林 輝,劉艷玲,羅海凌,王 彤,2,林占熺,蘇德偉,林興生,林冬梅 *
(1.國(guó)家菌草工程技術(shù)研究中心,福建 福州 350010;2.福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,福建 福州 350010)
【研究意義】蘆竹(Arundo donaxL.)屬被子植物門的禾本科蘆竹屬,是一種多年生的草本植物,其植株高大,產(chǎn)量高,生長(zhǎng)3年的蘆竹生物量可達(dá)35 kg·m?2。蘆竹綜合利用價(jià)值高,可生產(chǎn)食用菌、板材、紙張,作為生物質(zhì)能源發(fā)電、生產(chǎn)沼氣,還可用于生態(tài)治理等。蘆竹對(duì)土壤酶活及土壤微生物群落的影響的研究,可為蘆竹的推廣種植提供理論基礎(chǔ),促進(jìn)蘆竹的開發(fā)利用,為實(shí)現(xiàn)雙碳目標(biāo)貢獻(xiàn)力量?!厩叭搜芯窟M(jìn)展】土壤微生物作為陸地生態(tài)系統(tǒng)中的重要角色,參與土壤中有機(jī)質(zhì)分解與轉(zhuǎn)換、養(yǎng)分的循環(huán)與利用和土壤結(jié)構(gòu)與形成等諸多主要生態(tài)學(xué)過(guò)程,能夠促進(jìn)土壤物質(zhì)循環(huán)、穩(wěn)定與保持土壤的生產(chǎn)力和健康,且作物的生長(zhǎng)與病害、土壤環(huán)境及溫室氣體的排放等都與土壤微生物密切相關(guān)[1?5],而土壤微生物的多樣性和分布與土壤肥力及其所處的環(huán)境亦密切相關(guān)[6]。Zimmerman等研究表明,土壤細(xì)菌、真菌和放線菌可決定土壤微生物總量的分布以及有機(jī)物的分解與轉(zhuǎn)化[7];此外,土壤微生物還是土壤酶的主要來(lái)源,土壤酶幾乎參與土壤中所有的生物化學(xué)反應(yīng),酶活性表征著土壤中物質(zhì)代謝的旺盛程度,是土壤肥力的一個(gè)重要指標(biāo),同時(shí)土壤酶影響著土壤微生物數(shù)量和群落結(jié)構(gòu)[8?9]。菌草是指所含營(yíng)養(yǎng)適合食用菌、藥用菌等微生物生長(zhǎng)需要,并具有綜合開發(fā)利用價(jià)值的草本植物[10?13],主要包括禾本科、里白科等共計(jì)20多個(gè)屬46個(gè)種的植物[14?15],蘆竹屬菌草品種是菌草的重要組成部分。20世紀(jì)80年代,為了替代林木作為培養(yǎng)基栽培食(藥)用菌,菌草概念應(yīng)運(yùn)而生,隨之菌草栽培食藥用菌、菌草生態(tài)治理、菌草菌物飼料等應(yīng)用方面的研究相繼開展[16],實(shí)現(xiàn)了在促進(jìn)食用菌產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的同時(shí),經(jīng)濟(jì)、生態(tài)與社會(huì)三者效益的有機(jī)統(tǒng)一[12]。菌草的太陽(yáng)能轉(zhuǎn)化率為闊葉樹的4~6倍,根量為一般農(nóng)作物的3~5倍,維系土壤肥力比農(nóng)作物高15倍。因此,它對(duì)土壤的防沖能力和吸附雨水能力要強(qiáng)于森林和農(nóng)作物,故被稱作為環(huán)境保護(hù)和修復(fù)的最好植物之一[17]。【本研究切入點(diǎn)】對(duì)于蘆竹屬菌草,在其綜合利用方面有較多的研究,但在生態(tài)治理方面,有研究表明在荒漠化土壤種植Lz1可顯著提高沙質(zhì)土壤有機(jī)質(zhì)含量,土壤中活性酶及微生物總量也顯著增多[18],而對(duì)其他蘆竹品種以及在黏質(zhì)土的微生物種群情況,則有待深入研究。【擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題】通過(guò)對(duì)種植蘆竹屬6種不同菌草后的土壤開展研究,解析種植前后土壤酶活和土壤微生物群落結(jié)構(gòu)的變化。采用Illumina-MiSeq高通量測(cè)序技術(shù),對(duì)種植蘆竹屬6種不同菌草和未種植任何植物的土壤微生物進(jìn)行測(cè)序,發(fā)現(xiàn)和挖掘蘆竹屬不同菌草的種植對(duì)土壤微生物群落多樣性的影響,以及土壤微生物多樣性與土壤養(yǎng)分、土壤酶活之間的關(guān)系,為做好菌草種植、推廣以及菌草生態(tài)治理等提供參考和借鑒。
位于福州市閩侯縣福建農(nóng)林大學(xué)旗山校區(qū)內(nèi),國(guó)家菌草工程技術(shù)研究中心菌草種質(zhì)資源圃(N26.05°,E119.18°),該地區(qū)屬于亞熱帶海洋性季風(fēng)氣候,氣溫適宜,溫暖濕潤(rùn),四季常青,陽(yáng)光充足,雨量充沛,霜少無(wú)雪,夏長(zhǎng)冬短,無(wú)霜期達(dá)326 d,年平均日照數(shù)為 1 700~1 980 h;年平均降水量為 900~2 100 mm;年平均氣溫為 20~25 ℃,年相對(duì)濕度約77%。
采樣點(diǎn)為種植5年后的蘆竹屬(ArundoL.)6個(gè)菌草品種,由福建農(nóng)林大學(xué)國(guó)家菌草工程技研究中心菌草種質(zhì)資源圃提供,其中綠洲1號(hào)Lz1(H)、綠洲2號(hào)Lz2(I)、綠洲3號(hào)Lz3(J)、綠洲5號(hào)Lz5(K)、綠洲6號(hào)Lz6(L)和綠洲9號(hào)Lz9(M)分別來(lái)自萊索托、山東、福建、厄立特里亞、西藏和陜西,空白對(duì)照(CK)為中心菌草種質(zhì)資源圃周圍未種植任何植物的區(qū)域。每種菌草種植區(qū)30 m2,種植區(qū)內(nèi)隨機(jī)選取3處,根據(jù)5點(diǎn)取樣法在每個(gè)采樣點(diǎn)取樣,去除表層殘葉和浮土,取根系周圍5 ~30 cm深度的土壤,每處采集的5點(diǎn)土樣混勻?yàn)?個(gè)樣品,每個(gè)試驗(yàn)區(qū)分別采集3個(gè)樣品。采集樣品后,去除植物根、動(dòng)物殘骸及其他雜質(zhì),混勻過(guò)2 mm篩,一部分保存在10 mL無(wú)菌離心管中,用干冰保存送往北京奧維森基因科技有限公司,對(duì)采集的土壤樣品進(jìn)行微生物多樣性檢測(cè);另一部分將采集的土壤放入密封袋中,常溫避光條件下風(fēng)干、磨細(xì)和過(guò)篩,進(jìn)行土壤樣品分析,均隨機(jī)采集3個(gè)生物學(xué)重復(fù)。
土壤pH值采用pH計(jì)測(cè)定,土壤有機(jī)碳、速效磷、速效氮和全氮等養(yǎng)分采用《土壤農(nóng)化分析》[19]的方法進(jìn)行測(cè)定;土壤酶活性采用蘇州科銘生物科技有限公司購(gòu)買的試劑盒測(cè)定。
取土壤樣品 0.5 g,根據(jù) E.Z.N.A.Soil DNAKit試劑盒說(shuō)明書操作流程提取土壤總DNA,然后對(duì)提取的土壤總DNA分別進(jìn)行細(xì)菌16SrDNA和真菌ITS擴(kuò)增。將真菌和細(xì)菌的擴(kuò)增子構(gòu)建Miseq文庫(kù),Illumina Miseq上機(jī)測(cè)序,利用Trimmomatic、Pear對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行質(zhì)控、過(guò)濾、拼接得到有效數(shù)據(jù),然后對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行個(gè)性化分析。
采用 SPSS 23.0 和 GraphPad Prism 8.3 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,采用SPSS單因素(one-way ANOVA)法進(jìn)行方差分析和差異顯著性比較,用Pearson法進(jìn)行相關(guān)性分析。采用GraphPad Prism 8.3軟件作圖。圖表中數(shù)據(jù)均為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差。
2.1.1 土壤基礎(chǔ)養(yǎng)分 從表1看出,蘆竹屬不同菌草種植區(qū)域的土壤均偏酸性,其中Lz3的土壤pH值最低,為5.43;Lz6土壤pH值6.21,且與對(duì)照組、Lz1、Lz2、Lz3和Lz9之間存在顯著差異(P<0.05)。種植菌草的土壤中速效磷(AP)含量均高于對(duì)照組未種植菌草的AP含量,其中Lz9和Lz1土壤速效磷含量最高,均大于 8.00 mg·kg?1,差異顯著(P<0.05)。土壤中的速效氮(AN)和全氮(TN)含量基本一致,均是Lz1含量最高,且顯著高于未種植菌草的土壤速效氮和全氮含量(P<0.05)。土壤中有機(jī)碳(SOC)含量亦是Lz1最高,Lz9和Lz3次之,與未種植菌草對(duì)照組土壤有機(jī)碳含量有顯著性差異(P<0.05)。
表1 種植蘆竹屬不同菌草對(duì)土壤主要養(yǎng)分的影響Table 1 Nutrients in soil as affected by planting of different arundo grasses
2.1.2 土壤酶活 不同土壤樣品的酶活性如圖1所示,種植菌草的土壤脲酶(URE)活性均極顯著高于對(duì)照組(P<0.01),其中Lz9脲酶活性最高(859.40 μg·g?1·d?1),Lz1 次 之( 793.40 μg·g?1·d?1)。Lz5土壤中過(guò)氧化氫酶(CAT)活性最高(47.19 μmol·g?1·d?1),Lz6 次之(43.26 μmol·g?1·d?1),均極顯著高于未種植菌草的土壤酶活(P<0.01)。Lz5土壤中的蔗糖酶(INV)活性最高(15.91 mg·g?1·d?1),且極顯著高于未種植菌草的土壤蔗糖酶酶活(P<0.01),Lz1的土壤酸性磷酸酶(ACP)活性極顯著高于未種植菌草的ACP活性(P<0.01)。
圖1 種植蘆竹屬不同菌草對(duì)土壤酶活的影響Fig.1 Enzyme activity in soil as affected by planting of different arundo grasses
2.1.3 土壤特性與土壤酶活相關(guān)性分析 由表2 Pearson相關(guān)性結(jié)果分析可知,土壤過(guò)氧化氫酶與土壤pH值有顯著的正相關(guān)性(P<0.05)。土壤脲酶、蔗糖酶和酸性磷酸酶與pH值均無(wú)顯著相關(guān)性。土壤脲酶與速效磷、速效氮、有機(jī)碳和全氮均有極顯著的正相關(guān)性(P<0.01);相反,過(guò)氧化氫酶與速效磷、速效氮、有機(jī)碳和全氮均有極顯著的負(fù)相關(guān)性(P<0.01)。而土壤蔗糖酶與速效磷、速效氮、有機(jī)碳和全氮相關(guān)性不顯著(P>0.05),土壤酸性磷酸酶與速效氮、全氮均有顯著的正相關(guān)性(P<0.05),與有機(jī)碳有極顯著正相關(guān)性(P<0.01)。
表2 土壤特性與土壤酶活的Pearson相關(guān)性Table 2 Pearson correlation between characteristics and enzyme activity of soil
2.2.1 土壤微生物多樣性 土壤微生物多樣性的評(píng)估指數(shù)結(jié)果分析見表3,其中Chao指數(shù)代表群落豐富度,數(shù)值越大表明物種豐度越高;Shannon指數(shù)代表群落多樣性,數(shù)值越大表明其群落多樣性越高。由分析結(jié)果可知,種植幾種菌草的土壤細(xì)菌Ace、Chao指數(shù)均顯著高于對(duì)照組未種植菌草(P<0.05),Lz1、Lz2和Lz5細(xì)菌Shannon指數(shù)顯著高于對(duì)照組(P<0.05),而Coverage指數(shù)和Simpson指數(shù)與對(duì)照組差異均不顯著(P>0.05)。Lz1、Lz2和Lz3的土壤真菌Ace、Chao指數(shù)顯著高于對(duì)照組(P<0.05),種植幾種菌草的土壤真菌Shannon指數(shù)均顯著高于對(duì)照組(P<0.05),而土壤Simpson指數(shù)只有Lz6顯著低于對(duì)照組(P<0.05),Coverage指數(shù)與對(duì)照組差異均不顯著(P>0.05)。分析結(jié)果表明7個(gè)樣品的細(xì)菌文庫(kù)覆蓋率均達(dá)到96%、真菌文庫(kù)覆蓋率達(dá)99%,表明大部分微生物種群均能被檢測(cè)出,可代表樣本的真實(shí)情況。
表3 不同土壤樣品微生物豐度和多樣性Table 3 Microbial abundance and diversity of soil samples
2.2.2 土壤微生物群落結(jié)構(gòu) 由圖2可知,種植菌草的土壤樣品中變形菌門(Proteobacteria)的相對(duì)豐度均高于對(duì)照組,Lz9最高,與對(duì)照組相比,提高了47.15%,Lz5和Lz1次之,與對(duì)照組相比較分別提高了21.1%、20.7%;酸桿菌門(Acidobacteria)的相對(duì)豐度大小順序?yàn)椋篖z6>Lz5>Lz3>Lz1>Lz9>對(duì)照組>Lz2,Lz6比對(duì)照組提高了17.3%;綠彎菌門(Chloroflexi)的相對(duì)豐度則是對(duì)照組最高;放線菌門(Actinobacteria)的相對(duì)豐度大小順序?yàn)椋篖z2>Lz1>Lz3>Lz9>Lz6>對(duì)照組>Lz5,其中與對(duì)照組相比,Lz2和Lz1分別提高了86.3%、68.6%。
圖2 門水平細(xì)菌最大豐度排名前20的物種相對(duì)豐度Fig.2 Relative abundance of top 20 bacteria at phylum level
不同土壤樣品門水平真菌最大豐度排名如圖3所示,其中子囊菌門(Ascomycota)相對(duì)豐度大小順序?yàn)椋篖z9>Lz1>>Lz3>Lz5>Lz2>對(duì)照組>Lz6,Lz9和Lz1分別比對(duì)照組豐度提高了53.2%、32.9%;種植6種菌草的土壤樣品中,擔(dān)子菌門(Basidiomycota)相對(duì)豐度均高于對(duì)照組,其中Lz6的相對(duì)豐度最高;Lz1、Lz2和Lz3次之;種植六種菌草的被孢菌門(Mortierellomycota)的相對(duì)豐度均低于對(duì)照組。
圖3 門水平真菌最大豐度排名前16的物種相對(duì)豐度Fig.3 Relative abundance of top 16 fungi at phylum level
2.3.1 土壤微生物多樣性指數(shù)與土壤酶活相關(guān)性分析 土壤微生物多樣性由Ace指數(shù)、Shannon指數(shù)和Chao指數(shù)等來(lái)反映,由表4結(jié)果可知,蔗糖酶與細(xì)菌Ace指數(shù)、Shannon指數(shù)和Chao指數(shù)存在極顯著的正相關(guān)關(guān)系(P<0.01),酸性磷酸酶與Shannon指數(shù)呈顯著正相關(guān)關(guān)系(P<0.05),與細(xì)菌Ace指數(shù)、Chao指數(shù)存在極顯著的正相關(guān)關(guān)系;而酸性磷酸酶與真菌的Ace指數(shù)存在極顯著的正相關(guān)關(guān)系(P<0.01),與Shannon指數(shù)和Chao指數(shù)存在顯著的正相關(guān)關(guān)系(P<0.05)。
表4 微生物多樣性指數(shù)與土壤酶活的相關(guān)關(guān)系Table 4 Correlation between microbial diversity index and enzyme activity of soil
2.3.2 土壤微生物群落結(jié)構(gòu)與土壤酶活相關(guān)性分析 土壤微生物優(yōu)勢(shì)門類與4種土壤酶活之間的相關(guān)關(guān)系如表5 所示,變形菌門(Proteobacteria)、擬桿菌門(Bacteroidetes)、梭桿菌門(Saccharibacteria)、厚壁菌門(Firmicutes)等4個(gè)細(xì)菌菌門的相對(duì)豐度與URE活性呈極顯著正相關(guān)關(guān)系(P<0.01),而綠彎菌門(Chloroflexi)和硝化螺旋菌門(Nitrospirae)與URE活性呈現(xiàn)極顯著的負(fù)相關(guān)關(guān)系(P<0.01),芽單胞菌門(Gemmatimonadetes )與URE活性呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)關(guān)系(P<0.05);綠彎菌門(Chloroflexi)、硝化螺旋菌門(Nitrospirae)與CAT活性存在極顯著的正相關(guān)關(guān)系(P<0.01),變形菌門(Proteobacteria)、放線菌門(Actinobacteria)、擬桿菌門(Bacteroidetes)和厚壁菌門(Firmicutes)與CAT活性存在負(fù)相關(guān)關(guān)系(P<0.05);硝化螺旋菌門(Nitrospirae)與INV活性呈極顯著正相關(guān)(P<0.01),芽單胞菌門(Gemmatimonadetes )與INV活性呈現(xiàn)正相關(guān)(P<0.05),疣微菌門(Verrucomicrobia)與INV活性呈現(xiàn)顯著負(fù)相關(guān)(P<0.05);放線菌門(Actinobacteria)與ACP活性呈現(xiàn)顯著正相關(guān)(P<0.05)。
表5 土壤微生物優(yōu)勢(shì)門類與土壤酶活之間的相關(guān)關(guān)系Table 5 Correlations among dominant microbial phyla,nutrients, and enzyme activity in soil
真菌的優(yōu)勢(shì)菌門中,子囊菌門(Ascomycota)與URE活性呈極顯著正相關(guān)關(guān)系(P<0.01),被孢霉門(Mortierellomycota)、球囊菌門(Glomeromycota)、Kickxellomycota和Calcarisporiellomycota 與URE活性呈極顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系(P<0.01);被孢霉門(Mortierellomycota)、球囊菌門(Glomeromycota)、Kickxellomycota和Calcarisporiellomycota與CAT活性呈極顯著正相關(guān)關(guān)系(P<0.01),子囊菌門(Ascomycota)與CAT活性呈極顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系(P<0.01)。
土壤養(yǎng)分是衡量土壤肥力狀況的指標(biāo)之一,福建農(nóng)林大學(xué)旗山校區(qū)國(guó)家菌草工程技術(shù)研究中心菌草種質(zhì)資源圃建在用黏土及石塊填方的土地,土壤肥力差。蘆竹屬菌草抗性強(qiáng),耐貧瘠,種植5年來(lái),在該土地上不僅正常生長(zhǎng),而且長(zhǎng)勢(shì)旺盛。本研究選用的是種質(zhì)資源圃種植蘆竹屬菌草5年后的土壤與未種植區(qū)域土壤進(jìn)行比較,結(jié)果表明:所測(cè)區(qū)域土壤均屬于酸性土壤(5.4~6.2),其中Lz6所種植區(qū)域土壤pH值最高,Lz3土壤pH值最低;Lz1、Lz9、Lz3的土壤有機(jī)碳、AN、TN含量等均顯著高于未種植土壤的各養(yǎng)分含量。由結(jié)果可知,種植5年的蘆竹屬菌草,可增加土壤養(yǎng)分的含量,提高土壤肥力,但由于蘆竹屬不同菌草品種的生長(zhǎng)特性存在一定差異,因此不同菌草種植區(qū)的土壤養(yǎng)分亦存在一定的差異。
土壤酶活性是微生物功能的表現(xiàn),參與了土壤中許多重要的生物化學(xué)過(guò)程,與土壤養(yǎng)分有著密切的關(guān)系[20],土壤pH值、土壤有機(jī)質(zhì)、AP、AN、TN含量等土壤理化性質(zhì)都會(huì)對(duì)土壤酶活產(chǎn)生顯著的影響。土壤酶活性結(jié)果顯示,種植蘆竹屬6種菌草的土壤脲酶活性均極顯著高于未種植菌草的對(duì)照組,其中Lz1和Lz9的脲酶活性最高,這與Lz1和Lz9土壤有機(jī)質(zhì)含量高的結(jié)果一致,且Pearson相關(guān)分析亦表明脲酶活性與土壤有機(jī)質(zhì)含量呈顯著正相關(guān)(P<0.01)。諸多研究結(jié)果亦表明,土壤中有機(jī)質(zhì)含量高,土壤脲酶活性也會(huì)相應(yīng)提高[21?23]。土壤過(guò)氧化氫酶活性與土壤呼吸強(qiáng)度和土壤微生物活動(dòng)相關(guān),是重要的土壤微生態(tài)環(huán)境指示因子[24?25],能有效防止過(guò)氧化氫的毒害,而過(guò)氧化氫酶和蔗糖酶活性則是種植Lz5的土壤酶活性最高,均顯著高于對(duì)照組,酸性磷酸酶活性則是種植Lz1的土壤最高,顯著高于對(duì)照組。影響土壤酶活性的因子較多,在不同的研究中所得結(jié)論也不盡相同[26]。本研究相關(guān)性結(jié)果分析發(fā)現(xiàn),供試4種土壤酶中,脲酶活性與土壤速效磷、速效氮、有機(jī)碳和全氮呈極顯著的相關(guān)關(guān)系(P<0.01),蔗糖酶與幾種土壤養(yǎng)分無(wú)顯著的相關(guān)性,亦說(shuō)明土壤酶活性受多因子協(xié)同作用影響。
土壤微生物群落多樣性和群落結(jié)構(gòu),受土壤理化性質(zhì)、不同土壤條件和環(huán)境的差異影響,在不同土壤條件和環(huán)境中,土壤微生物群落存在很大差別[27]?;诟咄繙y(cè)序的分析結(jié)果表明,蘆竹屬不同菌草土壤微生物的多樣性指數(shù)和豐富度指數(shù)存在一定差異,種植菌草土壤微生物中細(xì)菌和真菌的Ace指數(shù)、Shannon指數(shù)、Chao指數(shù)均高于對(duì)照組,亦說(shuō)明了種植菌草以后土壤微生物的多樣性和豐度總體高于未種植。而不同種植區(qū)域微生物優(yōu)勢(shì)菌門大致相似,其中Lz1土壤微生物中變形菌門、酸桿菌門、放線菌門等相對(duì)豐度均大于對(duì)照組。
土壤中有機(jī)碳是土壤微生物群落的能量和微生物細(xì)胞組成成分的主要來(lái)源,還是土壤微生物新陳代謝的主要產(chǎn)物[28]。由本研究土壤微生物優(yōu)勢(shì)門類與土壤酶活的相關(guān)性結(jié)果可知,變形菌門(Proteobacteria)、擬桿菌門(Bacteroidetes)、梭桿菌門(Saccharibacteria)、厚壁菌門(Firmicutes)等細(xì)菌的相對(duì)豐度均與土壤中URE活性呈極顯著正相關(guān)(P<0.01)。同樣,研究結(jié)果表明優(yōu)勢(shì)菌門與土壤酶活性的相關(guān)性存在差異,相關(guān)性并不是呈現(xiàn)出一致的趨勢(shì)。植物-土壤-微生物之間的關(guān)系非常復(fù)雜,相互作用、相互影響[29?31],但不同蘆竹種植的土壤微生物多樣性和群落結(jié)構(gòu)存在一定差異,且與土壤養(yǎng)分和土壤酶活的具有一定的相關(guān)性。
綜上所述,種植蘆竹屬6種不同菌草后,土壤養(yǎng)分、土壤酶活、土壤微生物多樣性和群落結(jié)構(gòu)存在一定的差異,但與未種植蘆竹屬菌草的空白對(duì)照地相比,種植lz1、Lz9土壤中速效磷、速效氮、有機(jī)碳和總氮的含量以及土壤脲酶活性顯著升高。土壤微生物豐度和多樣性指數(shù)結(jié)果亦表明,種植蘆竹后,土壤微生物豐度和多樣性高于對(duì)照組。結(jié)合之前研究結(jié)果,種植蘆竹屬菌草Lz1有望在貧瘠的土壤條件下,起到改良土壤,提高土壤酶活性和土壤微生物多樣性的積極作用,為綠洲1號(hào)(Lz1)的推廣奠定理論基礎(chǔ)。