韓 麗，陳思平，趙治戎，周世波，周黎晨，吉 華，唐 政，譚 震，王 濤，戴睿武

610031 成都，西南交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)系1；610083 成都，西部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院普通外科2

創(chuàng)傷性胰腺炎作為急性胰腺炎的一種特殊類(lèi)型，因其發(fā)生后傷情嚴(yán)重，傷后死亡率較高，所以在腹部戰(zhàn)創(chuàng)傷救治中占重要的地位。由于胰腺是腹腔內(nèi)富含消化酶的實(shí)質(zhì)性臟器。胰腺損傷后，胰腺及周?chē)M織發(fā)生自身消化，進(jìn)一步加重胰腺損傷，同時(shí)還可能遭受急性胰腺炎樣的“二次打擊”，進(jìn)而誘發(fā)全身性炎癥。其次，胰腺創(chuàng)傷后，因胰腺組織修復(fù)緩慢甚至停滯，極易出現(xiàn)胰腺及胰周組織壞死等嚴(yán)重的局部/全身并發(fā)癥，常危及患者生命。目前對(duì)于胰腺創(chuàng)傷的治療主要集中于相應(yīng)癥狀的基礎(chǔ)治療以及1期手術(shù)治療，僅限于早期挽救生命、控制傷情，但對(duì)胰腺毀損組織的修復(fù)以及胰酶滲漏后引發(fā)的炎癥反應(yīng)及其后續(xù)內(nèi)分泌細(xì)胞損傷尚無(wú)有效的抑制措施。

臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells，hUC-MSCs)作為間充質(zhì)干細(xì)胞中的一種類(lèi)型，擁有獲取方便、免疫原性低、細(xì)胞原始性高等明顯優(yōu)勢(shì)效應(yīng)。近年來(lái)研究報(bào)道hUC-MSCs主要通過(guò)以旁分泌方式產(chǎn)生外泌體從而發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源的外泌體(human umbilical cord mesenchymal stem cells exosome，hUCMSC-Ex)是細(xì)胞內(nèi)吞作用產(chǎn)生的能夠分泌到細(xì)胞外參與細(xì)胞通訊功能的囊泡。外泌體內(nèi)含有多種成分，包括蛋白質(zhì)、RNA等，主要存在于血液、尿液、唾液和腹水中，可在mRNA水平上影響基因表達(dá)，從而參與調(diào)控?fù)p傷后的炎癥反應(yīng)、血管生成、細(xì)胞保護(hù)、生物發(fā)育和表觀遺傳調(diào)控、免疫調(diào)節(jié)、腫瘤發(fā)生進(jìn)展等生理和病理過(guò)程。既往研究證實(shí)hUCMSC-Ex在組織損傷修復(fù)，控制炎癥反應(yīng)、治療缺血性疾病等方面有著豐富的應(yīng)用空間。本研究利用西部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院前期自行研發(fā)的小動(dòng)物多功能撞擊儀建立基于損傷范圍控制的大鼠胰腺創(chuàng)傷模型，探究 hUCMSC-Ex對(duì)大鼠創(chuàng)傷性胰腺炎損傷后的修復(fù)作用，并探討其安全性與有效性，為胰腺創(chuàng)傷的臨床救治提供理論依據(jù)和新的治療方向。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

研究采用成年雄性健康SD大鼠60只，體質(zhì)量200～250 g，購(gòu)自成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司[動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK(川)2020-030]。多功能動(dòng)物撞擊儀已獲授權(quán)專(zhuān)利(專(zhuān)利號(hào)：ZL2016 1 0347341.5)。動(dòng)物麻醉機(jī)和麻醉異氟醚由深圳瑞沃德生命科技有限公司提供。超速離心機(jī)型號(hào)：CP100MX。透射電鏡型號(hào)：HT-7700。hUC-MSCs由成都康靜生物細(xì)胞制備中心提供(批號(hào)：B06200407)；血清淀粉酶、脂肪酶以及大鼠 IL-6、IL-10、TGF-β、TNF-α的ELISA試劑盒均購(gòu)自上海茁彩生物科技有限公司；CD9抗體，TSG101抗體購(gòu)自Abcam公司；Bax抗體購(gòu)自proteintech公司；Caspase-3抗體和β-tubulin抗體購(gòu)自Affinity公司。

1.2 方法

1.2.1 外泌體的提取與鑒定

1.2.1.1 hUC-MSCs的傳代培養(yǎng) 凍存hUC-MSCs置于37 ℃水浴鍋中解凍，加入DMEM/F12培養(yǎng)基；在37 ℃、飽和濕度、5% CO培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每2～3天換液1次。倒置顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)，密度達(dá)到80%-90%時(shí)用0.25% EDTA胰酶消化，1∶3傳代。選取第3～5代進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。采用流式分析儀鑒定hUC-MSCs的表面特異性抗原(CD29、CD44、CD45、CD34)。

1.2.1.2 hUC-MSCs來(lái)源的外泌體的提取與鑒定 將第3代hUC-MSCs移至新的離心管內(nèi)，2 000×

g

、4 ℃離心30 min。取上清液，10 000×

g

、4 ℃離心45 min，以去除較大的囊泡。取上清，0.45 μm濾膜過(guò)濾，收集過(guò)濾液。將過(guò)濾液4 ℃、100 000×

g

離心70 min。去除上清，用10 mL預(yù)冷的1×PBS重懸后，4 ℃、100 000×

g

再次離心70 min。去除上清，用200 μL預(yù)冷的1×PBS重懸。取40 μL電鏡觀察、50 μL提取蛋白、10 μL無(wú)菌檢測(cè)，剩余外泌體于-80 ℃保存。取10 μL外泌體滴加于銅網(wǎng)上沉淀1 min，吸去浮液。醋酸雙氧鈾10 μL滴加于銅網(wǎng)上沉淀1 min，吸去浮液，常溫干燥數(shù)分鐘，電鏡檢測(cè)并拍照。使用BCA蛋白質(zhì)檢測(cè)試劑盒測(cè)量蛋白質(zhì)濃度。通過(guò)凝膠電泳分離等量變性蛋白質(zhì)，然后進(jìn)行轉(zhuǎn)膜上，一抗孵育(Bax 1∶5 000；Bcl-2 1∶2 000；Caspase-3 1∶2 000；β-tubulin 1∶2 000)孵育12 h，然后在室溫下用孵育二抗。最后在化學(xué)發(fā)光凝膠成像系統(tǒng)中曝光成像，檢測(cè)外泌體組特異性表面蛋白CD9的表達(dá)。1.2.2 動(dòng)物建模與分組 將大鼠隨機(jī)分為4組(

n

=15)：①對(duì)照組(control組：異氟烷麻醉后開(kāi)腹，用無(wú)菌棉簽翻動(dòng)胰腺幾次，關(guān)腹。經(jīng)尾靜脈注射生理鹽水約1 mL)。②創(chuàng)傷性胰腺炎組(TP組：開(kāi)腹后分離出胰腺組織。將多功能撞擊儀的擠壓參數(shù)設(shè)為3 cm/10 kg對(duì)胰腺組織進(jìn)行沖擊和擠壓，隨后常規(guī)逐層關(guān)腹，經(jīng)大鼠尾靜脈注射生理鹽水約1 mL)。③TP+hUC-MSCs組(建模后經(jīng)大鼠尾靜脈注射hUC-MSCs 2×10/100 g)。④TP+hUCMSC-Ex組(建模后經(jīng)大鼠尾靜脈注射hUCMSC-Ex 10 μg/100 g)。建模成功的大鼠均禁食12 h，自由飲水。建模24 h后，對(duì)照組無(wú)大鼠死亡(成功率：100%)，TP組3只死亡(成功率：80%)，TP+hUC-MSCs組和TP+hUCMSC-Ex組各有1只死亡(成功率：93%)。所有存活大鼠于術(shù)后24 h經(jīng)腹主動(dòng)脈取血、處死，留取血清與胰腺組織進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)。

1.2.3 胰腺組織病理學(xué)觀察 各組胰腺組織均用甲醛固定，脫水，切片，行HE染色。并在光鏡下觀察其病理形態(tài)學(xué)。兩名病理學(xué)家設(shè)盲，根據(jù)文獻(xiàn)[19]標(biāo)準(zhǔn)對(duì)胰腺水腫、出血、細(xì)胞壞死和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)的程度進(jìn)行評(píng)分，以10個(gè)高倍視野的平均得分作為每個(gè)切片的最終得分。

1.2.4 ELISA法檢測(cè)血清淀粉酶、脂肪酶以及炎癥因子表達(dá)水平 室溫解凍血清后，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)中描述的步驟，采用ELISA法檢測(cè)淀粉酶、脂肪酶和炎癥因子(IL-6、TNF-α、IL-10、TGF-β)的表達(dá)水平。

1.2.5 TUNEL檢測(cè)細(xì)胞凋亡 固定胰腺組織經(jīng)全自動(dòng)脫水機(jī)脫水、包埋、切片、脫蠟至水。分別浸泡于：二甲苯Ⅰ 5～10 min、二甲苯Ⅱ 5～10 min、無(wú)水乙醇Ⅰ5 min、無(wú)水乙醇Ⅱ5 min、95%酒精5 min、85%酒精5 min、75%酒精5 min、UP水5 min。檸檬酸微波修復(fù)8 min，PBS洗3次、每次5 min；暗處配制熒光TUNEL孵育液(A∶B=1∶30)、37 ℃孵育1 h；PBS洗3次，每次5 min；加DAPI染核15 min，PBS 沖洗，甘油明膠封片，-20 ℃保存(試劑現(xiàn)配現(xiàn)用，均在暗處進(jìn)行)。以上標(biāo)本均按病理檢驗(yàn)SOP程序進(jìn)行脫水、修剪、包埋、切片、染色、封片、鏡檢。

1.2.6 Western blot檢測(cè)凋亡蛋白表達(dá)水平 將胰腺組織取出放入2 mL研磨管中，然后向每管加入3 mm鋼珠及RIPA裂解液(質(zhì)量比樣本∶裂解液=1∶10)。置于高速低溫組織研磨儀內(nèi)，-20 ℃研磨4次，每次60 s。取出放入4 ℃冰箱進(jìn)行裂解；30 min后取出，4 ℃、12 000 ×

g

離心10 min；取上清液，用BCA蛋白定量試劑盒測(cè)定蛋白濃度。各組取50 μL，按4∶1比例加入5× Loding buffer，混勻后熱循環(huán)儀95 ℃，15 min，-80 ℃保存。一抗?jié)舛龋築ax 1∶5 000，Bcl-2 1∶2 000，Caspase-3 1∶2 000，β-tubulin 1∶2 000。輕搖后4 ℃孵育過(guò)夜；用TBST將PVDF膜洗3次，每次5 min。將PVDF膜放入二抗(稀釋濃度：1∶5 000)中，輕搖后室溫孵育2～3 h；用TBST將PVDF膜洗3次，每次10 min。將PVDF膜平鋪到曝光板上，將ECL發(fā)光液的A、B兩種試劑混合后滴加，反應(yīng)1 min；將放有膜的曝光板放入暗室，根據(jù)信號(hào)的強(qiáng)弱調(diào)整曝光時(shí)間、曝光。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 hUC-MSCs培養(yǎng)、鑒定及hUCMSC-Ex的提取與鑒定

2.1.1 hUC-MSCs表面抗原鑒定結(jié)果 流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)結(jié)果(圖1)顯示：hUC-MSCs表面抗原CD29、CD44為陽(yáng)性(>70%)；CD45、CD34為陰性(<5%)?？梢源_認(rèn)該細(xì)胞為hUC-MSCs。

A：CD29(+)；B：CD44(+)；C：CD45(-)；D：CD34(-)

2.1.2 hUC-MSCs來(lái)源的外泌體鑒定結(jié)果 透射電鏡下可見(jiàn)呈圓形或橢圓形的膜性小囊泡，囊泡外周包繞膜性結(jié)構(gòu)，囊泡中央為低密度成分。Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示所得外泌體有特征性膜蛋白CD9表達(dá)(圖2)。

A：hUCMSC-Ex電鏡觀察；B：hUCMSC-Ex的Western blot檢測(cè)結(jié)果 M1～M3：分別為臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞重復(fù)對(duì)照組；Ex：外泌體鑒定組

2.2 各組大鼠胰腺組織HE染色觀察結(jié)果

2.2.1 形態(tài)學(xué)改變 對(duì)照組：胰腺組織無(wú)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，腺泡無(wú)明顯萎縮、變性、壞死。TP組：部分腺泡上皮細(xì)胞變性壞死，壞死細(xì)胞腫脹、結(jié)構(gòu)模糊；細(xì)胞質(zhì)空泡化，細(xì)胞核固縮或溶解，邊界不清晰；壞死區(qū)域和間質(zhì)伴有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，主要為桿狀核中性粒細(xì)胞；提示建模24 h后大鼠出現(xiàn)炎癥反應(yīng)；亦見(jiàn)少量纖維組織增生，且部分間質(zhì)亦見(jiàn)水腫，間隙增大。TP+hUC-MSCs組：胰腺組織的部分輪廓尚存，胰腺小葉結(jié)構(gòu)沒(méi)有完全破壞，外分泌細(xì)胞的正常結(jié)構(gòu)可以看到損傷區(qū)域，炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)明顯減少。TP+hUCMSC-Ex組：胰腺組織被膜由薄層纖維組織構(gòu)成，分葉較清晰；胰島和腺泡結(jié)構(gòu)完整，胰腺水腫的程度小于TP組，間質(zhì)伴有少量中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，其中部分亦見(jiàn)少量核呈長(zhǎng)梭形的纖維細(xì)胞(圖3A)。

2.2.2 胰腺病理評(píng)分結(jié)果 與TP組相比，TP+hUC-MSCs組、TP+hUCMSC-Ex 組病理學(xué)評(píng)分顯著降低(

P

<0.05)。TP+hUC-MSCs組與TP+hUCMSC-Ex 組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

P

>0.05，圖3B)。

a：P<0.05，與TP組比較; 1: Control組；2：TP組；3：TP+hUC-MSCs組；4：TP+hUCMSC-Ex組

2.3 血清淀粉酶、脂肪酶和炎癥因子檢測(cè)結(jié)果

TP組在術(shù)后24 h的血清淀粉酶和脂肪酶濃度均高于對(duì)照組(

P

<0.05)，與TP組比較，TP+hUC-MSCs組、TP+hUCMSC-Ex 組在術(shù)后24 h的血清淀粉酶和脂肪酶水平顯著下降(

P

<0.05)。TP+hUC-MSCs組與TP+hUCMSC-Ex 組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

P

>0.05)。見(jiàn)圖4。

a：P<0.05，與TP組比較

血清炎癥因子檢測(cè)顯示：TP組的IL-6、TNF-α顯著高于對(duì)照組，IL-10、TGF-β顯著低于對(duì)照組(

P

<0.05)。與TP組比較，TP+hUC-MSCs組、TP+hUCMSC-Ex 組大鼠血清中IL-6、TNF-α濃度降低，而IL-10、TGF-β濃度升高(

P

<0.05)。TP+hUC-MSCs組與TP+hUCMSC-Ex 組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

P

>0.05)。見(jiàn)圖5。上述結(jié)果提示，建模24 h后大鼠的炎癥反應(yīng)較為明顯。

a：P<0.05，與TP組比較; 1: Control組；2：TP組；3：TP+hUC-MSCs組；4：TP+hUCMSC-Ex組

2.4 細(xì)胞凋亡檢測(cè)結(jié)果

2.4.1 胰腺細(xì)胞凋亡情況 在TP組可觀察到凋亡的腺泡細(xì)胞，且TP組腺泡細(xì)胞的凋亡指數(shù)明顯高于對(duì)照組(

P

<0.05)；TP+hUC-MSCs組和TP+hUCMSC-Ex組腺泡細(xì)胞凋亡指數(shù)顯著低于TP組(

P

<0.05)。TP+hUC-MSCs組和TP+hUCMSC-Ex 組間相比，無(wú)明顯差異(

P

>0.05)。見(jiàn)圖6。

↑：示凋亡細(xì)胞 a：P<0.05，與TP組比較

2.4.2 凋亡蛋白的表達(dá)變化 Control組凋亡蛋白Bax、Caspase-3的表達(dá)較低，與TP組相比，TP+hUC-MSCs組、TP+hUCMSC-Ex 組術(shù)后24 h胰腺細(xì)胞凋亡蛋白Bax、Caspas-3表達(dá)水平明顯降低(

P

<0.05，圖7)。

a：P<0.05，與TP組比較; 1: Control組；2：TP組；3：TP+hUC-MSCs組；4：TP+hUCMSC-Ex組

3 討論

3.1 創(chuàng)傷性胰腺炎的診療現(xiàn)狀

創(chuàng)傷性胰腺炎常由胰腺外傷引起，其臨床癥狀與急性胰腺炎癥狀相似，主要表現(xiàn)為腹部器官損傷、嚴(yán)重的腹部感染等相關(guān)癥狀。近年來(lái)，隨著交通、建筑等領(lǐng)域的快速發(fā)展，車(chē)禍以及意外事故發(fā)生率增加，導(dǎo)致腹部創(chuàng)傷性疾病越來(lái)越普遍，創(chuàng)傷性胰腺炎的發(fā)病率逐漸增加。創(chuàng)傷性胰腺炎的發(fā)生發(fā)展過(guò)程可分為損傷期、感染期和并發(fā)癥期。各時(shí)期的主要治療理念一般都是基于手術(shù)控制創(chuàng)傷以及漸進(jìn)式分期管理的原則。在臨床實(shí)踐中，創(chuàng)傷性胰腺炎的治療應(yīng)根據(jù)胰管的完整性、胰腺實(shí)質(zhì)損傷的位置和程度、血流動(dòng)力學(xué)和周?chē)渌鞴俚膿p傷程度進(jìn)行個(gè)體化治療。治療方法在病程的不同時(shí)期也有不同的側(cè)重點(diǎn)，應(yīng)在疾病的早期及時(shí)治療，避免更嚴(yán)重的后果。創(chuàng)傷性胰腺炎中后期常伴有胰液漏出，引起全身炎癥反應(yīng)。此外，漏出的胰液可直接腐蝕和刺激腹膜、腹部器官和大血管，可導(dǎo)致腹膜炎、腹腔膿腫、大出血等可怕的并發(fā)癥。因此，早期疾病控制已成為創(chuàng)傷性胰腺炎治療的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。

3.2 臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞及其來(lái)源的外泌體的效應(yīng)研究

隨著再生醫(yī)學(xué)以及組織工程技術(shù)的發(fā)展，具有獨(dú)特免疫調(diào)節(jié)能力的間充質(zhì)干細(xì)胞逐漸走入人們的視野，并被廣泛應(yīng)用于組織損傷的修復(fù)、組織功能的再生和重建等領(lǐng)域。其中，hUC-MSCs因其不表達(dá)主要的組織相容性復(fù)合物Ⅱ(MHCⅡ)和共刺激分子而具有低免疫原性這一巨大優(yōu)勢(shì)。YANG等通過(guò)逆行胰管注射牛磺膽酸鈉建立大鼠重癥急性胰腺炎模型并經(jīng)大鼠尾靜脈注射hUC-MSCs，驗(yàn)證了hUC-MSCs的移植治療可以有效降低血清淀粉酶及腫瘤壞死因子-α和干擾素-γ的產(chǎn)生。此外，他們還驗(yàn)證了hUC-MSCs以時(shí)間和劑量依賴(lài)性方式顯著降低了SAP引起的胰腺損傷。KONG等的研究提示hUC-MSCs不僅能抑制炎性細(xì)胞因子的分泌和胰腺星狀細(xì)胞的活化，還顯著抑制了慢性胰腺炎胰腺組織中的磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)通路，從而抑制腺泡細(xì)胞的凋亡。然而，在細(xì)胞及分子層面的研究中進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)hUC-MSCs可能通過(guò)旁分泌作用產(chǎn)生的細(xì)胞外囊泡發(fā)揮其治療作用。而且，hUCMSC-Ex便于提取、儲(chǔ)存和運(yùn)輸，免疫原性較低，生物相容性較好。目前，已有相關(guān)研究證實(shí)了hUCMSC-Ex可以在肝臟疾病、肺疾病、腎損傷、糖尿病以及其他疾病中發(fā)揮重要的保護(hù)作用。ZHANG等報(bào)道hUCMSC-Ex通過(guò)降低血尿素氮(BUN)、血清肌酐(SCR)、尿白蛋白肌酐(ACR)和8-異前列烷的水平改善了腎臟和腎小球的萎縮，并且通過(guò)改善全身炎癥來(lái)減輕腎臟炎癥和氧化應(yīng)激，從而改善腎功能。CHEN等將hUCMSC-Ex用于治療狼瘡彌漫性肺泡出血(DAH)小鼠，發(fā)現(xiàn)小鼠肺泡損傷和炎癥反應(yīng)減弱，M2 巨噬細(xì)胞比例增加，從而發(fā)現(xiàn)了hUCMSC-Ex通過(guò)調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞極化減弱了DAH誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)和肺泡出血。

3.3 創(chuàng)傷性胰腺炎的病損特征

胰腺創(chuàng)傷后，一些胰腺組織壞死且不活躍。如果胰管有破裂，大量的胰液就會(huì)溢出。胰液中的消化酶也能消化胰腺組織，導(dǎo)致更多的胰腺組織和周?chē)M織進(jìn)一步壞死。不僅如此，當(dāng)胰腺創(chuàng)傷發(fā)生后，胰腺實(shí)質(zhì)的節(jié)段性或彌漫性炎癥可導(dǎo)致胰腺壞死、纖維化、腺泡細(xì)胞和胰島細(xì)胞萎縮和消失，導(dǎo)致胰腺結(jié)構(gòu)損傷和胰腺內(nèi)分泌和外分泌功能障礙。因此，加強(qiáng)血管的形成，改善胰腺微循環(huán)，有助于延緩創(chuàng)傷后壞死，促進(jìn)胰腺組織的再生和修復(fù)。外泌體可以通過(guò)其自身產(chǎn)生的免疫活性分子調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的狀態(tài)，發(fā)揮了強(qiáng)大的免疫調(diào)節(jié)作用。同時(shí)，可以上調(diào)血管生成相關(guān)分子表達(dá)，發(fā)揮促血管生作用。此外，還可以刺激細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞活化，發(fā)揮修復(fù)胰腺損傷組織作用。

3.4 臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞及其來(lái)源的外泌體在創(chuàng)傷性胰腺炎治療中的效應(yīng)驗(yàn)證

本研究采用多功能動(dòng)物撞擊儀建立的大鼠胰腺創(chuàng)傷模型，傷情穩(wěn)定、操作便捷、能夠較好的模擬胰腺組織發(fā)生創(chuàng)傷后的病理生理變化、為后續(xù)實(shí)驗(yàn)奠定了研究基礎(chǔ)。大鼠胰腺創(chuàng)傷模型建立好后，經(jīng)大鼠尾靜脈注射注hUC-MSCs或hUCMSC-Ex后，胰腺水腫程度較TP組減輕，部分損傷區(qū)域的胰腺組織輪廓尚存，胰腺小葉結(jié)構(gòu)未完全破壞，損傷區(qū)域可見(jiàn)正常外分泌細(xì)胞結(jié)構(gòu)，間質(zhì)中炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)明顯較少；經(jīng)hUC-MSCs或hUCMSC-Ex干預(yù)治療后的大鼠血清中的促炎因子TNF-α、IL-6 表達(dá)水平顯著降低，抑炎因子 IL-10、TGF-β的表達(dá)水平明顯升高，表明hUCMSC-Ex可以通過(guò)調(diào)控創(chuàng)傷性胰腺炎大鼠體內(nèi)炎癥因子的表達(dá)對(duì)大鼠損傷的胰腺組織發(fā)揮修復(fù)作用，其作用效果同hUC-MSCs基本一致。此外，研究結(jié)果顯示經(jīng)hUC-MSCs和hUCMSC-Ex治療的創(chuàng)傷性胰腺炎的大鼠體內(nèi)凋亡蛋白Bax、Csapase-3下調(diào)，呈現(xiàn)抑制凋亡的趨勢(shì)。同樣，TUNEL染色結(jié)果也提示hUCMSC-Ex對(duì)胰腺創(chuàng)傷后毀損組織的修復(fù)可通過(guò)抑制大鼠胰腺細(xì)胞的凋亡發(fā)揮作用。由此可以得出hUCMSC-Ex 或hUC-MSCs對(duì)大鼠創(chuàng)傷性胰腺炎的治療具有相同的作用，但hUCMSC-Ex比其親本細(xì)胞更小、復(fù)雜程度更低、更易于生產(chǎn)和儲(chǔ)存，沒(méi)有腫瘤形成的風(fēng)險(xiǎn)，并且由于其膜結(jié)合蛋白含量較低，免疫原性也比其親本低。因此，能夠?yàn)楹罄m(xù)創(chuàng)傷性胰腺炎的基于無(wú)細(xì)胞的“干細(xì)胞”替代性治療奠定理論基礎(chǔ)。

綜上所述，hUCMSC-Ex可以通過(guò)控制全身性的炎癥反應(yīng)，抑制大鼠腺泡細(xì)胞凋亡，從而減輕大鼠創(chuàng)傷性胰腺炎胰腺組織的損傷，加快其修復(fù)。然而，hUCMSC-Ex發(fā)揮作用的具體分子機(jī)制尚未可知，在未來(lái)的臨床應(yīng)用之前，還需要大量的深入研究。