陳旭晉 苑華寧 陸宇陽 周鋒杰 曹佳

（蘇州市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)測中心 江蘇 蘇州 215000）

1 前言

克倫特羅屬于β受體激動劑，是一種常見的腎上腺素類神經(jīng)興奮劑，將其加入飼料中，可以明顯促進(jìn)動物生長，改善肌肉和脂肪的分配比率，提高瘦肉率，因此被稱為“瘦肉精”。其易在動物的腹膜組織中累積，人類攝入含β-受體激動劑的動物組織會引起急性中毒，因此我國農(nóng)業(yè)部明令禁止在動物生產(chǎn)中使用。但在利益驅(qū)動下，仍有部分養(yǎng)殖業(yè)者違規(guī)使用，故相關(guān)檢測監(jiān)管工作具有重要意義。

不確定度是判斷檢測結(jié)果是否真實(shí)有效的一個(gè)重要參考指標(biāo)，檢測機(jī)構(gòu)在出具報(bào)告時(shí)，應(yīng)當(dāng)附上不確定度分析，以體現(xiàn)其能力水平[1-2]。目前，對克倫特羅的檢測主要采用液質(zhì)聯(lián)用法[3-4]。本文參考JJF 11 35-2005《化學(xué)分析測量不確定度評定》和JJF 1059.1-2012《測量不確定度評定與表示》，對本實(shí)驗(yàn)室液質(zhì)聯(lián)用儀測定豬肝克倫特羅的不確定度進(jìn)行分析，從而更準(zhǔn)確地反映豬肝中克倫特羅的含量，以期為市場監(jiān)管提供更可靠的數(shù)據(jù)。

2 材料與方法

2.1 材料與試劑

甲醇、乙腈、乙酸乙酯、甲酸（色譜純，美國霍尼韋爾公司）；鹽酸克倫特羅對照品（純度：99.4%，德國Dr.Ehrenstorfer公司）。

2.2 儀器與設(shè)備

串聯(lián)四極桿質(zhì)譜系統(tǒng)（QTRAP 5500，美國AB SCIEX公司）；超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀（H_Class，美國Waters公司）；百分之一電子天平（BSA2202SCW，德國賽多利斯集團(tuán)）；十萬分之一電子天平（BT25S，德國賽多利斯集團(tuán)）。

2.3 實(shí)驗(yàn)方法

2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配置

精密稱取鹽酸克倫特羅對照品11.42 mg，置于100 mL容量瓶中；用甲醇溶解并稀釋，即得濃度為100 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液。

使用1 mL移液器量取100 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲備液1 mL，置于100 mL容量瓶中；用甲醇定容，即得1 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)中間液；量取1 mL標(biāo)準(zhǔn)中間液，置于100 mL容量瓶中，用0.1%甲酸溶液定容，即得10 ng/mL標(biāo)準(zhǔn)工作液。

2.3.2 樣品前處理

參照農(nóng)業(yè)部1025號公告-18-2008《動物源性食品β-受體激動劑殘留檢測液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》4.4.1～4.4.4步驟進(jìn)行操作。

2.3.3 測定條件

液相條件：色譜柱：ACQUITY UPLC HSS T3柱（2.1 mm×100 mm，1.8 μm）；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：10 μL；流動相：流動相A：0.1%甲酸乙腈溶液；流動相B：0.1%甲酸水溶液。

質(zhì)譜條件：離子源：電噴霧離子源（ESI）；掃描方式：正離子掃描；檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；離子化電壓：5 500 V；溫度：550℃。

3 結(jié)果與分析

3.1 建立數(shù)學(xué)模型

豬肝中克倫特羅含量按式（1）計(jì)算：

式中，x——試樣中克倫特羅殘留量（μg/kg）；c——試樣溶液中克倫特羅的濃度（ng/mL）；V——溶解殘余物所用溶液體積（mL）；m——試料的質(zhì)量（g）；f（rec）——校正因子。

3.2 不確定度來源

根據(jù)數(shù)學(xué)模型，影響豬肝中克倫特羅含量的不確定度的來源主要有：稱量樣品、配置標(biāo)準(zhǔn)儲備液和工作液、配置校準(zhǔn)曲線溶液、樣品均一性引入的不確定度等。

3.3 各個(gè)不確定度分量評定

3.3.1 稱量樣品引入的不確定度Urel（m）

（1）重復(fù)稱量樣品所產(chǎn)生的誤差：重復(fù)稱樣6次，稱樣量分別 是2.01、2.01、2.01、2.00、2.00、2.01g，平均值為2.01 g，單次測量結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)不確定度以標(biāo)準(zhǔn)偏差表征，U（m1）=0.005 164 g。

（2）使用天平所產(chǎn)生的誤差：查閱天平的檢定證書可知，天平的測量不確定度為0.02 g（k=2）。試驗(yàn)中共使用天平2次，分別是天平去皮和豬肝樣品稱重，因此天平誤差引起的不確定度0.014 1 g。故

3.3.2 標(biāo)準(zhǔn)儲備液配置所產(chǎn)生的不確定度Urel（C）

（1）標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)本身引起的不確定度：查閱標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的證書可知，其擴(kuò)展不確定度為±0.2%（k=2），假設(shè)置信水平P=95%，則標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度Urel（i）=0.001。

（2）固體標(biāo)準(zhǔn)品稱量過程中產(chǎn)生的不確定度：查閱天平的檢定證書可知，測量不確定度為0.03 mg（k=2），稱樣量為0.011 142 g，故稱量過程中相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度Urel（m3）=0.002 63。

（3）容量瓶定容產(chǎn)生的不確定度：查閱100 mL A級容量瓶檢定證書可知，100 mL容量瓶引起的不確定度為0.018 mL（k=2），則U1（V1）=0.009 mL；實(shí)驗(yàn)室溫度誤差引起的不確定度，實(shí)驗(yàn)室溫度為20±5℃，甲醇的溫度膨脹系數(shù)為1.1×10-3，溫度引起的不確定度為，用甲醇定容標(biāo)準(zhǔn)儲備液的相對不確定度為Urel（V1）=0.003 18，配置標(biāo)準(zhǔn)儲備液所產(chǎn)生的不確定度為Urel（C）=0.004 25。

3.3.3 標(biāo)準(zhǔn)工作液配置所產(chǎn)生的不確定度Urel（C-2）

標(biāo)準(zhǔn)工作液的配置過程引起的不確定度，主要來源于容量瓶定容和移液器移液所產(chǎn)生的不確定度。實(shí)驗(yàn)室溫度為（20±5）℃，水的溫度膨脹系數(shù)是2.1×10-4，溫度引起的不確定度為U2（V2）=0.060 6 mL。故用0.1%甲酸水定容標(biāo)準(zhǔn)工作液的相對不確定度為Urel（V2）=0.000 632。查閱1 mL移液器檢定證書可知，其擴(kuò)展不確定度為0.54 μL（k=2），則U1（V1mL）=0.27 μL。由溫度變化引起的不確定度為U2（V1mL）=0.003 18 mL，則Urel（V1mL）=0.003 19。已知，100 mL容量瓶引起的不確定度為U1（V1）=0.009 mL，用甲醇定容至100 mL的相對不確定度為Urel（V1）=0.003 18。則標(biāo)準(zhǔn)工作液配置過程所產(chǎn)生的不確定度為0.005 56

3.3.4 標(biāo)準(zhǔn)系列溶液所產(chǎn)生的不確定度Urel（std）

取勻漿后的空白樣品2 g，置于50 mL離心管中，平行操作6次。分別向其中添加適量標(biāo)準(zhǔn)工作液，詳見表1，按照“2.3”中的樣品前處理步驟，得到空白添加標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。

表1 克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)系列溶液添加結(jié)果

由表1可知，100 μL移液槍的擴(kuò)展不確定度為0.06 μL（k=2），則U1（V100μL）=0.03 μL；由溫度變化引起的不確定度為U2（V100μL）=0.060 6 μL，則U（V100μL）使用2次，分別移取50 μL和100 μL，移取過程相互獨(dú)立，故使用100 μL移液槍產(chǎn)生的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度

200 μL移液槍擴(kuò)展不確定度為0.12 μL（k=2），則U1（V200μL）=0.06 μL；由溫度變化引起的不確定度為U2（V200μL）=0.121 μL，則U（V200μL）=0.135 μL；使用1次，移取200 μL，故使用200 μL移液槍產(chǎn)生的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度Urel（V200μL）=0.000 675。

1 mL移液槍擴(kuò)展不確定度為0.54 μL（k=2），則U1（V1mL）=0.27 μL；由溫度變化引起的不確定度為U2（V1mL）=0.000 606 mL，則U（V1mL）=0.000 634；使用2次，分別移取0.5 mL和1.0 mL，且移取過程相互獨(dú)立，故使用1 mL移液槍產(chǎn)生的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度Urel（V1mL）=0.001 42。

5 mL移液槍擴(kuò)展不確定度為4 μL（k=2），則U1（V5mL）=2μL；由溫度變化引起的不確定度為U2（V5mL）=0.003 03 mL，則U（V5mL）=0.003 63 mL；使用1次，移取2 mL，故使用5 mL移液槍產(chǎn)生的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度Urel（V5mL）=0.001 82。

則配置克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液過程所產(chǎn)生的不確定度為Urel（std）=0.002 84。

3.3.5 樣品均一性產(chǎn)生的不確定度Urel（uni）

對于實(shí)驗(yàn)過程中由樣品均一性等引起的不確定度，本文通過6次平行實(shí)驗(yàn)測量結(jié)果的平均值的標(biāo)準(zhǔn)偏差來衡量，結(jié)果見表2，故

表2 樣品6平行實(shí)驗(yàn)測定結(jié)果

3.3.6 實(shí)驗(yàn)過程中其他因素引起的不確定度Urel（rec）

本文以回收率的形式，評價(jià)檢測過程中樣品提取不充分、樣品凈化過程中存在損失或污染、儀器不穩(wěn)定及其他隨機(jī)因素引起的不確定度。通過基質(zhì)添加濃度為2.00 μg/kg，平行4份樣品進(jìn)行添加回收實(shí)驗(yàn)，計(jì)算回收率。

結(jié)果顯示，回收率分別為84.5%、88.0%、94.0%、93.0%。取矩形分布，按公式計(jì)算，則b+=94%-100%=-6%，b-=100%-84.5%=15.5%，故Urel（rec）=0.027 4。

3.4 不確定度分量的合成

將所有產(chǎn)生不確定度的分量進(jìn)行合成，得到豬肝中克倫特羅含量的總合成相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度Urel==0.032。則相對擴(kuò)展不確定度（置信概率95%，k=2）為：Urel×k=0.032×2=0.064。豬肝中克倫特羅測定結(jié)果為2.04 μg/kg，因此測量結(jié)果的擴(kuò)展不確定度為：U=0.064×2.04=0.13 μg/kg。

綜上所述，豬肝中克倫特羅含量測定結(jié)果表示為：w=2.04±0.13 μg/kg（置信概率95%，k=2）。

4 結(jié)論

本文通過建立數(shù)學(xué)模型對液質(zhì)聯(lián)用法測定豬肝中克倫特羅含量的不確定度進(jìn)行分析，結(jié)果表明，樣品提取效率、樣品凈化過程中的損失或污染、樣品的均一性對檢測結(jié)果的影響較大。應(yīng)當(dāng)規(guī)范檢測流程，增加平行樣品，定期檢定儀器，以減少檢測誤差，提高結(jié)果準(zhǔn)確度。