPREP DL，美國色譜科公司）；離心機(jī)（CR21N，日本日立公司）；振蕩器（SR-2DS，日本TAITEC公司）；氮吹儀（EVA50A，中國普立泰科公司）；超純水系統(tǒng)（Milli-Q，美國密理博公司）；移液槍（德國艾本德公司）；分析天平（XS105&PL303，瑞士梅特勒-托利多集團(tuán)）。

氰戊菊酯農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品、溴氰菊酯農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品、氯氰菊酯農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品（純度≥95%，德國Dr Ehrenstorfer）；乙腈、正己烷（色譜純，美國費(fèi)希爾公司）；氯化鈉、丙酮（分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；固相萃取柱（Mega Be-Fl，1 g/6 mL，天津博納艾杰爾科技有限公司）。

樣品來源于中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院綜合檢測中心樣品間。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

分別準(zhǔn)確稱?。?0 mg的標(biāo)準(zhǔn)品，置于10 mL容量瓶中；用正己烷溶解并定容，得到適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液A；準(zhǔn)確吸取適量的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液A，置于10 mL容量瓶中，得到10 mg/L標(biāo)準(zhǔn)混合溶液B；將其逐級(jí)稀釋為1.0mg/L標(biāo)準(zhǔn)混合溶液C；準(zhǔn)確吸取適量1 mg/L標(biāo)準(zhǔn)混合溶液，用正己烷逐級(jí)稀釋成質(zhì)量濃度為5、10、25、50、100、200、500 μg/L的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

2.3 氣相色譜條件

開始溫度160℃，保持1min；30℃/min升至250℃，保持2 min；5℃/min升至280℃，保持8 min。進(jìn)樣口溫度：230℃；檢測器溫度：310℃；進(jìn)樣量：1 μL；載氣：氦氣；流速：1.5 mL/min。

2.4 提取溶劑的選擇

采用乙腈作為提取溶劑，與丙酮和乙酸乙酯相比，乙腈無法對大量的動(dòng)物脂肪和親脂性干擾物進(jìn)行提取，且對氰戊菊酯、氯氰菊酯和溴氰菊酯的溶解度較大[9]。因用乙腈提取會(huì)使蛋白質(zhì)變性，導(dǎo)致樣品成團(tuán)而提取不完全，故提取前需加入5 mL超純水。

2.5 樣品前處理

稱取5 g樣品，加入5 mL超純水；劇烈渦旋30 s，用15 mL乙腈振蕩提取10 min；加入1.5 g氯化鈉，渦旋1 min；以5 000 r/min離心5 min，重復(fù)提取2次；合并上清液，置于50 mL離心管中；加入10 mL乙腈飽和正己烷，振蕩2 min；以5 000 r/min離心5 min，棄去正己烷層[10]，重復(fù)2次；將提取液轉(zhuǎn)移至100 mL雞心瓶中，40℃旋蒸至近干；加入3 mL正己烷復(fù)溶，待凈化。

依次用5 mL丙酮、5 mL正己烷預(yù)淋洗氟羅里硅土柱，倒入上述待凈化溶液，棄去流出液；用3 mL丙酮+正己烷（10+90，V/V）洗脫2次[11]；用10 mL氮吹管接收洗脫液，40℃氮吹至近干；加入1 mL正己烷復(fù)溶，待測。

3 結(jié)果與分析

3.1 氰戊菊酯、氯氰菊酯和溴氰菊酯的色譜圖

采用HP-5色譜柱進(jìn)行采集，5 μg/kg添加水平下的樣品色譜圖見圖1。從圖1可以看出，3種化合物的分離效果很好，在12 min內(nèi)可完全分離。

圖1 氰戊菊酯、氯氰菊酯和溴氰菊酯的色譜圖

3.2 方法回收率、精密度和定量限

在空白魚、蝦樣品中，加入氰戊菊酯、氯氰菊酯和溴氰菊酯的標(biāo)準(zhǔn)混合溶液C，使其添加水平為5 μg/kg、10 μg/kg和50 μg/kg，按“2.4”項(xiàng)進(jìn)行前處理，每個(gè)添加水平重復(fù)測定6次，計(jì)算樣品加標(biāo)平均回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），結(jié)果見表1。結(jié)果顯示，平均回收率在70%～100%，RSD＜15%，符合GB 27404-2008對實(shí)驗(yàn)室內(nèi)變異系數(shù)的要求。在最低添加濃度5 μg/kg，以10倍信噪比計(jì)算樣品中氯氰菊酯、氰戊菊酯和溴氰菊酯的定量限（LOQ），低于GB 29705-2013所要求的定量限（LOQ）。

表1 魚、蝦加標(biāo)回收率、精密度及定量限（n=6）

3.3 實(shí)際樣品測定

采用該方法檢測企業(yè)送檢和市場隨機(jī)抽檢的10批魚、蝦樣品，同一類樣品做2個(gè)加標(biāo)實(shí)驗(yàn)，每個(gè)樣品平行測定2次。結(jié)果顯示，樣品均未檢出該方法所涉及的農(nóng)藥殘留，回收率在70%～100%之間。

4 結(jié)論

本文采用乙腈飽和正己烷結(jié)合氟羅里硅土柱對魚、蝦中氰戊菊酯、氯氰菊酯和溴氰菊酯進(jìn)行測定。結(jié)果表明，3種農(nóng)藥在5 μg/kg、10 μg/kg和50 μg/kg 3個(gè)添加水平的回收率、準(zhǔn)確度、精密度均良好，能夠滿足實(shí)驗(yàn)室檢測要求。該方法可有效檢測魚、蝦中的氰戊菊酯、氯氰菊酯和溴氰菊酯殘留，且具有準(zhǔn)確、可靠、有效、經(jīng)濟(jì)的優(yōu)點(diǎn)。