樊李平 李 慧 易 紅

深圳市寶安區(qū)婦幼保健院產(chǎn)科，廣東深圳 518000

原發(fā)性卵巢功能不全（primary ovarian insufficiency，POI）在40歲前的女性中發(fā)生率約為1%，30歲前為1/1000。造成POI的病因復(fù)雜，其中遺傳性因素越來(lái)越受到關(guān)注。近年來(lái)對(duì)脆性X智力低下1（fragile X mental retardation 1，F(xiàn)MR1）基因研究較多，F(xiàn)MR1基因前突變攜帶者發(fā)生POI的概率較高，由于這類POI與脆性X染色體相關(guān)，所以又稱為脆性X相關(guān)原發(fā)性卵巢功能不全（fragile X-associated primary ovary insufficiency，F(xiàn)XPOI）[1-3]。FMR1基 因前突變可能會(huì)引起女性卵巢功能不全，從而引起反復(fù)流產(chǎn)、胚胎停育、不孕等，另外攜帶FMR1前突變的母親可能會(huì)分娩攜帶全突變的子女，從而增加脆性X染色體綜合征（fragile X syndrome，F(xiàn)XS）的發(fā)病，特別是男嬰。FXS主要表現(xiàn)為中度到重度的智力低下，發(fā)病率僅次于唐氏綜合征，是又一大類與智力發(fā)育低下有關(guān)的人類遺傳病。所以，研究FMR1前突變對(duì)女性生育及優(yōu)生優(yōu)育有重要的意義[4]。本研究旨在分析FMR1與POI的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取深圳市寶安區(qū)婦幼保健院（我院）于2018年10月至2020年10月接收的POI患者50例作為試驗(yàn)組；另外選取來(lái)我院進(jìn)行婚前檢查或孕前檢查的健康人群50例作為對(duì)照組。對(duì)照組中，年齡22～40歲，平均（28.49±2.03）歲。試驗(yàn)組中，年齡22～40歲，平均（27.87±1.22）歲，兩組患者一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P> 0.05），具有可比性。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合POI的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]；②2次性激素6項(xiàng)卵泡刺激素（FSH）>15 IU/L的育齡期婦女；③患者本人及家屬簽署知情研究協(xié)議書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①由于手術(shù)因素或疾病因素引起的POI患者；②中途脫離者；③合并精神障礙或者有精神疾病史患者。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核通過(guò)。

1.2 方法

對(duì)入選者均抽取肘靜脈血。采用基因測(cè)序方法（PCR方法）對(duì)FMR1基因進(jìn)行檢測(cè)。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察比較兩組患者不同年齡組、片段區(qū)間中CGG序列重復(fù)數(shù)目，了解CGG序列重復(fù)數(shù)目與POI發(fā)病年齡的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)，多組檢驗(yàn)采用F檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料用[n（%）]表示，采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用logistic回歸分析，P< 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組不同年齡、片段區(qū)間的CGG序列重復(fù)數(shù)目比較

兩組不同年齡、片段區(qū)間的CGG序列重復(fù)數(shù)目比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P< 0.05），見表1。

表1 兩組不同年齡、片段區(qū)間的CGG序列重復(fù)數(shù)目比較（次，x ± s）

2.2 POI的多因素logistic回歸分析

年齡、片段區(qū)間是POI的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（OR=1.867、1.558，P=0.022、0.017），見表2～3。

表2 變量賦值表

表3 POI的多因素logistic回歸分析

3 討論

荷蘭科學(xué)家Verkerk等[6]應(yīng)用定位克隆法，首次在Xq27.3處克隆出形成脆性X綜合征的致病基因FMR1，并相繼發(fā)現(xiàn)其表達(dá)的mRNA以及翻譯的蛋白質(zhì)（FMRP）。FMR1基因位于Xq27.13，長(zhǎng)約38 kb，由17個(gè)外顯子和16個(gè)內(nèi)含子組成，在FMR1基因的5’端第一個(gè)外顯子上的非編碼區(qū)包含有一個(gè)（CGG）n三核苷酸串聯(lián)重復(fù)序列，重復(fù)序列中每9～10個(gè)CGG重復(fù)有一個(gè)AGG嵌入，（CGG）n在重復(fù)片段長(zhǎng)度和AGG嵌入模式上都存在多態(tài)性，在其上游大約250 bp處有一個(gè)CPG島，是基因突變的常見區(qū)域，也是X染色體脆性形成的部位。根據(jù)FMR-1 基因的表型和遺傳的不穩(wěn)定性，CGG重復(fù)序列數(shù)目的不同，可把FMR1基因突變分為四種：①正常范圍：（CGG）n=5～44，常見的重復(fù)長(zhǎng)度為29或30，在有絲分裂及減數(shù)分裂中保持穩(wěn)定；②中間突變或灰色區(qū)域：（CGG）n=45～54，或者是連續(xù)35～45的CGG重復(fù)序列而沒(méi)有AGG中斷，在傳遞過(guò)程中有不確定性，在下一代不會(huì)擴(kuò)展成全突變。穩(wěn)定性介于正常范圍與前突變之間，臨床上有可能發(fā)生POI；③前突變：（CGG）n=55～199，在傳代過(guò)程中不穩(wěn)定，易發(fā)生進(jìn)一步擴(kuò)展，前突變CPG島一般不甲基化[7-11]。臨床表現(xiàn)為FXPOI以及共濟(jì)失調(diào)綜合征；④全突變：（CGG）n≥200，大多數(shù)全突變都伴有CPG島的異常超甲基化，超甲基化使FMR1基因沉默，導(dǎo)致FMRP缺失引起智力低下，表現(xiàn)為FXS。

FMR1位于X染色體上，屬于X連鎖的單基因遺傳病，即女性攜帶者有50%概率傳遞給下一代，而男性攜帶者將100%傳給女性后代且不會(huì)傳給男性后代。因?yàn)镃GG重復(fù)序列在遺傳過(guò)程中的不穩(wěn)定性，如果母親為前突變攜帶者，那么其下一代有可能發(fā)展為全突變，有研究發(fā)現(xiàn)，如果母親攜帶重復(fù)序列的數(shù)目大約為100時(shí)，其子女發(fā)生全突變的概率接近100%。當(dāng)母親重復(fù)序列中間插入一個(gè)或多個(gè)AGG時(shí)，子代發(fā)生全突變的風(fēng)險(xiǎn)降低，攜帶前突變的男性其子代很少發(fā)生全突變。女性FMR1前突變攜帶者有50%的概率傳遞給下一代，由于卵母細(xì)胞減數(shù)分裂時(shí)CGG重復(fù)序列不穩(wěn)定發(fā)生異常擴(kuò)增，因此女性FMR1基因前突變攜帶者有生育FXS患兒的風(fēng)險(xiǎn)。風(fēng)險(xiǎn)率與母親攜帶CGG重復(fù)序列數(shù)目呈線性關(guān)系。有FXS家族史的女性，其后代約有17.6%概率為FMR1基因全突變攜帶者。FXS的發(fā)病率在男性人群中大約為1/2500～1/1200，大致占到男性智力低下患者的4%～8%，在女性人群中大約為1/5000～1/1650[12-13]。FXS主要表現(xiàn)為中度到重度的智力低下，特殊面容（前額突出、嘴大唇厚、下頜大而前突、大耳、高腭弓、唇厚、下唇突出），另一個(gè)重要的表現(xiàn)是大睪丸癥。由于女性有兩條X染色體，女性雜合子中約1/3可有輕度智力低下。

女性FMR1前突變攜帶者不僅其后代存在患FXS的風(fēng)險(xiǎn)，同時(shí)本人存在可能發(fā)生POI的風(fēng)險(xiǎn)[14]。有研究[15-16]發(fā)現(xiàn)，在人群中由于X染色體異常引起POI的大約比例為13%，其中，由于FMR1前突變引起的X染色體異常約為6%，攜帶有前突變等位基因的婦女中患原發(fā)性卵巢早衰的概率為13%～25%，大約3%散發(fā)的卵巢早衰女性攜帶有前突變等位基因，而家族性卵巢早衰患者中大約有11%攜帶有前突變等位基因[17]。雖然最近有報(bào)道稱POI患者中只有2%攜帶有前突變，但是前突變攜帶者40歲以前發(fā)生繼發(fā)閉經(jīng)的概率比正常人群要高5倍以上[18]。全突變等位基因的女性患FXPOI的概率和正常人群無(wú)差別[19]，在攜帶中間突變的婦女中FXPOI的風(fēng)險(xiǎn)沒(méi)有明顯增加。對(duì)FMR1基因進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)CGG重復(fù)序列的數(shù)目與女性的閉經(jīng)年齡相關(guān)[20]。

本研究顯示，POI發(fā)生年齡、片段區(qū)間與FMR1基因前突變的CGG序列重復(fù)數(shù)目相關(guān)，說(shuō)明FMR1基因前突變的CGG序列重復(fù)數(shù)目可能引起POI的發(fā)生，但因疾病組例數(shù)較少，且因疾病組因個(gè)體記憶影響對(duì)POI發(fā)生年齡不能做到精準(zhǔn)描述和判定，所以FMR1基因前突變的CGG序列重復(fù)數(shù)目對(duì)POI發(fā)生年齡的影響尚無(wú)確定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，仍需增加樣本數(shù)目繼續(xù)研究?jī)烧咧g的關(guān)系。