王立美 張玉卓 李潔 谷培 秘景慧

乙型肝炎患者肝臟的去氧化，儲(chǔ)存肝糖原，合成分泌性蛋白質(zhì)等功能異常，隨著肝纖維化程度的加重，嚴(yán)重者會(huì)進(jìn)展為肝硬化，造成不可逆的肝臟損傷，嚴(yán)重降低患者的生存率及生存質(zhì)量[1，2]。因此在肝纖維化早期明確疾病診斷及分期，及時(shí)采取有效的治療手段，將有助于阻止病情進(jìn)展，提高治療效果，改善患者預(yù)后。既往對(duì)乙肝肝纖維化的診斷，多采用肝組織病理學(xué)活檢，并將檢查結(jié)果作為乙肝肝纖維化診斷及分期的金標(biāo)準(zhǔn)。但肝臟穿刺活檢屬于創(chuàng)傷性的檢查手段，存在一定的并發(fā)癥，部分并發(fā)癥可危及生命，使得患者對(duì)該檢查方法接受程度較低，并且肝臟穿刺活檢存在一定的主觀性差異性和取樣誤差，造成該檢查結(jié)果重復(fù)性差、不能動(dòng)態(tài)觀察肝纖維化進(jìn)展情況[3]。近年來，對(duì)乙肝肝纖維化的診斷技術(shù)越來越完善，其中二維實(shí)時(shí)剪切波彈性成像，并配合血清微小核糖核酸-122檢測(cè)的診斷技術(shù)也在不斷成熟[4，5]，能有效反應(yīng)乙型肝炎肝纖維化的疾病程度及進(jìn)展。對(duì)此，本研究探討了二維實(shí)時(shí)剪切波彈性成像與血清微小核糖核酸-122測(cè)定評(píng)估乙型肝炎患者肝纖維化的應(yīng)用價(jià)值，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2019年10月至2022年2月收治的80例乙型肝炎患者，作為觀察組，根據(jù)肝纖維化分期對(duì)觀察組進(jìn)行分組(S0組、S1組、S2組、S3組)。另選取同期60例健康體檢者作為對(duì)照組，2組均接受二維實(shí)時(shí)剪切波彈性成像檢查以及血清微小核糖核酸-122檢測(cè)。觀察組男46例，女34例；年齡22～69歲，平均年齡(45.38±9.26)歲；病程2～10年，平均病程(5.35±2.65)年。對(duì)照組中男30例，女30例；年齡22～70歲，平均年齡(45.25±10.55)歲。納入對(duì)象的性別比、年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn)：觀察組患者均符合慢性乙型肝炎防治指南中對(duì)該疾病診斷的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)[6]；觀察組患者經(jīng)肝組織活檢確診為乙型肝炎；觀察組患者血清學(xué)指標(biāo)及肝功能檢查資料完整；觀察組患者在6個(gè)月內(nèi)無降酶、抗病毒、免疫調(diào)節(jié)、抗纖維化藥物的用藥史；所有納入對(duì)象及其家屬對(duì)研究的方法與目的知情，自愿簽署知情同意書；研究通過本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn)：同時(shí)感染丁型肝炎病毒、人類免疫缺陷病毒、戊型肝炎病毒、丙型肝炎病毒者；患代謝性、血吸蟲性、酒精性、膽汁淤積性肝病者；自身免疫性疾病者；中途退出或不配合研究者。

1.3 方法 觀察組乙型肝炎患者進(jìn)行肝穿刺活檢，參照METAVIR分級(jí)，將患者分為S0組(無肝纖維化)、S1組(輕度肝纖維化)、S2組(明顯肝纖維化)、S3組(進(jìn)展性肝纖維化)及S4組(肝硬化)[7]。

1.4 二維實(shí)時(shí)剪切波彈性成像檢查 觀察組與對(duì)照組均接受二維實(shí)時(shí)剪切波彈性成像檢查。檢查前告知受檢者空腹≥6 h。采用mindray ResonanceR9超聲診斷儀，腹部SC6-1凸陣探頭，調(diào)整探頭頻率至1～6 MHz?；颊咛幤脚P位，右上肢上舉置于頭部。于肝S5、S6段肋間隙，避開肝臟大血管、腫塊及膽囊等結(jié)構(gòu)，選擇SWE模式，將 4 cm×3 cm取樣框上緣置于肝包膜下約1 cm。囑患者屏氣，待圖像穩(wěn)定且顏色均勻填充90%以上時(shí)選取直徑≥1 cm感興趣區(qū)測(cè)量LSM值，測(cè)5次后取中位數(shù)作為結(jié)果。

1.5 實(shí)驗(yàn)室檢查 清晨抽取受試者靜脈血,利用miRNA試劑盒提取血清總RNA；miRNA-122 采用美國(guó)ABI ProFlexTM PCR系統(tǒng)進(jìn)行分析；miRNA-122反轉(zhuǎn)錄采用美國(guó)GeneCopoeia 試劑盒進(jìn)行反應(yīng),將miRNA反轉(zhuǎn)錄生成cDNA,所有操作均在試劑盒說明的指導(dǎo)下進(jìn)行。根據(jù)PCR 儀配備系統(tǒng)，得到miRNA-122的Ct值。

2 結(jié)果

2.1 觀察組與對(duì)照組LSM值比較 S0組與對(duì)照組LSM值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；S1、S2、S3、S4組LSM值均顯著高于對(duì)照組，S4組顯著高于S0、S1、S2、S3組，S3組顯著高于S0、S1、S2組，S2顯著高于S0、S1組，S1組顯著高于S0組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 觀察組與對(duì)照組LSM值比較

2.2 觀察組與對(duì)照組血清miRNA-122指標(biāo)比較 觀察組中S0、S1、S2組肝纖維化(輕中度纖維化)患者血清miRNA-122水平比S3、S4組(重度纖維化)患者顯著增高(P<0.05)。見表2。

2.3 二維實(shí)時(shí)剪切波彈性成像肝臟纖維化分期相關(guān)性分析 經(jīng)過相關(guān)性分析得出，二維實(shí)時(shí)剪切波彈性成像與肝纖維化分期呈正相關(guān)。見表3。

2.4 二維實(shí)時(shí)剪切波彈性成像診斷效能分析 以活檢穿刺病理結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，各個(gè)觀察組分期AUC結(jié)果分別為0.800、0.791、0.774、0.814，≥S1閾值為80.61，≥S2閾值為88.39，≥S3閾值為90.77，s4閾值為 94.59。見表4。

表2 觀察組與對(duì)照組血清miRNA-122指標(biāo)比較

表3 二維實(shí)時(shí)剪切波彈性成像肝臟纖維化分期相關(guān)性分析

表4 二維實(shí)時(shí)剪切波彈性成像診斷效能分析

2.5 血清miR-122對(duì)肝纖維化的預(yù)測(cè)價(jià)值 以活檢穿刺病理結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，各個(gè)觀察組分期血清miR-122的AUC結(jié)果分別為0.795、0.782、0.761、0.802，≥S1最佳界值為80.61，≥S2最佳界值為88.39，≥S3最佳界值為90.77，S4最佳界值為3.483。見表5。

表5 血清miR-122對(duì)肝纖維化的預(yù)測(cè)價(jià)值

3 討論

乙肝患者的肝臟纖維化，是乙型肝炎向肝硬化發(fā)展的必經(jīng)階段，是一個(gè)發(fā)展變化的病理過程。如果能在發(fā)病早期就明確診斷并給予對(duì)癥治療，可及時(shí)阻止疾病向中-重度發(fā)展，減少患者醫(yī)療成本，減輕痛苦、延長(zhǎng)壽命[8，9]。近年來實(shí)時(shí)二維剪切波彈性成像技術(shù)在臨床廣泛應(yīng)用，并逐漸成為監(jiān)測(cè)肝纖維化程度及評(píng)價(jià)治療后反應(yīng)的重要診斷手段[10]。該技術(shù)原理為利用高速聲輻射脈沖使不同深度的組織同時(shí)產(chǎn)生橫向位移，繼而在聚焦部位產(chǎn)生剪切波來評(píng)估肝臟的硬度值，彈性數(shù)值越大，表示肝組織硬度值越大[11]。

本次研究結(jié)果顯示，乙肝肝纖維化患者的肝臟硬度測(cè)定值顯著高于對(duì)照組與觀察組中的S0組者(P<0.05)；二維實(shí)時(shí)剪切波彈性成像與肝纖維化分期、LSM指標(biāo)呈正相關(guān)；患者的肝硬度值隨著肝纖維化病理分期加重而增大，實(shí)時(shí)二維剪切波彈性成像技術(shù)，通過剪切波獲知組織彈性模量，量化表現(xiàn)出肝纖維化的程度，提升了檢查結(jié)果的精準(zhǔn)度。已有研究發(fā)現(xiàn)該檢測(cè)方法和肝活組織檢查的檢查結(jié)果無顯著性差異，不能接受肝穿的患者可通過二維剪切波彈性成像檢查獲得準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果[12，13]。本研究中觀察組患者血清miRNA-122水平顯著高于對(duì)照組(P<0.05)；觀察組中S0、S1、S2組肝纖維化(輕、中度纖維化)患者血清miRNA-122水平比S3、S4組(重度纖維化)患者顯著增高(P<0.05)。血清 miRNA-122已成為肝臟活動(dòng)性損傷和組織修復(fù)的潛在生物標(biāo)志物之一。血清中miRNA-122含量可作為肝硬化、肝纖維化患者分級(jí)的生化標(biāo)記物。乙肝肝纖維化患者血清中miRNA-122含量降低，可能是因?yàn)楦渭?xì)胞在疾病影響下數(shù)量大幅減少，抗肝纖維化的作用降低，使得肝纖維化加重[14，15]。臨床常用患者丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶和天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶來評(píng)估肝功能，但這2個(gè)標(biāo)志物用于臨床診斷肝損傷，并不能區(qū)分引起慢性肝病的原因。有研究表明乙型肝炎病毒及肝癌等引起的慢性肝病中，miRNA均出現(xiàn)不同程度的變化，其中miRNA-122是變化特征最顯著的指標(biāo)之一[16]。miRNA-122在肝臟特有，特異性表達(dá)在成人肝臟總miRNA中接近七成，肝病患者血清中miRNA-122表達(dá)量升高，是因?yàn)閙iRNA對(duì)翻譯進(jìn)程產(chǎn)生了干擾。慢性肝炎、肝細(xì)胞癌患者血清中miRNA-122表達(dá)量顯著較高,對(duì)肝纖維化有重要影響。miRNA-122對(duì)肝纖維化發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)有預(yù)測(cè)價(jià)值，未來臨床有望通過檢測(cè)miRNA-122,分析乙肝患者肝纖維化、肝硬化的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn),且可考慮將miRNA-122作為肝纖維化新的治療靶基因。

結(jié)合以上分析內(nèi)容，可見對(duì)乙型肝炎肝纖維化者進(jìn)行二維實(shí)時(shí)剪切波彈性成像與miRNA-122檢查，對(duì)于客觀評(píng)估肝纖維化程度有一定的診斷價(jià)值，且能動(dòng)態(tài)觀察抗病毒及抗纖維化藥物治療的效果，臨床應(yīng)用價(jià)值較高。本研究為實(shí)時(shí)二維剪切波彈性成像與血清miR-122應(yīng)用于乙肝肝纖維化的診斷提供了一定科學(xué)依據(jù)。