解晨曦 畢 波

新疆醫(yī)科大學(xué)第五附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，新疆烏魯木齊 830011

冠心病指由于冠狀動(dòng)脈供血不足，致使心肌 壞死、缺血，導(dǎo)致心臟收縮力減弱、順應(yīng)性降低等功能障礙類心血管疾病，已成為嚴(yán)重威脅患者生命安全的疾病之一[1-2]。低密度脂蛋白（low density lipoprotein，LDL）作為公認(rèn)的冠心病危險(xiǎn)因素，其在顆粒大小、密度與物理化學(xué)性質(zhì)等方面具有異質(zhì)性[3-4]。將其按照顆粒大小不同，可分為小而密LDL（small dense low density lipoprotein，sdLDL）和大而輕LDL（large and light low density lipoprotein，IbLDL）。sdLDL可作為冠心病的首要脂類危險(xiǎn)因素[5]。當(dāng)前sdLDL的檢驗(yàn)方法包括梯度凝膠電泳法、密度梯度超速離心法、化學(xué)沉淀法和過(guò)氧化物酶法，但梯度凝膠電泳法分析速度慢，且操作繁瑣，密度梯度超速離心法所需時(shí)間長(zhǎng)，且檢測(cè)儀器昂貴。本研究選擇應(yīng)用較多的過(guò)氧化物酶法和肝素鎂沉淀法進(jìn)行比較。但國(guó)內(nèi)對(duì)肝素鎂沉淀法和過(guò)氧化物酶法檢測(cè)冠心病患者血清sdLDL的相關(guān)研究較少，基于此，本研究通過(guò)對(duì)82例冠心病患者sdLDL進(jìn)行分析，探討肝素鎂沉淀法和過(guò)氧化物酶法的應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取82例新疆醫(yī)科大學(xué)第五附屬醫(yī)院2021年1—8月收治的冠心病患者，納入標(biāo)準(zhǔn)：①冠心病診斷參照《心血管內(nèi)科學(xué)》[6]，經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影確診為冠心??；認(rèn)知功能正常者；依從性良好者；臨床資料完整者。排除標(biāo)準(zhǔn)：伴有高血壓致左心室肥厚者：合并持續(xù)性室速、房顫等嚴(yán)重心律失常者；合并嚴(yán)重感染性疾病者。其中男45例，女37例；年齡55～70歲，平均（62.56±4.67）歲；疾病類型：穩(wěn)定型心絞痛31例，心肌梗死21例，不穩(wěn)定型心絞痛30例。本研究全部冠心病患者簽署診療知情同意書，課題立項(xiàng)已獲得醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

入院后，對(duì)全部患者均行常規(guī)檢查，并記錄身體相關(guān)指標(biāo)。抽取冠心病患者空腹靜脈血，進(jìn)行離心（3500 r/min，15 min），分離血清，采用AU5800全自動(dòng)生化分析儀（美國(guó)貝克曼，粵械注準(zhǔn)：20162220214），三酰甘油（triacylglycerol，TG）與總膽固醇（total cholesterol，TC）使用貝克曼試劑，LDL使用上海藍(lán)怡試劑，sdLDL-C過(guò)氧化物酶法使用寧波美康生物試劑（批號(hào)：085813），相關(guān)步驟嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書進(jìn)行。sdLDL-C過(guò)氧化物酶法使用特定的離子選擇劑和酶，并排除其他脂蛋白膽固醇的干擾，和特定的sdLDL-C選擇性反應(yīng)。首先，在離子選擇劑作用下，對(duì)sdLDL-C以外的脂蛋白選擇性抑制，并將非sdLDL-C成分清除干凈。使sdLDL-C在膽固醇氧化酶與膽固醇酯酶作用下，生成過(guò)氧化氫，并在過(guò)氧化物酶作用下，和色原生成紫紅色酶類物質(zhì)，進(jìn)而檢驗(yàn)sdLDL-C水平。取3 μl血清，與150 μl試劑1[膽固醇酯酶1.5 KU/L，磷酸鹽緩沖液100 mmol/L，磷脂酶2.5 KU/L，膽固醇氧化酶1 KU/L，過(guò)氧化物酶6 KU/L，N-乙基-N-（2-羥基3-磺丙基）3-甲基苯胺鈉鹽1.78 mmol/L，1-丁基-3甲基咪唑六氟磷酸鹽0.1 ml/L]混勻，37° C孵育5 min，讀取吸光度。并與50 μl試劑2（4-氨基安替比林2.5 mmol/L，磷酸鹽緩沖液100 mmol/L，乙二按四乙酸50 mmol/L）混勻，37℃孵育5 min，讀取吸光度，計(jì)算sdLDL-C。

肝素鎂沉淀法：將200 μl肝素鎂沉淀劑與200 μl血清加入離心管中，混合均勻，在37℃條件下，水浴10 min，隨后冰浴15 min。在4℃條件下進(jìn)行離心處理（16 600 r/min，15 min）。通過(guò)全自動(dòng)生化分析儀檢驗(yàn)上清液LDL-C濃度，即為血清sdLDL-C濃度。

1.3 觀察指標(biāo)及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

①sdLDL-C精密度分析：選擇sdLDL-C濃度為2.57、1.42、0.21 mmol/L高、中、低水平的樣品各1份，每日檢測(cè)2次，每次均檢測(cè)2遍，共檢測(cè)20 d。根據(jù)美國(guó)國(guó)家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（NCCLS）EP5-T2文件[7]評(píng)價(jià)精密度。②線性分析：取1高值標(biāo)本（sdLDL-C濃度為2.56 mmol/L）和1低值標(biāo)本（sdLDL-C濃度為0.15 mmol/L），等量混勻后，制備為中值標(biāo)本（sdLDL-C濃度為1.36 mmol/L），將中值標(biāo)本分別與高、低值標(biāo)本等量混勻后，制備的sdLDL-C濃度分別為1.96、0.76 mmol/L。將上述5個(gè)標(biāo)本分別使用肝素鎂沉淀法和過(guò)氧化物酶法測(cè)定4次，根據(jù)NCCLS（EP6-P）的相關(guān)評(píng)價(jià)方案進(jìn)行線性分析。③肝素鎂沉淀法和過(guò)氧化物酶法測(cè)定sdLDL-C水平的結(jié)果：選擇患者血清82份，sdLDL-C濃度為0.10～2.59 mmol/L，分別使用肝素鎂沉淀法和過(guò)氧化物酶法檢測(cè)sdLDL-C水平，并根據(jù)NCCLS（EP9-P）評(píng)價(jià)方案進(jìn)行方法學(xué)比較。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

結(jié)果數(shù)據(jù)納入SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)，多個(gè)樣本均數(shù)間比較用方差分析；計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，采用χ2檢驗(yàn)，P< 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肝素鎂沉淀法和過(guò)氧化物酶法檢測(cè)sdLDL-C精密度分析

過(guò)氧化物酶法和肝素鎂沉淀法檢測(cè)sdLDL-C，批間、批內(nèi)、總變異系數(shù)均<2.972%，精密度較好，見(jiàn)表1。

表1 改良化學(xué)沉淀法和過(guò)氧化物酶法檢測(cè)sdLDL-C精密度分析（n=43）

2.2 線性分析

線性回歸方程分別為肝素鎂沉淀法：Y=0.973X+0.025；過(guò)氧化物酶法：Y=0.991X+0.023，sdLDL-C水平處于0.10～2.59 mmol/L時(shí)，線性良好，肝素鎂沉淀法與過(guò)氧化物酶法均有良好的相關(guān)性，且呈正直線關(guān)系（P< 0.05）。

2.3 肝素鎂沉淀法和過(guò)氧化物酶法測(cè)定sdLDL-C水平的結(jié)果比較

肝素鎂沉淀法和過(guò)氧化物酶法測(cè)定sdLDL-C水平（TG值<4.0 mmol/L）結(jié)果表明，過(guò)氧化物酶法測(cè)定sdLDL-C水平為（1.18±0.19）mmol/L，肝素鎂沉淀法測(cè)定sdLDL-C水平為（1.21±0.20）mmol/L，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=0.137，P=0.856）。

3 討論

冠心病的病機(jī)較為復(fù)雜，其中血栓形成和心血管動(dòng)脈粥樣硬化在冠心病演變過(guò)程中具有重要作用，脂類代謝紊亂為常見(jiàn)表現(xiàn)[8-9]。血清LDL是動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的危險(xiǎn)因素，隨著研究的逐漸深入，sdLDL作為L(zhǎng)DL亞組之一，已成為脂質(zhì)代謝的研究重點(diǎn)，其與冠心病密切相關(guān)[10-11]。因此，檢測(cè)血清sdLDL-C對(duì)冠心病的診治具有重要作用[12-13]。

sdLDL-C作為L(zhǎng)DL-C的主要成分，半衰期較長(zhǎng)，和sdLDL-C受體親和性不高，對(duì)患者血管壁侵入性較高，且對(duì)氧化應(yīng)激耐受性較低，可作為冠心病的獨(dú)立危險(xiǎn)因子[14-15]。肝素鎂沉淀法作為一種通過(guò)投加肝素鎂沉淀劑，使血液中需要去除的溶解物質(zhì)轉(zhuǎn)化為難溶物質(zhì)而析出的處理方式，和傳統(tǒng)化學(xué)沉淀法相比，具有樣本用量少、無(wú)需特殊儀器、價(jià)格低廉和操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，更適用于血清sdLDL-C水平檢測(cè)[16]。而過(guò)氧化物酶法檢測(cè)使用特定的離子選擇劑和酶，并排除其他脂蛋白膽固醇的干擾，和特定的sdLDL-C選擇性反應(yīng)，后使用酶法定量檢測(cè)其含量。優(yōu)點(diǎn)在于可直接檢測(cè)sdLDL-C，受其他脂蛋白膽固醇干擾小，同時(shí)不含鎂離子，對(duì)儀器基本沒(méi)有損傷，適用于多種生化分析儀[17]。本研究結(jié)果顯示，過(guò)氧化物酶法和肝素鎂沉淀法檢測(cè)sdLDL-C，批間、批內(nèi)、總變異系數(shù)均<2.972%，精密度較好，提示過(guò)氧化物酶法檢測(cè)冠心病患者血清sdLDL-C的精密度較高，有利于為冠心病的診治和預(yù)后評(píng)估，為其提供相應(yīng)參考依據(jù)[18]，線性回歸方程分別為肝素鎂沉淀法：Y=0.973X+0.025，過(guò) 氧 化 物 酶 法：Y=0.991X+0.023，sdLDL-C水 平處于0.10～2.59 mmol/L時(shí)，線性良好，肝素鎂沉淀法與過(guò)氧化物酶法均有良好的相關(guān)性，且呈正直線關(guān)系（P< 0.05），提示過(guò)氧化物酶法與肝素鎂沉淀法相比較，TG值<4.0 mmol/L時(shí)，對(duì)于結(jié)果檢測(cè)的相關(guān)性良好，而TG值>4.0 mmol/L時(shí)，不利于使用F計(jì)算法。肝素鎂沉淀法和過(guò)氧化物酶法測(cè)定LDL-C水平（TG值<4.0 mmol/L）結(jié)果比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P> 0.05），提示TG值<4.0 mmol/L時(shí)，肝素鎂沉淀法和過(guò)氧化物酶法測(cè)定結(jié)果均不受TG值影響，TG值>4.0 mmol/L時(shí)，肝素鎂沉淀法和過(guò)氧化物酶法測(cè)定結(jié)果有一定差異。通過(guò)肝素鎂沉淀法和過(guò)氧化物酶法檢測(cè)冠心病患者血清sdLDL-C，有利于為臨床提供可靠的檢驗(yàn)數(shù)據(jù)，進(jìn)而指導(dǎo)冠心病篩查與治療。但本研究仍存在不足之處，如研究樣本數(shù)量較少，不能對(duì)肝素鎂沉淀法和過(guò)氧化物酶法檢測(cè)冠心病患者sdLDL-C的精密度做出準(zhǔn)確判斷，因此，臨床可擴(kuò)大樣本數(shù)量進(jìn)行研究，以進(jìn)一步提高研究結(jié)果的準(zhǔn)確性。

綜上，肝素鎂沉淀法和過(guò)氧化物酶法的相關(guān)性良好，對(duì)于冠心病患者血清sdLDL-C均有較好的檢測(cè)效果，但過(guò)氧化物酶法更為快速、簡(jiǎn)便，更有助于sdLDL檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)施，值得臨床廣泛推廣。