鄧森靈，蘭代群，曹雅文，符春麗，韓雪茹，蘇紅娥，閆志強(qiáng)

（海南西部中心醫(yī)院婦產(chǎn)科，海南那大 571799）

上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer，EOC）是婦科腫瘤中發(fā)病率較高的疾病之一，有不典型的早期癥狀，往往患者確診時(shí)已處于晚期，造成患者的預(yù)后差和死亡率高[1]。微小核糖核酸(microRNA，miRNA)是一類小分子RNA 片段，參與EOC 的發(fā)生發(fā)展，對(duì)EOC 的診斷和預(yù)后評(píng)估具有較大的潛力[2-3]。既往研究發(fā)現(xiàn)，婦科腫瘤中存在miR-362 及miR-485 異常表達(dá)，其在婦科腫瘤的診斷、預(yù)后和治療等方面有極為重要的作用[4-5]。因此，本研究通過檢測術(shù)前EOC 患者miR-362 及miR-485 表達(dá)情況，分析其預(yù)測EOC 患者預(yù)后的價(jià)值，旨在為EOC 的救治提供指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 選取2017年1月～2020年5月收治的98 例EOC 患者作為EOC 組，年齡35 ～76(56.48±11.25) 歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：EOC 診斷參考《卵巢惡性腫瘤診斷與治療指南( 第四版)》[6]；排除標(biāo)準(zhǔn)：并發(fā)其他惡性腫瘤者，檢測前接受過治療。另選取正常女性50 例作為對(duì)照組，年齡34 ～75(55.92±10.73) 歲，EOC 組和對(duì)照組的性別、年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。本研究經(jīng)患者知情同意后進(jìn)行。

1.2 儀器與試劑 ABI 7500 型熒光定量PCR 儀（ABI 公司），PCR 相關(guān)試劑盒購自Qiagen 公司，離心機(jī)為ABI 公司產(chǎn)品。

1.3 方法 采用前瞻性方法對(duì)98 例EOC 患者進(jìn)行隨訪，截止時(shí)間2020年12月，記錄患者的總生存率和無進(jìn)展生存率。使用熒光定量PCR儀檢測miR-362 及miR-485 水平。反應(yīng)體系為20μl[1μl 引物及探針Mix（20×），10μl Taq Man 通用混合物溶液（2×），1.33μl 反向轉(zhuǎn)錄脫氧核糖核酸，7.67μl 雙蒸餾水]。miR-362 及miR-485 水平采用2-△△Ct法計(jì)算。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS22.0 軟件分析，計(jì)量資料以均數(shù)± 標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)。生存分析應(yīng)用Kaplan-Meier 法，多因素分析應(yīng)用COX 回歸分析。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 EOC 組和對(duì)照組血清miR-362 及miR-485表達(dá)水平比較 EOC 組血清miR-362（0.42±0.05）和 miR-485 表達(dá)水平（0.51±0.08）明顯低于對(duì)照組（2.37±0.96，1.74±0.62），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=17.913，14.520，均P＜0.001）。

2.2 miR-362 及miR-485 診斷EOC 的價(jià)值 見圖1。miR-362 診斷EOC 的最佳截?cái)嘀禐?.30，曲線下面積（AUC）為0.882（95%CI：0.819 ～0.944），其敏感度和特異度分別為89.6%，85.3%。miR-485 診斷EOC 的最佳截?cái)嘀禐?.05，AUC 為0.830（95%CI：0.772 ～0.892），其敏感度和特異度分別為83.4%，80.2%。miR-362 及miR-485 聯(lián)合診斷EOC 的AUC 為0.914（95%CI：0.856 ～0.977），其敏感度和特異度分別為92.8%， 86.4%。

圖1 miR-362 及miR-485 診斷EOC 的ROC 曲線

2.3 miR-362 及miR-485 表達(dá)與EOC 患者預(yù)后不良的關(guān)系 98 例EOC 患者隨訪時(shí)間為9 ～43 個(gè)月，中位隨訪時(shí)間為21.8 個(gè)月。生存分析顯示，低miR-362 組（miR-362＜1.30）患者總生存率（33.8%）明顯低于高miR-362 組（miR-362 ≥1.30）的總生存率（60.5%），低miR-362 組患者無進(jìn)展生存率(19.3%)明顯低于高miR-362 組的無進(jìn)展生存率（41.6%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=14.518，11.284，均P＜0.001)。低miR-485 組（miR-485＜1.05）患者總生存率（38.0%）明顯低于高miR-485 組（miR-485 ≥1.05）的總生存率（62.7%），低miR-485 組患者無進(jìn)展生存率（22.7%）明顯低于高miR-485 組的無進(jìn)展生存率（42.8%），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=12.610，9.815，均P＜0.001)。

2.4 影響EOC 患者預(yù)后不良的危險(xiǎn)因素 見表1。多因素COX 回歸分析顯示，臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腹膜轉(zhuǎn)移、miR-362 ＜1.30 及miR-485 ＜1.05 是影響EOC 患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（均P＜0.05）。

3 討論

EOC 是常見的女性婦科癌癥，對(duì)EOC 進(jìn)行早期診斷有助于患者得到及時(shí)治療。miRNA 是一類較為常見的非編碼RNA，可通過調(diào)控EOC 細(xì)胞遷移、侵襲及增殖，在EOC 發(fā)生中起到關(guān)鍵作用[7-8]。YANG 等[9]研究發(fā)現(xiàn)，miR-362-3p 在宮頸癌中異常低表達(dá)，對(duì)宮頸癌細(xì)胞的遷移和侵襲有抑制作用，在宮頸癌發(fā)展及治療中發(fā)揮重要作用。另有研究指出，miR-485-5p 在宮頸癌組織較鄰近正常組織明顯降低，可抑制宮頸癌細(xì)胞的侵襲和遷移，在宮頸癌靶向治療中具有巨大的潛能[10]。

本研究顯示，與對(duì)照組比較，miR-362 及miR-485 在EOC 組中明顯下調(diào)，提示miR-362 及miR-485 在EOC 中呈低表達(dá)，其高表達(dá)可能會(huì)抑制EOC的進(jìn)展。YUAN 等[11]研究發(fā)現(xiàn)，在EOC 組織和細(xì)胞中miR-362 表達(dá)降低，其低表達(dá)在EOC 進(jìn)展中發(fā)揮作用，可為EOC 的靶向治療帶來新的前景。YANG 等[12]研究認(rèn)為，miR-485-5p 在卵巢癌組織中呈低表達(dá)，與細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲及凋亡有關(guān)，檢測miR-485-5p 表達(dá)情況，有助于了解EOC 的發(fā)病機(jī)制及指導(dǎo)臨床的診療。

表1 影響EOC 患者預(yù)后不良的單因素及多因素COX 回歸分析

應(yīng)用ROC 曲線分析顯示，miR-362 及miR-485診斷EOC 的最佳截?cái)嘀捣謩e為1.30 和1.05，并對(duì)EOC 患者的miR-362 及miR-485 高表達(dá)組和低表達(dá)組進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)miR-362 低表達(dá)組和miR-485低表達(dá)組患者總生存率和無進(jìn)展生存率較高表達(dá)組顯著下降。此外，多因素COX 回歸分析顯示，臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腹膜轉(zhuǎn)移、miR-362 ＜1.30及miR-485 ＜1.05 是影響EOC 患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。CAO 等[13]研究顯示，卵巢癌組織及細(xì)胞中miR-362 表達(dá)下調(diào)，miR-362 通過抑制細(xì)胞增殖和遷移，進(jìn)而抑制卵巢癌的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移，有望作為卵巢癌診斷和治療的潛在標(biāo)志物。既往研究認(rèn)為， miRNA 在EOC 組織較癌旁正常組織表達(dá)降低，且miRNA 的低表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期增加有關(guān)，對(duì)EOC 患者預(yù)后不良具有極大的影響[14]。另有研究證實(shí)，有些miRNA 的低表達(dá)與EOC 患者病情惡化及預(yù)后不良有關(guān)聯(lián)，檢測miRNA 對(duì)EOC患者預(yù)后評(píng)估及指導(dǎo)治療有很好的幫助[15]。

綜上所述，血清miR-362 及miR-485 表達(dá)水平在EOC 中明顯下調(diào)，其低表達(dá)與EOC 患者預(yù)后不良有關(guān)，有望作為EOC 預(yù)后評(píng)估的有效指標(biāo)。