馮軍軍, 姜海云, 王 靜, 景正義, 張 帆, 譚天宇, 賀 鋒,江利華, 李海芹, 常世敏, 李騰飛*
(1. 河北工程大學(xué)生命科學(xué)與食品工程學(xué)院, 河北 邯鄲 056038; 2. 邯鄲市食品藥品檢驗(yàn)中心,河北 邯鄲 056004; 3. 河北工程大學(xué)材料科學(xué)與工程學(xué)院, 河北 邯鄲 056038)
豆芽又叫“芽苗菜”或“活體蔬菜”,具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值,富含多種維生素、礦物質(zhì)、游離氨基酸等對(duì)人體健康有益的成分[1-3]。近年來(lái)“毒豆芽”事件頻發(fā),豆芽中檢出植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑、殺菌劑以及抗生素的事件時(shí)有報(bào)道[4,5],嚴(yán)重威脅消費(fèi)者健康。植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑可促進(jìn)植物芽的形成,抑制植物根的生長(zhǎng)。殺菌劑、殺蟲(chóng)劑可殺滅豆芽中的細(xì)菌、霉菌及害蟲(chóng)??股仡愃幬锟煞乐垢扛癄€,從而起到保鮮的作用。長(zhǎng)期或大量食用這類“毒豆芽”會(huì)引起肝損害、過(guò)敏反應(yīng)或誘導(dǎo)病原體產(chǎn)生耐藥性。
目前,豆芽中植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑和抗生素檢測(cè)方法均有相關(guān)標(biāo)準(zhǔn),國(guó)家食品監(jiān)督管理局最新發(fā)布的BJS 201703《豆芽中植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的測(cè)定》可測(cè)定豆芽中11種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑[6];國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局發(fā)布的BJS 201909《豆制品、火鍋、麻辣燙等食品中喹諾酮類化合物的測(cè)定》可測(cè)定豆制品、火鍋、麻辣燙等食品中的11種喹諾酮類化合物[7]; 《豆芽中氟喹諾酮類和硝基咪唑類藥物殘留量的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》(T/ZACA 021-2020)可同時(shí)測(cè)定12種抗生素[8]。而能夠同時(shí)測(cè)定豆芽中多種不同類別的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑、殺菌劑、殺蟲(chóng)劑以及抗生素的研究還未見(jiàn)報(bào)道。當(dāng)前的檢測(cè)方法大多目標(biāo)化合物類別單一,且前處理繁瑣、耗時(shí),不能滿足快速、高效、準(zhǔn)確,以及多目標(biāo)物等處置食品安全突發(fā)事件的要求,因此選擇快速、高效的前處理方法并建立同時(shí)測(cè)定多種藥物殘留的分析方法對(duì)保障豆芽質(zhì)量安全具有重要意義。
QuEChERS法具有快速、簡(jiǎn)單、廉價(jià)、高效、安全等特點(diǎn),廣泛應(yīng)用于農(nóng)產(chǎn)品檢測(cè)的前處理過(guò)程中。本研究依據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)[9-28]及豆芽質(zhì)量安全監(jiān)管需求,選擇了植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑、殺菌劑、殺蟲(chóng)劑以及抗生素4種藥物作為目標(biāo)化合物,應(yīng)用改進(jìn)的QuEChERS法,結(jié)合高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù),建立了同時(shí)測(cè)定豆芽中40種藥物殘留的方法,并對(duì)21批豆芽中的藥物殘留進(jìn)行了分析。該方法拓展了現(xiàn)有檢測(cè)方法中涵蓋目標(biāo)物的種類,縮短了檢測(cè)時(shí)間,為加強(qiáng)豆芽的質(zhì)量安全監(jiān)管提供技術(shù)支撐。
LCMS-8030液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜儀、AUW120D電子天平、LabSolutions工作站(日本Shimadzu公司); KQ-250DE型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司); Direct-Q超純水儀(美國(guó)Millipore公司); HeraeusTMMegafugeTM8R冷凍離心機(jī)(美國(guó)Thermo公司); Vortex-Genie 2渦旋振蕩器(美國(guó)Scientific Industries公司); N-EVAP-112氮吹儀(美國(guó)Organomation公司)。
甲醇、乙腈、乙酸(色譜純)購(gòu)自美國(guó)Thermo公司;甲酸為色譜純,購(gòu)自北京百靈威科技有限公司;C18(50 μm)購(gòu)自天津博納艾杰爾科技有限公司;氯化鈉(分析純)購(gòu)自天津市瑞金特化學(xué)品有限公司;無(wú)水硫酸鎂(分析純)購(gòu)自天津歐博凱化工有限公司;實(shí)驗(yàn)用水為超純水;實(shí)際樣品購(gòu)自本地超市和市場(chǎng)。
11種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑混合標(biāo)準(zhǔn)溶液(赤霉素、4-氟苯氧乙酸、吲哚乙酸、異戊烯腺嘌呤、6-芐基腺嘌呤、4-氯苯氧乙酸、噻苯隆、吲哚丁酸、氯吡脲、2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、多效唑)、7種喹諾酮類藥物混合標(biāo)準(zhǔn)溶液(氧氟沙星、培氟沙星、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、洛美沙星、沙拉沙星)、依諾沙星、司帕沙星、矮壯素、莠去津、氟硅唑等標(biāo)準(zhǔn)溶液(純度均>98.5%)購(gòu)自美國(guó)A Chemtek公司;洛硝噠唑、甲硝唑、吡蚜酮、二甲硝咪唑、滅多威、多菌靈、毒死蜱、吡唑醚菌酯、氯霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液(純度均>98%)購(gòu)自邁迪嘉(天津)科技有限公司;啶蟲(chóng)脒、噻菌靈、吡蟲(chóng)啉、精甲霜靈、甲霜靈、嘧菌酯、三唑磷、氯唑磷等標(biāo)準(zhǔn)溶液(純度均>99%)購(gòu)自農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所。
混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液:分別移取40種標(biāo)準(zhǔn)溶液適量,以甲醇為溶劑配成質(zhì)量濃度為10 mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,于-18 ℃冰箱儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>
混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液:分別吸取10 mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1 mL于10 mL容量瓶中,用甲醇定容,配制成質(zhì)量濃度為1 mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,密封儲(chǔ)存于-18 ℃冰箱。
基質(zhì)匹配混合標(biāo)準(zhǔn)溶液:分別向1 mL容量瓶中加入2、5、10、20、50、100、200 μL 1 mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,用空白樣品提取液定容至刻度,配制成2、5、10、20、50、100、200 μg/L的基質(zhì)匹配混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,現(xiàn)配現(xiàn)用。
準(zhǔn)確稱取粉碎均勻的豆芽樣品5.00 g于50 mL聚丙烯離心管中,加入1顆陶瓷均質(zhì)子、4 g無(wú)水硫酸鎂和1 g NaCl后立即渦旋混合1 min,加入10 mL 1%(v/v,下同)乙酸乙腈溶液,渦旋混合1 min,超聲提取15 min, 8 000 r/min冷凍離心5 min,將上清液傾入50 mL具塞離心管中,殘?jiān)儆?0 mL 1%乙酸乙腈溶液重復(fù)提取1次,合并上清液。移取10 mL上清液在40 ℃氮吹至近干,加入1 mL 5%甲醇水溶液溶解殘?jiān)?渦旋均勻后加入稱有100 mg C18的10 mL塑料離心管中,渦旋混合2 min, 5 000 r/min離心5 min,過(guò)0.22 μm有機(jī)濾膜后上機(jī)測(cè)試。
色譜柱:Waters ACQUITY UPLC BEH C18柱(100 mm×2.1 mm, 1.7 μm);柱溫:40 ℃;流速:0.3 mL/min;二元流動(dòng)相:A為0.01%甲酸水溶液,B為甲醇。梯度洗脫程序:0~3 min, 5%B; 3~7 min, 5%B~30%B; 7~9 min, 30%B~85%B; 9~13 min, 85%B; 13~13.01 min, 85%B~5%B; 13.01~15 min, 5%B。進(jìn)樣體積:10 μL。
電噴霧電離(ESI)源,正離子模式和負(fù)離子模式掃描;接口電壓:4.5 kV;脫溶劑氣溫度:250 ℃;加熱塊溫度:450 ℃;干燥氣流速:15 L/min;霧化氣流速:3 L/min;多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)模式。40種化合物的保留時(shí)間和質(zhì)譜參數(shù)見(jiàn)表1。
在多反應(yīng)監(jiān)測(cè)、正、負(fù)離子模式下,分別對(duì)脫溶劑溫度、碰撞能量、噴針位置和選擇離子等進(jìn)行了充分優(yōu)化,選取經(jīng)碰撞后所得豐度較高的兩個(gè)子離子作為定量和定性離子,并確定最佳碰撞能量。最終所選擇確定的40種化合物的電離方式、母離子、子離子、碰撞能量及保留時(shí)間等參數(shù)見(jiàn)表1。
表 1 MRM模式下40種化合物的保留時(shí)間與質(zhì)譜參數(shù)Table 1 Retention times and MS/MS parameters for the 40 compounds in MRM mode
實(shí)驗(yàn)選用Waters ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱(100 mm×2.1 mm, 1.7 μm)分離40種目標(biāo)化合物。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:采用此色譜柱時(shí),40種化合物均可得到有效分離,且色譜峰峰形較好。
在流動(dòng)相的選擇實(shí)驗(yàn)中,首先考察甲醇和乙腈。經(jīng)過(guò)比較,當(dāng)采用乙腈為流動(dòng)相時(shí),大多數(shù)化合物分離效果優(yōu)于甲醇,靈敏度更高,但甲硝唑、喹諾酮類等部分化合物出峰時(shí)間過(guò)早,且出現(xiàn)雙峰;而采用甲醇為流動(dòng)相時(shí),各物質(zhì)均可獲得較好的分離度及較高的響應(yīng)值,故選擇甲醇為強(qiáng)洗脫有機(jī)相。
實(shí)驗(yàn)比較了水、0.01%甲酸水溶液、0.02%甲酸水溶液、0.03%甲酸水溶液、0.1%甲酸水溶液、2 mmol/L乙酸銨水溶液(含0.02%甲酸)等6種水相對(duì)40種化合物靈敏度及分離度的影響。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn):當(dāng)使用純水為水相時(shí),赤霉素峰形分裂,喹諾酮類化合物響應(yīng)較低,且大部分出現(xiàn)分叉、拖尾現(xiàn)象;加入0.01%甲酸后,吡蚜酮及喹諾酮類化合物峰形尖銳,靈敏度提高,但降低了赤霉素、氯霉素、2,4-D等部分化合物的峰響應(yīng)值。這是由于加入甲酸可以提高吡蚜酮等化合物的離子化效率,促進(jìn)了[M+H]+峰的形成,提高了質(zhì)譜響應(yīng)且改善了峰形。但加入甲酸降低了赤霉素、氯霉素、2,4-D等化合物的離子化效率,抑制了[M-H]-峰的形成,降低了其在質(zhì)譜上的響應(yīng)值。進(jìn)一步增大甲酸濃度,毒死蜱、矮壯素等化合物色譜峰響應(yīng)值變化不大,但大大降低了氯霉素、6-芐基腺嘌呤等化合物色譜峰的響應(yīng)值。當(dāng)使用2 mmol/L乙酸銨水溶液(含0.02%甲酸)為水相時(shí),雖可提高氯霉素、6-芐基腺嘌呤等部分化合物響應(yīng)值,但會(huì)使得喹諾酮類化合物峰形變差;故經(jīng)反復(fù)試驗(yàn)后選擇0.01%甲酸水溶液為水相。
在該流動(dòng)相體系下,40種化合物可達(dá)到較好分離。40種化合物的標(biāo)準(zhǔn)溶液(50 μg/L)總離子流(TIC)色譜圖見(jiàn)圖1。
圖 1 40種化合物標(biāo)準(zhǔn)溶液的總離子流圖Fig. 1 Total ion current chromatogram of the 40 compoundsPeaks. 1-40 were as the same as those in Table 1.
2.3.1提取溶劑的選擇
為了更好地提取豆芽中40種化合物,通過(guò)添加回收的方式分別比較了甲醇、乙腈、1%氨水乙腈、1%乙酸乙腈作為提取溶劑時(shí)的提取效果,添加水平為20 μg/kg。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:采用甲醇、乙腈、1%氨水乙腈時(shí)的回收率明顯低于乙腈,采用1%乙酸乙腈時(shí)的回收率最高,均高于78%。這是由于乙腈極性范圍寬、組織穿透能力強(qiáng),對(duì)大多數(shù)目標(biāo)化合物有較好的溶解性和提取效率,且對(duì)豆芽基質(zhì)中的脂肪、色素等有一定的去除能力,并減少基質(zhì)對(duì)目標(biāo)化合物的干擾。加入乙酸不僅可以破壞豆芽基質(zhì)的組織細(xì)胞,而且可以抑制赤霉素、吲哚乙酸、2,4-D等目標(biāo)化合物中羧基的解離,從而提高提取效率。因此最終選用1%乙酸乙腈作為提取溶劑。
2.3.2提取方式的選擇
本實(shí)驗(yàn)比較了超聲、振蕩兩種提取方式,通過(guò)回收率來(lái)驗(yàn)證40種化合物的提取效果。添加水平為20 μg/kg,每種提取方式做3個(gè)平行。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:在最優(yōu)條件下,采取超聲提取的方式優(yōu)于振蕩提取,40種化合物的平均回收率為79%~111%。這可能是因?yàn)槎寡吭谏L(zhǎng)過(guò)程中添加的藥物會(huì)通過(guò)代謝活動(dòng)進(jìn)入到組織細(xì)胞中,且還可能會(huì)以其他化合物形態(tài)存在,目標(biāo)化合物與組織細(xì)胞結(jié)合較為緊密,單純的振蕩形式無(wú)法有效提取目標(biāo)化合物。因此,本實(shí)驗(yàn)選用超聲作為提取方式。
QuEChERS凈化法常用的吸附凈化劑有PSA、C18、石墨化炭黑(GCB),其中PSA可以吸附基質(zhì)中的糖類、色素以及脂肪酸[29]。C18可以吸附脂肪和一些礦物質(zhì)。GCB能去除部分色素、固醇和具有平面結(jié)構(gòu)等極性大的基質(zhì)的干擾[30],但對(duì)儀器檢測(cè)器識(shí)別起干擾作用,且對(duì)含有平面芳香環(huán)結(jié)構(gòu)的農(nóng)藥分子有較強(qiáng)的吸附作用,如多菌靈[31],考慮到豆芽中色素的干擾不明顯,故不使用GCB作為凈化吸附劑。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,發(fā)現(xiàn)加入PSA使得極性較強(qiáng)的矮狀素以及吲哚乙酸、吲哚丁酸、赤霉素等含羧基化合物的回收率降低,其原因可能是由于PSA為堿性,對(duì)極性較強(qiáng)的矮狀素以及含有羧酸類的吲哚乙酸、吲哚丁酸等化合物有吸附作用。因此本實(shí)驗(yàn)比較了不同用量的C18吸附劑對(duì)目標(biāo)化合物回收率的影響,見(jiàn)圖2。結(jié)果表明:C18添加量在20~120 mg范圍內(nèi),各化合物的回收率差別不大。因此綜合考慮回收率及除雜效果,本實(shí)驗(yàn)選擇100 mg C18作為凈化吸附劑。
圖 2 不同用量的C18對(duì)目標(biāo)化合物回收率的影響Fig. 2 Effects of different dosages of C18 on the recoveries of the target compounds
為了消除樣品基質(zhì)對(duì)目標(biāo)化合物測(cè)定結(jié)果的影響,本實(shí)驗(yàn)采用提取后添加法[32],將陰性黃豆芽和綠豆芽按1.3節(jié)前處理方法處理后,配制50 μg/L的基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,同時(shí)采用純?nèi)軇┡渲葡嗤瑵舛鹊幕旌蠘?biāo)準(zhǔn)溶液,按式(1)通過(guò)計(jì)算兩者對(duì)應(yīng)的目標(biāo)化合物響應(yīng)值的比值作為基質(zhì)效應(yīng)評(píng)估值。
(1)
式中,ME表示基質(zhì)效應(yīng)大小。當(dāng)ME<1.0,則基質(zhì)對(duì)待測(cè)物的響應(yīng)產(chǎn)生抑制作用;當(dāng)ME>1.0,則基質(zhì)對(duì)待測(cè)物的響應(yīng)產(chǎn)生增強(qiáng)作用;當(dāng)ME=1.0,則說(shuō)明基質(zhì)對(duì)待測(cè)物沒(méi)有影響,這是一種理想狀態(tài)。A1為純?nèi)軇┲谢衔锏捻憫?yīng)值;A2為空白基質(zhì)溶液中該化合物的響應(yīng)值。
結(jié)果顯示:黃豆芽中40種化合物基質(zhì)效應(yīng)為0.74~2.21,綠豆芽中40種化合物基質(zhì)效應(yīng)為0.61~2.15,均存在一定的抑制或增強(qiáng)效應(yīng)。故為降低基質(zhì)效應(yīng)的影響,本實(shí)驗(yàn)采用空白基質(zhì)提取液配制混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行校正,經(jīng)校正后可有效消除基質(zhì)效應(yīng)帶來(lái)的影響,提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
2.6.1線性范圍、檢出限和定量限
按儀器工作條件對(duì)40種目標(biāo)化合物的基質(zhì)匹配混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測(cè)定,以40種目標(biāo)化合物的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo),以對(duì)應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并求出相應(yīng)的線性回歸方程及相關(guān)系數(shù)(r2)。在空白樣品中添加一定濃度的40種目標(biāo)化合物的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,按1.3節(jié)進(jìn)行前處理后上機(jī)測(cè)定。以3倍信噪比確定方法的檢出限(LOD),以10倍信噪比確定方法的定量限(LOQ)。40種目標(biāo)化合物的線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限見(jiàn)表2。結(jié)果表明:40種目標(biāo)化合物在2~200 μg/L的范圍內(nèi)與其峰面積呈良好的線性關(guān)系,r2均達(dá)0.99以上,檢出限為0.1~3.0 μg/kg,定量限為0.3~9.0 μg/kg。
表 2 40種化合物的線性方程、線性范圍、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限Table 2 Linear equations, linear ranges, correlation coefficients (r2), LODs and LOQs of the 40 compounds
表 2 (續(xù))Table 2 (Continued)
2.6.2回收率及精密度
在空白樣品中分別添加5、10、50 μg/kg 3個(gè)水平的40種混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn),每個(gè)水平平行測(cè)定6次,見(jiàn)表3。
表 3 40種化合物的回收率和精密度(n=6)Table 3 Recoveries and precisions of the 40 compounds (n=6)
表 3 (續(xù))Table 3 (Continued)
結(jié)果表明:40種目標(biāo)化合物回收率為78.5%~115.3%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.3%~9.7%。測(cè)定結(jié)果均符合GB/T 27404-2008《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范食品理化檢測(cè)》規(guī)定,說(shuō)明本方法對(duì)豆芽中40種化合物的測(cè)定均有良好的準(zhǔn)確度和精密度。
為了驗(yàn)證本方法的可靠性,同時(shí)了解邯鄲本地豆芽中藥物殘留的情況,采用本方法對(duì)本地超市和市場(chǎng)采集的21批次豆芽樣品進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果見(jiàn)表4。其中10批次有不同程度的檢出(>LOD),其余未檢出。4-氯苯氧乙酸、6-芐基腺嘌呤、多菌靈、2,4-D、赤霉素和恩諾沙星檢出率較高,分別為28.6%、19.0%、9.5%、9.5%、4.8%和4.8%,含量為37.5~352.4、32.4~273.1、28.8~38.7、16.1~20.2、19.9和13.6 μg/kg。從結(jié)果可以看出,豆芽中這些藥物殘留的風(fēng)險(xiǎn)較高。
同時(shí),將實(shí)際樣品中檢出的4-氯苯氧乙酸、6-芐基腺嘌呤、2,4-D、赤霉素與豆芽中植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的測(cè)定方法(BJS 201703)進(jìn)行比較,恩諾沙星與豆制品、火鍋、麻辣燙等食品中喹諾酮類化合物的測(cè)定方法(BJS 201909)進(jìn)行比較(見(jiàn)表4)。結(jié)果表明,本方法與標(biāo)準(zhǔn)方法測(cè)得結(jié)果基本一致,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.5%~8.3%,表明本方法數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠。
表 4 實(shí)際樣品檢測(cè)結(jié)果Table 4 Test results of real samples
對(duì)于恩諾沙星、氧氟沙星、諾氟沙星、多菌靈、莠去津、4-氯苯氧乙酸、6-芐基腺嘌呤以及赤霉素等大部分化合物的檢出限,與文獻(xiàn)[9,10,12,13,20-22,27,33-37]報(bào)道的方法相比(見(jiàn)表5),在回收率相當(dāng)?shù)那闆r下,本方法的檢出限低,無(wú)需過(guò)凈化柱,樣品前處理步驟簡(jiǎn)單、快速、靈敏、高效,且一次可以完成40種化合物的測(cè)定,擴(kuò)展了豆芽中藥物檢測(cè)種類,有效提高了日常監(jiān)測(cè)效率。
表 5 本方法與文獻(xiàn)方法的比較Table 5 Comparison of the proposed method with references
本文建立了QuEChERS結(jié)合液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜同時(shí)檢測(cè)豆芽中40種藥物殘留的分析方法。該方法前處理簡(jiǎn)單、快速、靈敏,定量結(jié)果準(zhǔn)確,適用于豆芽中多種藥物殘留的快速檢測(cè)。與現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)及已有文獻(xiàn)相比,該方法能實(shí)現(xiàn)豆芽中不同類別的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑、殺菌劑、殺蟲(chóng)劑以及抗生素等殘留的同時(shí)檢測(cè),大大縮短了檢測(cè)周期,不僅能夠?yàn)槲覈?guó)食品安全風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)和大量樣品篩查提供技術(shù)支撐,而且可以為以后相關(guān)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的制定提供重要參考。