金書屹，韓 鳳，陶 偉，羅 川，謝國勇*，秦民堅*

(1.中國藥科大學(xué) 中藥學(xué)院，江蘇 南京 210009； 2. 重慶市藥物種植研究所，重慶 南川 408435)

巖黃連作為我國壯族的民族藥，中醫(yī)認為其味苦、性涼，有清熱解毒、利濕、止痛止血的功效[1-3]。在《中國植物志》中，峨眉黃連Coptis omeiensis（Chen）C. Y. Cheng、短莛黃堇Corydalis pseudorupestrisLiden et Z. Y. Su Act. Bot. Yunn、毛黃堇Corydalis tomentellaFranch.、川鄂黃堇Corydalis wilsoniiN. E. Brown 和石生黃堇Corydalis saxicolaBunting 均被稱為巖黃連[2]，目前石生黃堇和毛黃堇在市場上作為巖黃連的流通最廣。野生巖黃連資源稀缺，廣西等地區(qū)已實現(xiàn)人工培育巖黃連，前期研究表明野生和栽培巖黃連的化學(xué)成分以及藥理作用有一定的差異[4]，但關(guān)于野生和栽培巖黃連的顯微差異并未見詳細報道。因此，本研究以石生黃堇和毛黃堇兩種植物為主要研究對象，收集了野生以及栽培藥材，并對其進行生藥學(xué)研究，旨在通過生藥學(xué)鑒定來區(qū)別巖黃連不同的基原及來源，為進一步開發(fā)利用巖黃連資源提供參考依據(jù)。

1 材料與儀器

野生和栽培巖黃連樣品分別來自貴州、廣西、云南、湖北等地，經(jīng)中國藥科大學(xué)謝國勇副教授鑒定，中國藥科大學(xué)秦民堅教授復(fù)核，分別為石生黃堇Corydalis saxicolaBunting 以及毛黃堇Corydalis tomentellaFranch.，樣品信息見表1。

表1 巖黃連藥材樣品信息Tab. 1 Sample information of Yanhuanglian

NIKON ECLIPSE E200 型顯微鏡[尼康映像儀器銷售（中國）有限公司]；HISTOSTAT 820 型石蠟切片機（美國Reichert 公司）；NIKON D7500 型數(shù)碼單反相機[尼康映像儀器銷售（中國）有限公司]；GZX-9240ME 型烘箱（上海精宏實驗設(shè)備有限公司）；BATHS HH-S4 型水浴鍋（金壇市醫(yī)療儀器廠）；惠普超純凈水儀（四川優(yōu)普超純科技有限公司）；KH5200DB 型超聲波清洗器（昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司）；ZF-I 型三用紫外分析儀（上海顧村電光儀器廠）；巴馬丁、脫氫卡維丁標(biāo)準(zhǔn)品（成都植標(biāo)化純生物技術(shù)有限公司）；甲醇（上海星可高純?nèi)軇┯邢薰荆徽〈?、乙酸（南京化學(xué)試劑有限公司）。

2 方法

2.1 橫切面鑒定

每種巖黃連藥材取三份，分別對其根、莖、葉柄、葉片進行橫切，放入新鮮配制的FAA 固定液中（福爾馬林∶乙酸∶50%乙醇 = 1 ∶1 ∶18），24 h 后進行更換，將固定好的材料進行石蠟包埋切片，之后使用番紅-固綠染色。置于顯微鏡下觀察并拍照，同時記錄特征信息。

2.2 粉末鑒定

每種巖黃連藥材取五份，分別對其根、莖、葉進行粉碎，將粉末用水合氯醛透化兩次后進行裝片，在顯微鏡下觀察拍照。

2.3 薄層色譜鑒定

準(zhǔn)確稱量每種巖黃連0.3 g，加入83%甲醇18 mL，超聲提取32 min，提取兩次，過濾后蒸干，殘渣加入1 mL 的甲醇溶解，作為供試品。另取巴馬丁、脫氫卡維丁適量，加入甲醇制成1 mg/mL 的對照品溶液。根據(jù)薄層色譜法改良[1,5-6]，分別吸取以上溶液各5 μL，點在同一硅膠G 薄層板上，以正丁醇∶乙酸∶水= 7 ∶1 ∶2 為展開劑，展開，取出，晾干，在紫外燈下365 nm 進行觀察拍照。

3 結(jié)果

3.1 橫切面特征

3.1.1 野生石生黃堇 根：木栓層有時殘留，皮層散有石細胞；維管束外韌型，韌皮部較窄，木質(zhì)部占大部分，射線較寬，導(dǎo)管呈放射狀排列，木質(zhì)部導(dǎo)管束多束，中央有髓，薄壁細胞不規(guī)則（圖1A）。莖：表皮由1 列橫向稍延長的細胞構(gòu)成，表皮外附有角質(zhì)層；皮層寬，皮層細胞卵圓形或不規(guī)則形；維管束10 個以上，外韌型；中央有髓，薄壁細胞大呈類圓形（圖1E）。葉柄：表皮由1 列類方形細胞構(gòu)成，表皮外附有角質(zhì)層；薄壁細胞較大，類圓形；維管束包埋在薄壁組織中，維管束不定，3 ～ 5 個，外韌型（圖1I）。葉：上、下表皮均由1 列橫向稍延長的細胞構(gòu)成，上表皮細胞較大；柵欄組織為長方形細胞；海綿組織由形態(tài)不規(guī)則的細胞組成；維管束在下表皮處微凸起，外韌型（圖1M）。

3.1.2 栽培石生黃堇 根：木栓層有時殘留，皮層散有石細胞；維管束外韌型，韌皮部較窄，木質(zhì)部占橫切面1/2 左右，導(dǎo)管呈放射狀排列；木質(zhì)部導(dǎo)管束多束，中央無髓。薄壁細胞不規(guī)則（圖1B）。莖：表皮由1 列橫向稍延長的細胞構(gòu)成，表皮外附有角質(zhì)層；皮層寬，皮層細胞不規(guī)則形；維管束5 ～ 8 個，外韌型；髓部髓占切面的1/2 左右，薄壁細胞不規(guī)則形（圖1F）。葉柄：表皮由1 列不規(guī)則形細胞構(gòu)成，薄壁細胞不規(guī)則形；維管束包埋在薄壁組織中，維管束不定，2 ～ 4 個，外韌型（圖1J）。葉：上、下表皮由1 列橫向稍延長的細胞組成，上表皮細胞較大；柵欄組織不發(fā)達；海綿組織由不規(guī)則細胞形細胞組成；維管束在下表皮處凸起，外韌型（圖1N）。

3.1.3 野生毛黃堇 根：木栓層有殘留，皮層散有石細胞；維管束外韌型，韌皮部較窄，木質(zhì)部占橫切面2/3，導(dǎo)管呈放射狀排列；木質(zhì)部導(dǎo)管束2 束，中央無髓。薄壁細胞不規(guī)則（圖1C）。莖：表皮由1 列類方形的細胞構(gòu)成，表皮外附有角質(zhì)層；皮層較寬，皮層細胞不規(guī)則形；維管束10 個以上，外韌型；髓部髓占切面的1/2 左右，薄壁細胞大呈不規(guī)則形（圖1G）。葉柄：表皮由1 列類方形細胞構(gòu)成，表皮外附有角質(zhì)層；薄壁細胞較大，不規(guī)則形；維管束包埋在薄壁組織中，維管束不定，5 ～ 8 個，外韌型（圖1K）。葉：上、下表皮由1 列縱向稍延長的細胞組成，上表皮細胞較大；表皮有非腺毛；柵欄組織不發(fā)達；海綿組織由不規(guī)則細胞形細胞組成；維管束在下表皮處凸起，外韌型（圖1O）。

3.1.4 栽培毛黃堇 根：木栓層有殘留，皮層散有石細胞；維管束外韌型，韌皮部較窄，木質(zhì)部占橫切面1/2，導(dǎo)管呈放射狀排列；木質(zhì)部導(dǎo)管束4 束，中央無髓。薄壁細胞類方形（圖1D）。莖：表皮由 1 列類方形的細胞構(gòu)成，表皮外附有角質(zhì)層；皮層較寬，皮層細胞不規(guī)則形；維管束外韌型；髓部髓占切面的1/2 左右，薄壁細胞大呈不規(guī)則形（圖1H）。葉柄：表皮由 1 列橫向延長的細胞構(gòu)成，表皮外附有角質(zhì)層；薄壁細胞較大，不規(guī)則形；維管束包埋在薄壁組織中，維管束不定，5 ～ 8 個，外韌型（圖1L）。葉：上、下表皮由1 列類圓形的細胞組成，上表皮細胞較大；表皮有非腺毛；柵欄組織不發(fā)達；海綿組織由不規(guī)則細胞形細胞組成；維管束在下表皮處微凸起，外韌型（圖1P）。

3.2 粉末特征

3.2.1 野生石生黃堇 根：棕褐色，偶見石細胞，呈方形、類圓形、不規(guī)則形，可見紋孔和層紋；纖維較少，長100 ～ 150 μm，可見層紋；網(wǎng)紋導(dǎo)管直徑10 ～ 50 μm；木栓組織表面觀類長方形，壁不均勻增厚（圖2A）。莖：棕色，偶見石細胞，呈方形、類圓形、不規(guī)則形，可見紋孔和層紋；纖維多成束，長70 ～ 150 μm，可見層紋；網(wǎng)紋導(dǎo)管直徑10 ～50 μm；木栓組織表面觀類長方形，壁不均勻增厚 （圖2E）。葉：墨綠色，偶見纖維，長200 ～ 250 μm；螺紋導(dǎo)管直徑5 ～ 25 μm，上下表皮細胞表面觀呈多角形，上表皮有蠟質(zhì)結(jié)構(gòu)。上表皮垂周壁平直，下表皮垂周壁淺波狀，下表皮有氣孔主為不定式和不等式，副衛(wèi)細胞大多為4 ～ 5 個（圖2I）。

3.2.2 栽培石生黃堇 根：棕黃色，纖維長150 ～200 μm，可見層紋；網(wǎng)紋導(dǎo)管直徑10 ～ 40 μm，木栓組織表面觀類不規(guī)則，壁不均勻增厚 （圖2B）。莖：黃綠色，纖維長200 ～ 300 μm，可見層紋；網(wǎng)紋導(dǎo)管較多見，直徑10 ～ 30 μm，螺紋導(dǎo)管較少見，直徑20 ～ 40 μm；木栓組織表面觀類不規(guī)則形，壁不均勻增厚 （圖2F）。葉：黃綠色，螺紋導(dǎo)管直徑5 ～15 μm，草酸鈣結(jié)晶存在在葉肉薄壁細胞中，方晶直徑5 ～ 10 μm，上表皮細胞細胞表面觀呈類圓形，下表皮細胞細胞表面觀呈多角形，上表皮垂周壁平直，下表皮垂周壁淺波狀，下表皮有氣孔，主為不定式和不等式，副衛(wèi)細胞大多為4 ～ 5 個；淀粉粒甚多，單粒類圓形，復(fù)粒2 ～ 3 個，直徑5 ～ 15 μm （圖2J）。

3.2.3 野生毛黃堇 根：棕色，草酸鈣結(jié)晶存在在薄壁細胞中，方晶直徑20 ～ 60 μm，網(wǎng)紋導(dǎo)管較多見，直徑30 ～ 50 μm，螺紋導(dǎo)管較少見，直徑5 ～10 μm；木栓組織表面觀類方形，壁不均勻增厚 （圖2C）。莖：黃綠色，具有晶纖維和纖維，纖維長200 ～300 μm，網(wǎng)紋導(dǎo)管較多見，直徑20 ～ 40 μm，螺紋導(dǎo)管較少見，直徑20 ～ 40 μm，木栓組織表面觀類不規(guī)則形，壁不均勻增厚 （圖2G）。葉：黃綠色，草酸鈣結(jié)晶存在在葉肉薄壁細胞中，方晶直徑10 ～ 20 μm；螺紋導(dǎo)管直徑5 ～ 10 μm；上表皮細胞細胞表面觀呈類圓形，上表皮有蠟質(zhì)結(jié)構(gòu)，下表皮細胞細胞表面觀呈多角形，上表皮垂周壁平直，下表皮垂周壁淺波狀，下表皮有氣孔，主為不定式和不等式，副衛(wèi)細胞大多為4 ～ 5 個。非腺毛細胞，長150 ～ 250 μm （圖2K）。

3.2.4 栽培毛黃堇 根：棕褐色，網(wǎng)紋導(dǎo)管直徑30 ～ 50 μm，木栓組織表面觀長方形，壁不均勻增厚（圖2D）。莖：棕黃色，纖維長300 ～ 500 μm；網(wǎng)紋導(dǎo)管直徑20 ～ 40 μm，木栓組織表面觀類不規(guī)則形，壁不均勻增厚 （圖2H）。葉：黃綠色，草酸鈣結(jié)晶存在在葉肉薄壁細胞中，方晶直徑5 ～ 10 μm，螺紋導(dǎo)管直徑5 ～ 10 μm；上表皮細胞細胞表面觀呈類圓形，上表皮有蠟質(zhì)結(jié)構(gòu)，下表皮細胞細胞表面觀呈多角形，上表皮垂周壁平直，下表皮垂周壁淺波狀，下表皮有氣孔，主為不定式和不等式，副衛(wèi)細胞大多為4 ～ 5 個；非腺毛細胞，長150 ～ 250 μm。非腺毛細胞，長150 ～ 250 μm （圖2L）。

3.3 薄層色譜鑒別

按照“2.3”項下方法處理12 批不同基原的野生和栽培巖黃連以及對照標(biāo)準(zhǔn)品，并按照“2.3”項下薄層色譜條件進行點樣，展開以及顯色，薄層色譜圖見圖3。從薄層色譜的結(jié)果得知，不同批次的巖黃連中主要的斑點共有4 個：自下而上為Rf 值0.44 的黃色斑點，Rf 值0.47 的黃色斑點，Rf 值0.48 的黃綠色斑點，Rf 值0.54 的黃色斑點。薄層色譜的結(jié)果表明不同來源的巖黃連具有明顯的區(qū)別：野生石生黃堇在Rf值為0.50 處有藍色斑點，毛黃堇在Rf 值為0.23 處有藍色斑點，栽培毛黃堇在Rf 值為0.66 處有紅色斑點。

3.4 不同基原的野生和栽培巖黃連的特征對比

為了方便對比不同基原的野生和栽培的巖黃連，綜合顯微鑒別和薄層色譜鑒別信息，見表2。

表2 不同基原的野生和栽培巖黃連的特征對比Tab. 2 Comparison of characteristics of wild and cultivated Yanhuanglian from different origin

4 討論

通過對比不同器官的解剖特征發(fā)現(xiàn)野生和栽培巖黃連存在一定的差異，野生石生黃堇根的中央具有髓部，而其它來源的巖黃連則不具備。髓部是由薄壁細胞組成，可特化為貯水組織，從而使植物適應(yīng)干旱的環(huán)境[7-8]，這可能是因為野生石生黃堇生長在巖石縫隙中缺少水分而形成的。野生巖黃連的莖也比栽培巖黃連具有更多的維管束，推測與野生巖黃連的生長環(huán)境有關(guān)：野生巖黃連生長在野外，需要更多的維管束提供水分和養(yǎng)分以保證植株的生長需求。野生石生黃堇的葉具有柵欄組織，而其它來源的巖黃連大多不具有，這可能是由于柵欄組織是葉肉組織中因為光合作用而特化出的一類細胞，干旱、氣溫都會對柵欄組織的形成有一定的影響[9-10]，栽培巖黃連大多是一年生植物，而野生石生黃堇則是多年生植物，多次經(jīng)歷低溫和干旱的脅迫，因此特化出柵欄組織適應(yīng)各種非生物脅迫。

野生石生黃堇的根和莖的粉末中可見石細胞，而其它來源巖黃連的根和莖中未見明顯的石細胞；石細胞是由于薄壁細胞的細胞壁木質(zhì)化增厚形成，主要具有增強植物體的機械強度的作用，機械強度的增加有利于野生石生黃堇的生長。野生毛黃堇的根中有網(wǎng)紋和螺紋兩種類型的導(dǎo)管，而其它來源巖黃連的根中只有網(wǎng)紋導(dǎo)管。毛黃堇的葉粉末中可見明顯的非腺毛，這個特征可以區(qū)分石生黃堇和毛黃堇，在栽培毛黃堇的莖中可見到草酸鈣結(jié)晶。

在薄層色譜中，毛黃堇在Rf 值較小段有藍紫色斑點，而石生黃堇中卻沒有，此藍紫色的斑點可以區(qū)別石生黃堇和毛黃堇，栽培毛黃堇在Rf 值較大段有紅色斑點，而野生毛黃堇中卻不具備，此紅色斑點可區(qū)別野生和栽培毛黃堇。

目前對于巖黃連的生藥學(xué)鑒定研究較少，且尚未有完整的標(biāo)準(zhǔn)，盡快完善鑒定標(biāo)準(zhǔn)對巖黃連的開發(fā)利用具有重要意義。不同基原的野生和栽培巖黃連的藥效具有一定的差異[4]，因此選擇合適的來源對于后期的研究具有重要意義，本研究主要從生藥學(xué)鑒定方面出發(fā)，找到了不同來源巖黃連的差異，為不同來源巖黃連的差異提供了一定的物質(zhì)基礎(chǔ)，也為巖黃連的藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立提供了依據(jù)。

5 結(jié)論

通過組織切片、粉末鑒定和薄層色譜法對比不同基原的野生和栽培巖黃連的顯微特征，為巖黃連的顯微鑒定提供一定的理論基礎(chǔ)，為巖黃連的鑒別及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立提供參考。但由于巖黃連分布較廣泛、數(shù)量較少且難以采摘，因此對于不同產(chǎn)地的巖黃連的收集較少，之后會進一步研究不同產(chǎn)地之間的特征差異，以期為巖黃連的鑒定提供更為全面的材料支持。