劉佳麗，孫平良，肖團(tuán)有，王 榮，陳怒戈，李忠海

（1. 南京中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院 南京 210023；2. 廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院 南寧 530000；3. 珠海市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院 珠海 519000）

潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis, UC）是一種常見(jiàn)的腸道慢性炎癥，其關(guān)鍵環(huán)節(jié)是腸道反復(fù)的慢性炎癥引起腸黏膜壞死、通透性增加以及腸道黏膜屏障功能降低。主要癥狀為反復(fù)發(fā)生的腸道潰瘍，伴有腹痛、腹瀉及黏液血便[1-4]。由于持續(xù)的炎癥刺激從而導(dǎo)致腸道黏膜發(fā)生慢性炎癥反應(yīng)，不斷的損害腸道黏膜，最終導(dǎo)致了不典型增生（低度-高度）癌變的發(fā)生。隨著UC 的發(fā)病率的逐年升高，結(jié)腸炎相關(guān)結(jié)腸癌（colitis-associated cancer, CAC）較散發(fā)性大腸癌的發(fā)病率高4-10 倍[5]，UC 相關(guān)結(jié)直腸癌（ulcerative colitis related colorectal cancer,UCRCC）的發(fā)病率也呈逐年上升趨勢(shì)[6-7]。據(jù)報(bào)道，UC 患者30 年后轉(zhuǎn)變?yōu)閁CRCC 的發(fā)生率高達(dá)18%，這也是引起UC 患者死亡的重要原因[8-9]。與UCRCC 相關(guān)的危險(xiǎn)因素主要有發(fā)病年齡過(guò)早、病程較長(zhǎng)、腸道病變范圍廣泛、腸癌家族史以及免疫抑制劑使用等相關(guān)[10-12]。中醫(yī)治療潰瘍性結(jié)腸炎相關(guān)癌變具有減輕腸道炎癥反應(yīng)，緩解腹痛、黏液血便等癥狀。

目前對(duì)UCRCC 機(jī)制仍未明確，miRNA 調(diào)控NFκB 信號(hào)通路的激活炎癥因子變化是調(diào)節(jié)UCRCC 的重要因素。本文就miRNA 調(diào)控NF-κB 信號(hào)通路與UCRCC 及中藥干預(yù)作用的研究進(jìn)展綜述如下，為進(jìn)一步研究提供依據(jù)。

1 miRNA 影響潰瘍性結(jié)腸炎相關(guān)癌變的發(fā)生發(fā)展機(jī)制的研究

microRNA（miRNA）是一類非編碼RNA，對(duì)免疫細(xì)胞的發(fā)育凋亡、基因表達(dá)、乃至炎癥及腫瘤相關(guān)性疾病都有重要作用[13]。2008年，Wu 等人[14]首次檢測(cè)到了miRNA 在炎癥性腸病中高表達(dá)。隨后越來(lái)越多的研究表明在炎癥性腸病患者中炎癥的腸黏膜組織中普遍存在多種microRNA表達(dá)異常[15]。

相關(guān)研究表明miRNA 參與了腫瘤生長(zhǎng)、侵襲等過(guò)程[16]。miRNA 已逐漸成為多種癌癥的診斷和預(yù)后生物標(biāo)記分子，miRNA 在多種惡性腫瘤疾病的發(fā)生發(fā)展中均為異常表達(dá)，與肺、前列腺、結(jié)直腸癌[17-19]等多種癌癥疾病關(guān)系密切。相較于正常組織，在腫瘤細(xì)胞周期、凋亡、侵襲、血管生成等階段包括幾乎都存在miRNA表達(dá)異常的情況。

多個(gè)研究證實(shí)miR-21、miR-223 在UC 及UCRCC患者的腸組織及血清中呈高表達(dá)，且miR-223 升高程度與炎癥相關(guān)指標(biāo)血沉、C-反應(yīng)蛋白均成正比[20]。

研究結(jié)果表明，在UCRCC 發(fā)病中，由于UC 的持續(xù)炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致miR-21 表達(dá)增加，腸道黏膜通透性進(jìn)一步加重，腸上皮細(xì)胞凋亡/自噬加劇，從而進(jìn)一步破壞了腸道微生態(tài)的平穩(wěn)，進(jìn)而發(fā)生癌變[21]。2016 年Shi[22]等在Gut 研究指出：miR-21 在腸黏膜中的表達(dá)量：UCRCC ＞UC ＞相關(guān)不典型增生＞正常組織。宋予晴[23]研究表明miR-21 可以通過(guò)上調(diào)部分炎癥因子的表達(dá)，從而達(dá)到促進(jìn)炎癥發(fā)生，進(jìn)而使UC 患者結(jié)腸上皮組織發(fā)生癌變。miR-21 已成為炎癥反應(yīng)的一個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)，在UC動(dòng)物模型中，miR-21表達(dá)下調(diào)可減輕腸道的炎癥反應(yīng)；而miR-21 表達(dá)上調(diào)可使得腸道上皮通透性增加，腸黏膜屏障的破壞，從而進(jìn)一步加重炎癥的反應(yīng)。

鄧雙嬌[24]研究表明，miRNA-200b 表達(dá)水平與UCRCC發(fā)生發(fā)展呈負(fù)相關(guān)，在UCRCC中miRNA-200b表達(dá)下調(diào)，miRNA-200b 通過(guò)抑制AKT2 的表達(dá)，進(jìn)一步抑制炎癥因子NF-κB/IL-6/STAT3 這一級(jí)聯(lián)反應(yīng)，從而發(fā)揮抑瘤作用。

鄧穎[25]通過(guò)對(duì)小鼠UCRCC 的實(shí)驗(yàn)研究表明，let-7作為一種微小RNA，信號(hào)通路IL-6/STAT3 作用下的c-Myc、H19等原癌基因的過(guò)度表達(dá)以及l(fā)et-7a抑癌基因表達(dá)的降低，使得細(xì)胞過(guò)度增殖而產(chǎn)生UCRCC。

周海新[26]研究表明，在IL-6/STAT3信號(hào)通路作用下，miR-181b在小鼠UCRCC中呈高表達(dá)狀態(tài)。

劉潔瓊[27]研究表明，miR-139-5p 能夠通過(guò)抑制促炎因子（如IL-6、TNF-α、COX2 和MIP2 等）的表達(dá)，抑制炎癥的發(fā)生和發(fā)展，進(jìn)而最終降低UCRCC 的發(fā)生率。

miRNA 調(diào)控UCRCC 的作用機(jī)制主要是通過(guò)調(diào)控炎癥因子水平，達(dá)到控制腸道炎癥的發(fā)生發(fā)展。然而目前大部分研究局限于miRNA 與炎癥因子之間關(guān)系，其較明確的信號(hào)通路為IL-6/STAT3，是否存在其它信號(hào)通路仍未有進(jìn)一步探討及深入研究，下一步研究方向可重點(diǎn)挖掘其中潛在信號(hào)通路。

2 NF-κB 通路影響潰瘍性結(jié)腸炎相關(guān)癌變發(fā)生發(fā)展的機(jī)制研究

NF-κB（Nuclear factor-κB）是一種多功能的核轉(zhuǎn)錄因子，對(duì)多種細(xì)胞因子、黏附因子及生長(zhǎng)因子的表達(dá)具體調(diào)控作用，可啟動(dòng)子部位κB 位點(diǎn)發(fā)生特異性結(jié)合并促進(jìn)相關(guān)蛋白因子轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而參與多種炎癥和免疫的調(diào)節(jié)[28-29]。NF-κB 活化后具有調(diào)控腫瘤相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄的作用，可誘導(dǎo)細(xì)胞外基質(zhì)降解及血管生成[30]。NF-κB 的激活，可促進(jìn)炎性因子的釋放（如TNF-α、COX-2、IL-1、IL-8 以及細(xì)胞外基質(zhì)降解酶等細(xì)胞因子），當(dāng)炎性因子激活后又可以正反饋促進(jìn)NF-κB 活化，持續(xù)的炎性反應(yīng)可明顯增加腫瘤的發(fā)生率[31]，在腫瘤組織的中的表達(dá)過(guò)量將加速腫瘤的進(jìn)一步發(fā)展[32-34]。根據(jù)研究表明，炎癥性腸病患者和UCRCC 患者的腸道NF-κB 存在異?；罨F(xiàn)象，與病情活動(dòng)性及嚴(yán)重性呈正相關(guān)[35]。

TNF-α、IL-6 可以通過(guò)NF-κB 及相關(guān)信號(hào)通路在UC 的炎癥發(fā)生及癌變過(guò)程中發(fā)揮作用[36-37]。IL-6、TNF-α通過(guò)激活NF-κB、STAT1、STAT3等通路促進(jìn)結(jié)腸癌細(xì)胞的増殖與遷移[38-39]；IL-17A 可通過(guò)激活PI3K/AKT/NF-κB 信號(hào)通路促進(jìn)結(jié)腸癌細(xì)胞的遷移和增殖[40]。內(nèi)源性產(chǎn)生的TNF-α 通過(guò)以自分泌/旁分泌方式與TNF-Rp55 相互作用從而激活NF-κB 中的炎性因子，引起廣泛的結(jié)腸炎癥從而誘導(dǎo)結(jié)腸癌發(fā)生[41]。NF-κB 信號(hào)通路能夠上調(diào)靶基因PCNA 和Bcl-xL 產(chǎn)物，從而促進(jìn)細(xì)胞增殖和抑制凋亡在UCRCC 中發(fā)揮重要作用[42]。

Greten 等[43-44]實(shí)驗(yàn)表明UCRCC 小鼠結(jié)腸黏膜中NF-κB表達(dá)上調(diào)，通過(guò)抑制NF-κB通路可顯著的降低腸道炎癥及腫瘤發(fā)生。

張永峰[45]小鼠UCRCC 模型實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：結(jié)腸炎組小鼠結(jié)腸TLR4、NF-κB p65 蛋白表達(dá)增強(qiáng)，研究提示TLR4、NF-κB p65 可介導(dǎo)UC 的形成，而TLR4、NFκB p65、β-catenin、STAT3 蛋白及其信號(hào)通路則參與UCRCC的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。

NF-κB 信號(hào)通路通過(guò)激活炎癥因子，促進(jìn)細(xì)胞增殖和抑制凋亡，從而促進(jìn)患者UC 進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為UCRCC，或加速UCRCC 的腫瘤因子活化。已知調(diào)控NF-κB 信號(hào)通路促進(jìn)UCRCC 的進(jìn)一步發(fā)展，但對(duì)其上游是何種靶向因子或細(xì)胞調(diào)節(jié)NF-κB 通路目前研究較少，仍需進(jìn)一步深入研究。

3 NF-κB信號(hào)通路與miRNA

相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究表明miRNAs 與UC 存在相關(guān)性，部分miRNAs 在UC 的發(fā)病過(guò)程中起到了重要作用，如調(diào)控NF-κB通路、影響腸上皮屏障功能或自吞噬等[46]。

通過(guò)研究表明miR-21 可能通過(guò)促進(jìn)炎癥因子IL-1β、IL-6、TNF-α 參與UC 的炎癥發(fā)生及癌變過(guò)程。通過(guò)降低miR-21 表達(dá)從而抑制炎癥到腫瘤的進(jìn)展[23]。Shalkami[47]研究表明在炎癥反應(yīng)中，IL-6受體途徑觸發(fā)肌酸激酶-2 的產(chǎn)生，促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)信號(hào)分泌，引發(fā)STAT3，介導(dǎo)miR-214 轉(zhuǎn)錄，增加AKT 活化，激活NF-κB，引發(fā)更加持續(xù)的炎癥反應(yīng)。

蔣逵葵[48]通過(guò)研究小鼠UCRCC 模型提示miR-223 可通過(guò)抑制靶mRNAc CLDN8 提高TNF-α 的表達(dá)，活化NF-κB 信號(hào)通路參與小鼠腸道黏膜的炎癥和癌變。

Feng 等人發(fā)現(xiàn)miR-126可以激活NF-κB 通路，而NF-κB通路激活與腫瘤的發(fā)生存在密切聯(lián)系[49]。

李楠[50]通過(guò)大鼠的實(shí)驗(yàn)研究表明，SAA3通過(guò)下調(diào)miR-204 表達(dá)來(lái)促進(jìn)S100A9 表達(dá)，激活NF-κB 信號(hào)通路上調(diào)SAA3 表達(dá)，以此形成正反饋環(huán)路來(lái)促進(jìn)UCRCC細(xì)胞增殖、促進(jìn)其侵襲轉(zhuǎn)移。

miR－155 是最早證明具有致癌作用的miRNA，因此也稱作“致癌性小RNA”[51]。研究表明，UCRCC 中通過(guò)miR-155 下調(diào)人結(jié)腸上皮細(xì)胞中的FOXOa，從而激活NF-κB 信號(hào)通路，促進(jìn)炎癥因子的表達(dá)[52]。鄧雙嬌[24]研究表明miRNA-200b 表達(dá)水平與UCRCC 發(fā)生發(fā)展呈負(fù)相關(guān)，UCRCC 中miRNA-200b 表達(dá)下調(diào)，AKT2 激活其下游NF-κB 信號(hào)通路，從而產(chǎn)生炎癥反應(yīng)的應(yīng)答[53]，miRNA-200b 靶向抑制AKT2 的表達(dá)，從而抑制炎癥因子NF-κB/IL-6/STAT3這一級(jí)聯(lián)反應(yīng)。

miR-19a 在炎性腸病向UCRCC 的發(fā)展過(guò)程中起到重要作用，是通過(guò)TNF-α 誘導(dǎo)蛋白3 激活結(jié)腸中的NF-κB信號(hào)通路來(lái)是實(shí)現(xiàn)的[54]（表1）。

表1 部分miRNA參與調(diào)節(jié)潰瘍性結(jié)腸炎相關(guān)癌變的機(jī)制

miRNA調(diào)節(jié)NF-κB信號(hào)通路，促進(jìn)或抑制炎癥因子的釋放，從而抑制UC 進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為UCRCC、UCRCC 進(jìn)一步的發(fā)展。這一級(jí)聯(lián)反應(yīng)作用明確，但miRNA 是通過(guò)直接調(diào)節(jié)NF-κB 信號(hào)通路還是通過(guò)調(diào)節(jié)其中的細(xì)胞或靶向因子，仍需進(jìn)一步的研究。

4 中藥干預(yù)NF-κB 信號(hào)通路影響潰瘍性結(jié)腸炎相關(guān)癌變的作用研究進(jìn)展

中醫(yī)學(xué)將UC 及UCRCC 按癥狀歸屬于“痢疾”“大瘕瀉”范疇，臨床上其病理因素以濕邪為主，病機(jī)以脾腎虧虛為本，濕熱毒瘀為標(biāo)，治療以調(diào)和氣血，消積導(dǎo)滯。鄧雙嬌[24]研究表明，復(fù)方苦參湯干預(yù)可以減輕炎癥反應(yīng)，使得結(jié)腸組織中提高miRNA-200b 的表達(dá)水平，從而在治療UCRCC 中可以起到抑癌作用。喻鳳[55]研究表明痛瀉要方干預(yù)UCRCC 的機(jī)制可能與上調(diào)TGF-β1、SMAD4 抑制TNF-α 來(lái)抑制NF-κB 信號(hào)通路的活化。黃芩中的黃芩苷是已被證明具有抗炎和抗氧化活性，同時(shí)可抑制炎性細(xì)胞因子的表達(dá)，激活NF-κB p65 磷酸化的表達(dá)[56]。王曉燕[57]研究表明芍藥湯通過(guò)Nrf2/ARE 信號(hào)通路抑制NF-κB 活性，從而有效地護(hù)和預(yù)防UCRCC。益脾養(yǎng)胃湯[58]抑制炎癥因子的表達(dá)，是通過(guò)抑制TLR4/MAPKS 信號(hào)通路，并抑制其下游NF-κB 信號(hào)通路的活化，從而修復(fù)損傷的腸道黏膜，緩解腸道炎癥的反應(yīng)，以此達(dá)到治療UCRCC 的作用。研究證實(shí)[59]，葛根芩連湯及其藥效物質(zhì)減輕UC的進(jìn)一步發(fā)展是通過(guò)抑制NF-κB 信號(hào)通路來(lái)實(shí)現(xiàn)的，因此推測(cè)葛根芩連湯可能抑制NF-κB 信號(hào)通路達(dá)到干預(yù)UCRCC。健脾清熱活血方[60]可能通過(guò)下調(diào)NFκB 轉(zhuǎn)錄因子家族中的NF-κBp50 的表達(dá)，從而介導(dǎo)腸上皮細(xì)胞凋亡、減輕腸道的炎癥反應(yīng)、修復(fù)腸道黏膜屏障從而緩解UCRCC 的作用。復(fù)方血竭制劑[61]降低結(jié)腸組織中炎癥因子的表達(dá)，緩解UCRCC 的炎癥反應(yīng)，是通過(guò)下調(diào)樹(shù)突狀細(xì)胞抗原提呈能力，阻斷TLR-4/NF-κB 信號(hào)通路傳導(dǎo)來(lái)實(shí)現(xiàn)的。薏苡附子敗醬散[62]可以抑制UC 小鼠腸黏膜組織中Caspase-8 蛋白和miRNA-21 的過(guò)度表達(dá)，從而推測(cè)其具有調(diào)控腸上皮細(xì)胞過(guò)度凋亡，阻止腸道持續(xù)的炎癥反應(yīng)導(dǎo)致潛在癌性病變的發(fā)生發(fā)展。樺褐孔菌中多糖[63]通過(guò)激活NFκB 和NLRP3 信號(hào)通路和調(diào)控細(xì)胞因子，從而抑制小鼠結(jié)UCRCC 的發(fā)生。黃芪多糖[64]、芪貞湯[65]阻止UCRCC 的發(fā)生，是通過(guò)抑制革蘭氏陰性病原體，減少脂多糖的釋放，達(dá)到降低血清中內(nèi)毒素濃度，從而抑制TLR4/NF-κB信號(hào)通路來(lái)發(fā)揮作用。

中醫(yī)藥治療UCRCC 的發(fā)生發(fā)展，目前研究較多從NF-κB信號(hào)通路調(diào)節(jié)炎癥因子、miRNA調(diào)節(jié)炎癥因子的水平方向著手，未深入研究其中的級(jí)聯(lián)反應(yīng)。目前研究中藥復(fù)方制劑、單味藥研究較少，且中藥復(fù)方制劑其主要作用分子未明確，仍需進(jìn)一步挖掘。

5 討論

UCRCC 是由UC 進(jìn)一步發(fā)展的結(jié)局，其病理機(jī)制較復(fù)雜，目前缺乏有效的治療藥物。在UC 疾病進(jìn)展過(guò)程中，部分miRNA 可激活NF-κB 信號(hào)通路，從而促進(jìn)炎癥因子的釋放，不斷的破壞正常的腸道黏膜，最終導(dǎo)致了不典型增生（低度-高度）-癌變的發(fā)生?，F(xiàn)代的研究表明，中醫(yī)藥可通過(guò)調(diào)控部分miRNA 水平，來(lái)干預(yù)NF-κB 信號(hào)通路，達(dá)到減少炎癥因子的釋放，從而緩解UC 的腸道炎癥反應(yīng)，控制向UCRCC 的進(jìn)一步發(fā)展。但目前研究存在相對(duì)的不足之處：①通過(guò)中醫(yī)藥調(diào)控miRNA 水平，干預(yù)NF-κB 信號(hào)通路達(dá)到緩解UCRCC 的研究較少；②中醫(yī)藥在調(diào)控信號(hào)通路方面，其通過(guò)調(diào)控TLR4/MAPKS 信號(hào)通路的表達(dá)，并抑制其下游NF-κB 信號(hào)通路的激活[58]，其信號(hào)通路具有交互性，缺乏其特定的蛋白及分子，通路間的關(guān)聯(lián)性未進(jìn)一步的深入研究。

在課題組的前期課題研究中，已證實(shí)部分miRNA在大鼠UC 的疾病進(jìn)展中起到調(diào)控炎癥因子的作用，通過(guò)中醫(yī)藥調(diào)控NF-κB 信號(hào)通路緩解大鼠UC 炎癥表達(dá)[66-68]。

既往研究主要通過(guò)miRNA、NF-κB 信號(hào)通路分開(kāi)探討其對(duì)炎癥因子的作用從而緩解UCRCC。本文從miRNA 和NF-κB 信號(hào)通路兩方面綜述了UCRCC 的作用機(jī)制，對(duì)后續(xù)研究UCRCC 機(jī)制的靶向因子、信號(hào)通路及上游分子均有一定的參考性。目前的實(shí)驗(yàn)研究雖證明了中醫(yī)藥可阻止抑制UCRCC 的進(jìn)一步發(fā)展，但未能很好的闡明其中的機(jī)理，其關(guān)于miRNA 調(diào)控NF-κB 信號(hào)通路達(dá)到調(diào)控炎癥因子這一級(jí)聯(lián)反應(yīng)未進(jìn)行很好的整合及連接。后續(xù)研究UCRCC 機(jī)理及藥物治療UCRCC 作用中，可從這一級(jí)聯(lián)反應(yīng)著手。miRNA 調(diào)控NF-κB 通路干預(yù)UCRCC 將成為調(diào)控潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)生癌變的新思路和靶點(diǎn)。