陳宜敏， 許天啟， 范春林， 張曉琦， 葉文才， 周光雄

(暨南大學 藥學院 中藥及天然藥物研究所∥廣東省普通高校中藥和天然藥物藥效物質(zhì)基礎(chǔ)重點實驗室，廣東 廣州 510632)

胭脂樹(BixaorellanaL.)為紅木科紅木屬的多年生落葉小喬木或灌木，原產(chǎn)于巴西，是熱帶地區(qū)有名的染料植物[1]。從胭脂樹種子中提取出來的天然染料被廣泛應用于食品、紡織、印刷、化妝品、藥品等各種工業(yè)領(lǐng)域，具有不可替代的商業(yè)價值[2]。同時，胭脂樹也是美洲地區(qū)的傳統(tǒng)民間用藥，其藥用歷史甚至可以追溯至幾百年前，從種子、樹葉、果實到根部皆有作為藥用的記載，也因此受到現(xiàn)代醫(yī)藥學研究者的關(guān)注[3]?，F(xiàn)代藥理研究通過各種體內(nèi)外實驗證實了胭脂樹豐富的藥理活性，如抗真菌和抗菌活性，抗氧化和清除自由基活性，抗炎活性，抗癌活性，還有降血糖、止瀉、抗驚厥、利尿等作用[4]?，F(xiàn)有研究主要關(guān)注其種皮的色素成分，已報道從中分離鑒定了以methyl hydrogen (9′Z)-6,6′-diapocarotene-6,6′-dioate為主成分的一系列類胡蘿卜素類色素成分[5-6]。為了尋找胭脂樹中具有生物活性的成分，為下一步開發(fā)利用提供科學依據(jù)，本實驗綜合運用各種現(xiàn)代色譜和光譜技術(shù)，對胭脂樹地上帶果枝葉部分90%乙醇提取物的乙酸乙酯部位進行了深入的化學成分研究，從中分離得到18個化合物，分別鑒定為isoshonanin(1)、(-)-3-羥基-β-紫羅蘭酮[(-)-3-hydroxy-β-ionone，2]、己二烯二酸(muconic acid，3)、(S)-3-羥基-β-紫羅蘭酮[(S)-3-hydroxy-β-ionone，4]、3-hydroxy-7,8-dehydro-β-ionol (5)、 (6R,7E,9S)-9-hydroxy-4,7-megastigmadien-3-one(6)、黑麥草內(nèi)酯[(+)-isololiolide，7]、松脂素[(+)-pinoresinol，8]、β-谷甾醇(β-sitosterol，9)、3-(3′-hydroxybutyl)-2,4,4-trimethylcyclohexa-2,5-dienone(10)、異黑麥草內(nèi)酯[(-)-loliolide，11]、單棕櫚酸甘油酯(glyceroyl monopalmitate，12)、桂皮酸(cinnami acid，13)、(3β,22α)-stigmast-5-ene-3,22-diol(14)、表松脂酚[(+)-epipinoresinol，15]、去氫吐葉醇[(+)-dehydrovomifoliol，16]、9-hydroxymegastigm-5-en- 4-one(17)、牛蒡子苷元(arctigenin，18)。其中，除化合物9以外，其他化合物均為首次從該植物中分離得到；化合物4具有抑制LPS誘導RAW 264.7巨噬細胞釋放一氧化氮(NO)的作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器與試劑

Bruker AV- 400和AV-600型核磁共振儀(德國布魯克公司)；LC-100型液相色譜儀(上海伍豐科學儀器有限公司)；Waters Synapt G2TOF高分辨質(zhì)譜儀(美國Waters公司)；液相分析色譜柱為Ultimate XB-C18(250mm×4.6mm，5 μm，美國Welch公司)；半制備液相色譜柱為Ultimate XB-C18(250mm×10.0mm，5 μm，美國Welch公司)；Eyela旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；BP211D電子天平(Sartorouius公司)；TLC預制板(青島海洋化工廠)；Sephadex LH-20(Pharmacia公司)；ODS(Silicycle公司)；氘代試劑(Merck公司)；色譜級甲醇(山東禹王公司)；液相用水(廣東怡寶公司)，其他試劑均為分析純。槲皮素由同實驗室從葉下珠中分離得到，質(zhì)量分數(shù)為98%。

1.1.2 細胞株

小鼠巨噬細胞系RAW 264.7由暨南大學藥學院中藥及天然藥物研究所提供。

1.1.3 藥材來源

實驗藥材采集自厄瓜多爾，由暨南大學藥學院周光雄教授鑒定為紅木科植物胭脂樹。

1.2 方法

1.2.1 提取與分離

胭脂樹地上帶果枝葉部分干燥和粉碎后用體積分數(shù)90%乙醇進行提取，減壓濃縮提取液得粗提物浸膏，加入硅膠混合拌樣(516 g)。拌樣后的總粗提物與空白硅膠1∶1裝柱，經(jīng)硅膠柱層析依次用石油醚、乙酸乙酯和甲醇進行洗脫，洗脫液減壓濃縮后分別得石油醚部位粗浸膏(58 g)、乙酸乙酯部位粗浸膏(154 g)和甲醇部位粗浸膏(36 g)。取乙酸乙酯部位粗浸膏進一步分離。對乙酸乙酯部位進行正相硅膠柱層析分離，以V石油醚∶V乙酸乙酯分別為100∶0、100∶1、50∶1、20∶1、10∶1、5∶1、2∶1、1∶1、0∶1為流動相進行梯度洗脫。運用硅膠GF254薄層板薄層色譜(TLC)進行檢測合并，共得7個粗餾分C1～7。餾分C2經(jīng)Sephadex LH-20葡聚糖凝膠柱層析和二氯甲烷-甲醇(V二氯甲烷∶V甲醇=1∶1)洗脫得化合物11(10.0 mg)。餾分C3經(jīng)正相硅膠柱色譜分離，以二氯甲烷-乙酸乙酯(100∶0→0∶1)為流動相梯度洗脫得4個餾分。C3-2經(jīng)Sephadex LH-20葡聚糖凝膠柱層析和二氯甲烷-甲醇(1∶1)洗脫、HPLC半制備(條件：Ultimate XB-C18；體積分數(shù)85%甲醇；3 mL/min)得到化合物1(3.0 mg)和2(3.5 mg)。C3-3經(jīng)Sephadex LH-20葡聚糖凝膠柱層析和二氯甲烷-甲醇(1∶1)洗脫、HPLC半制備(條件：Ultimate XB-C18；體積分數(shù)85%甲醇；3 mL/min)得到化合物15(3.5 mg)。餾分C4經(jīng)正相硅膠柱色譜分離，以石油醚-乙酸乙酯(100∶0→0∶1)為流動相梯度洗脫得6個餾分。C4-2經(jīng)Sephadex LH-20葡聚糖凝膠柱層析和二氯甲烷-甲醇(1∶1)洗脫、ODS開放柱和甲醇-水(30∶70→100∶0)梯度洗脫、HPLC半制備(條件：Ultimate XB-C18；45%甲醇；3 mL/min)得到化合物3(2.0 mg)和5(1.5 mg)。C4- 4經(jīng)Sephadex LH-20葡聚糖凝膠柱層析和二氯甲烷-甲醇(1∶1)洗脫、ODS開放柱和甲醇-水(30∶70→100∶0)梯度洗脫、HPLC半制備(條件：Ultimate XB-C18；體積分數(shù)25%乙腈；3 mL/min)得到化合物17(2.0 mg)和18(2.0 mg)。C4-5經(jīng)Sephadex LH-20葡聚糖凝膠柱層析和二氯甲烷-甲醇(1∶1)洗脫、ODS開放柱和甲醇-水(V甲醇∶V水=30∶70)梯度洗脫得到化合物14(9.0 mg)。餾分C5經(jīng)正相硅膠柱色譜分離，以石油醚-乙酸乙酯(100∶0→0∶1)為流動相梯度洗脫得6個餾分。C5-3經(jīng)Sephadex LH-20葡聚糖凝膠柱層析和二氯甲烷-甲醇(1∶1)洗脫、ODS開放柱和甲醇-水(20∶80→100∶0)梯度洗脫、HPLC半制備(條件：Ultimate XB-C18；20%乙腈；3 mL/min)得到化合物6(1.8 mg)和10(2.2 mg)。C5- 4經(jīng)Sephadex LH-20葡聚糖凝膠柱層析和二氯甲烷-甲醇(1∶1)洗脫、ODS開放柱和甲醇-水(20∶80→100∶0)梯度洗脫、HPLC半制備(條件：Ultimate XB-C18；體積分數(shù)55%甲醇；3 mL/min)得到化合物7(2.0 mg)和4(2.0 mg)。餾分C6經(jīng)正相硅膠柱色譜分離，以二氯甲烷-甲醇(100∶0→0∶1)為流動相梯度洗脫得5個餾分。C6-1經(jīng)Sephadex LH-20葡聚糖凝膠柱層析和二氯甲烷-甲醇(1∶1)洗脫、HPLC半制備(條件：Ultimate XB-C18；55%甲醇；3 mL/min)得到化合物9(1.0 mg)。C6-2經(jīng)Sephadex LH-20葡聚糖凝膠柱層析和二氯甲烷-甲醇(1∶1)洗脫、HPLC半制備(條件：Ultimate XB-C18；33%乙腈；3 mL/min)得到化合物16(1.0 mg)。C6-3經(jīng)Sephadex LH-20葡聚糖凝膠柱層析和二氯甲烷-甲醇(1∶1)洗脫得到化合物13(13.0 mg)。C6- 4經(jīng)Sephadex LH-20葡聚糖凝膠柱層析和二氯甲烷-甲醇(1∶1)洗脫、HPLC半制備(條件：Ultimate XB-C18；體積分數(shù)35%甲醇；3 mL/min)得到化合物8(3.0 mg)和12(3.0 mg)。

1.2.2 細胞培養(yǎng)

小鼠巨噬細胞系RAW 264.7細胞用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，放置在37 ℃、體積分數(shù)5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，取對數(shù)期細胞用于實驗。

1.2.3 細胞活力和抗炎活性實驗

RAW 264.7細胞用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液稀釋到每孔4×104個細胞接種到96孔板，每孔最終體積100 μL，置恒溫培育箱(37 ℃、體積分數(shù)5% CO2)中培養(yǎng)24 h，吸出培養(yǎng)液，加入含有不同濃度的待測化合物及陽性對照藥(槲皮素)的培養(yǎng)液，培養(yǎng)24 h后棄上清液，在每孔中加入5 mg/mL MTT，37 ℃下反應4 h，棄MTT，每孔加入200 μL DMSO，置搖床上低速震蕩10 min，使結(jié)晶充分溶解，用酶標儀在570 nm處測量各孔的吸光度，計算化合物的半數(shù)抑制濃度(IC50)。

抗炎活性采用抑制NO生成實驗，以LPS誘導的小鼠巨噬細胞RAW 264.7為檢測模型，應用Griess試劑顯色法檢測NO生成量。RAW 264.7細胞用含體積分數(shù)10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液稀釋到每孔4×104個細胞接種到96孔板，每孔體積100 μL。置恒溫培育箱(37 ℃、5% CO2)中培養(yǎng)24 h，吸出培養(yǎng)液，加入含有不同濃度的待測化合物及陽性對照藥(槲皮素)的培養(yǎng)液，同時預先在培養(yǎng)液中加入質(zhì)量濃度100 ng/mL LPS。培養(yǎng)24 h后，吸取各孔上清液至新的96孔板中，每孔加入以體積比為1∶1混合的Griess A和B溶液100 μL。在3 000 r/min下離心1 min，繼續(xù)在黑暗處反應10 min。用酶標儀在540 nm波長下測定各孔的吸光度，計算化合物的IC50值。

2 結(jié)果

2.1 結(jié)構(gòu)鑒定

(1)化合物1淡黃色粉末狀，HR-TOF-MSm/z：365.135 8 [M+Na]+分子式為C20H22O5。1HNMR (600 MHz, CH3OH-d4)δ: 4.18 (1H, t,J=7.2 Hz, H-9′a), 3.73 (1H, t,J=7.2 Hz, H-9a), 3.53 (2H, t,J=7.9 Hz, H-9b, 9′b), 3.00 (1H, dd,J=15.5, 4.0 Hz, H-7a), 2.72 (1H, dd,J=15.5, 10.4 Hz, H-7b), 2.28～2.18 (2H, m, H-8, 8′), 3.70 (1H, d,J=9.8 Hz, H-7′), 6.74 (1H, d,J=8.0 Hz, H-5′), 6.70 (1H, s, H-2), 6.67 (1H, s, H-2′), 6.62 (1H, dd,J=8.0, 1.6 Hz, H-6′), 6.24 (1H, s, H-5), 3.82 (3H, s, 3-OCH3), 3.77 (3H, s, 3′-OCH3)；13C-NMR (150 MHz, CH3OH-d4)δ: 73.6 (C-9), 74.5 (C-9′), 33.2 (C-7), 43.8 (C-8), 52.2 (C-8′), 50.8 (C-7′), 113.2 (C-2), 113.2 (C-2′), 117.2 (C-5), 116.3 (C-5′), 122.3 (C-6′), 128.7 (C-1), 134.0 (C-6), 145.7 (C- 4), 147.7 (C-3), 138.1 (C-1′), 149.4 (C-3′), 146.5 (C- 4′), 56.5 (3, 3′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[7]，差別可歸屬于溶劑效應所致，故鑒定化合物1為isoshonanin。

(2)化合物2無色油狀，HR-TOF-MSm/z: 231.135 4 [M+Na]+，分子式為C13H20O2。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 7.19 (1H, dd,J=16.4, 1.0 Hz, H-7), 6.04 (1H, d,J=16.4 Hz，H-8), 2.25 (3H, s, 10-CH3), 1.73 (3H, s, 13-CH3), 1.08 (3H, s, 11-CH3), 1.04 (3H, s, 12-CH3), 1.67 (1H, ddd,J=12.2, 3.5, 2.0 Hz, H-2a), 1.32 (1H, t,J=12.2 Hz, H-2b), 2.30 (1H, m, H- 4a), 1.96 (1H, dd,J=17.7, 9.5 Hz, H- 4b) 3.76 (1H, m, H-3), 4.64 (1H, d,J=4.6 Hz, 3-OH)；13C-NMR (101 MHz, DMSO-d6)δ: 48.5 (C-2), 42.9 (C- 4), 62.3 (C-3), 141.6 (C-7), 131.7 (C-8), 135.0 (C-6), 133.4 (C-5), 36.3 (C-1), 197.9 (C-9), 27.2 (10-CH3), 28.3 (11-CH3), 30.0 (12-CH3), 21.3 (13-CH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[8]，故鑒定化合物2為(-)-3-羥基-β-紫羅蘭酮。

(3)化合物3白色粉末狀，HR-TOF-MSm/z：165.064 1 [M+Na]+，分子式為C6H6O4。1H-NMR (400 MHz, CH3OH-d4)δ: 7.87 (2H, d,J=8.5 Hz, H-3, 4), 6.79 (2H, d,J=8.2 Hz, H-2, 5)；13C-NMR (100 MHz, CH3OH-d4)δ: 162.9 (C-1, 6), 116.0 (C-2, 5), 133.0 (C-3, 4)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[9]，故鑒定化合物3為己二烯二酸。

(4)化合物4無色油狀，HR-TOF-MSm/z：231.135 4 [M+Na]+，分子式為C13H20O2。1H-NMR (400 MHz, CH3OH-d4)δ: 6.83 (1H, dq,J=15.7, 6.9 Hz, H-9), 6.14 (1H, dq,J=15.7, 1.6 Hz, H-8), 1.94 (3H, dd,J=6.9, 1.7 Hz, 10-CH3), 1.53 (3H, s, 13-CH3), 1.12 (3H, s, 11-CH3), 0.96 (3H, s, 12-CH3), 1.47 (1H, t,J=12.0 Hz, H-2a), 1.71 (1H, ddd,J=12.0, 3.7, 1.7 Hz, H-2b), 2.00 (1H, ddd,J=17.0, 9.6, 1.3 Hz, H- 4a), 2.32 (1H, m, H- 4b), 3.99 (1H, dddd,J=11.9, 9.6, 5.9, 3.7 Hz, H-3)；13C-NMR (100 MHz, CH3OH-d4)δ: 41.7 (C-2), 48.5 (C- 4), 65.3 (C-3), 135.5 (C-8), 149.8 (C-9), 130.2 (C-6), 140.8 (C-5), 37.3 (C-1), 204.4 (C-7), 18.7 (10-CH3), 29.7 (11-CH3), 30.4 (12-CH3), 21.5 (13-CH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[10]，故鑒定化合物4為(S)-3-羥基-β-紫羅蘭酮。

(5)化合物5無色油狀，HR-TOF-MSm/z：231.135 3 [M+Na]+，分子式為C13H20O2。1H-NMR (400 MHz, CH3OH-d4)δ: 1.44 (3H, dd,J=6.5 Hz, 10-CH3), 1.87 (3H, s, 13-CH3), 1.10 (3H, s, 11-CH3), 1.15 (3H, s, 12-CH3), 1.78 (1H, ddd,J=12.3, 3.6, 2.0 Hz, H-2a), 1.37 (1H, t,J=12.3 Hz, H-2b), 2.34 (1H, ddd,J=17.4, 5.7 Hz, 2.0 Hz, H- 4a), 1.98 (1H, m, H- 4b), 3.87 (1H, dddd,J=11.9, 9.3, 5.7, 3.6 Hz, H-3), 4.63 (1H, q,J=6.5 Hz, H-9)；13C-NMR (100 MHz, CH3OH-d4)δ: 47.7 (C-2), 42.1 (C- 4), 65.3 (C-3), 59.2 (C-9), 124.8 (C-6), 138.6 (C-5), 37.5 (C-1), 97.0 (C-7), 82.4 (C-8), 25.3 (10-CH3), 29.0 (11-CH3), 31.1 (12-CH3), 22.6 (13-CH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[11]，故鑒定化合物5為3-hydroxy-7,8-dehydro-β-ionol。

(6)化合物6無色油狀，HR-TOF-MSm/z：209.165 4 [M+H]+，分子式為C13H20O2。1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 5.88 (1H, s, H- 4), 5.66 (1H, dd,J=15.4, 5.9 Hz, H-8), 5.54 (1H, ddd,J=15.4, 9.0, 1.0 Hz, H-7), 1.27 (3H, d,J=6.4 Hz, 10-CH3), 1.87 (3H, d,J=1.3 Hz, 13-CH3), 1.01 (3H, s, 11-CH3), 0.95 (3H, s, 12-CH3), 2.31 (1H, d,J=16.7 Hz, H-2a), 2.06 (1H, dt,J=16.7, 0.9 Hz, H-2b), 2.50 (1H, d,J=9.0 Hz, H-6), 4.33 (1H, m, H-9)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 47.7 (C-2), 126.1 (C- 4), 126.9 (C-7), 138.7 (C-8), 55.6 (C-6), 68.6 (C-9), 162.0 (C-5), 36.4 (C-1), 199.4 (C-3), 23.7 (10-CH3), 27.4 (11-CH3), 28.1 (12-CH3), 23.9 (13-CH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[12]，故鑒定化合物6為(6R,7E,9S)-9-hydroxy- 4,7-megastigmadien-3-one。

(7)化合物7白色無定型粉末狀，HR-TOF-MSm/z：197.093 3 [M+H]+，分子式為C11H16O3。1H-NMR (400 MHz, CH3OH-d4)δ: 5.78 (1H, s, H-7), 1.31 (3H, s, 10-CH3), 1.29 (3H, s, 9-CH3), 1.59 (3H, s, 11-CH3), 1.30 (1H, m, H-2a), 2.01 (1H, ddd,J=13.0, 4.2, 2.2 Hz, H-2b), 1.42 (1H, t,J=11.6 Hz, H- 4a), 2.47 (1H, ddd,J=11.6, 4.2, 2.2 Hz, H- 4b), 4.10 (1H, tt,J=11.6, 4.2 Hz, H-3)；13C-NMR (100 MHz, CH3OH-d4)δ: 50.9 (C-2), 49.0 (C- 4)，65.4 (C-3), 113.9 (C-7), 184.0 (C-6), 88.7 (C-5), 36.3 (C-1), 174.1 (C-8), 30.5 (10-CH3), 25.9 (11-CH3), 25.5 (9-CH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[13]，故鑒定化合物7為黑麥草內(nèi)酯。

(8)化合物8白色無定型粉末狀，HR-TOF-MSm/z：381.130 4 [M+Na]+，分子式為C20H22O6。1H-NMR (600 MHz, CH3OH-d4)δ: 4.24 (2H, m, H-9a, 9′a), 3.84 (2H, m, H-9b, 9′b), 4.71 (2H, d,J=4.2 Hz, H-7, 7′), 3.15 (2H, m, H-8, 8′), 6.95 (2H, d,J=2.0 Hz, H-2, 2′), 6.82 (2H, dd,J=8.2, 2.0 Hz, H-6, 6′), 6.77 (2H, d,J=8.2 Hz, H-5, 5′), 3.86 (6H, s, 3, 3′-OCH3)；13C-NMR (150 MHz, CH3OH-d4)δ: 72.7 (C-9, 9′), 55.5 (C-8, 8′), 87.7(C-7, 7′), 111.0 (C-2, 2′), 116.2 (C-5, 5′), 120.2 (C-6, 6′), 133.9 (C-1, 1′), 149.3 (C-3, 3′), 147.5 (C- 4, 4′), 56.5 (3, 3′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[14]，故鑒定化合物8為松脂素。

(9)化合物9白色針狀晶體，HR-TOF-MSm/z：437.193 6 [M+Na]+，分子式為C29H50O。1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ:3.53 (1H,m, H-3), 5.33 (1H, dd,J=5.1, 2.4 Hz, H-6), 0.66 (3H, s, H-18), 0.99 (3H, s, H-19), 0.90 (3H, d,J=6.5 Hz, H-26), 0.85-0.77 (9H, m, H-21, 27, 29)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 37.5 (C-1), 32.1 (C-2), 42.5 (C- 4), 32.0 (C-7), 21.3 (C-11), 40.0 (C-12), 24.5 (C-15), 28.5 (C-16), 34.2 (C-22), 26.3 (C-23), 23.3 (C-28), 72.0 (C-3), 121.9 (C-6), 32.1 (C-8), 50.4 (C-9), 57.0 (C-14), 56.3 (C-17), 36.4 (C-20), 46.1 (C-24), 29.4 (C-25), 141.0 (C-5), 36.7 (C-10), 42.5 (C-13), 12.1 (C-18), 19.0 (C-19), 19.3 (C-21), 20.0 (C-26), 19.6 (C-27), 12.2 (C-29)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[15]，故鑒定化合物9為β-谷甾醇。

(10)化合物10無色油狀，HR-TOF-MSm/z：231.135 5 [M+Na]+，分子式為C13H20O2。1H-NMR (400 MHz, CH3OH-d4)δ: 6.94 (1H, d,J=9.9 Hz, H-5), 6.15 (1H, d,J=9.9 Hz, H-6), 1.28 (3H, d,J=1.9 Hz, 7-CH3), 1.28 (3H, d,J=1.9 Hz, 8-CH3), 1.22 (3H, d,J=6.2 Hz, 4′-CH3), 1.89 (3H, s, 9-CH3), 2.60 (1H, m, H-1′a), 2.39 (1H, m, H-1′b), 1.59 (2H, m, H-2′), 3.82 (1H, h,J=6.2 Hz, H-3′)；13C-NMR (100 MHz, CH3OH-d4)δ: 28.1 (C-1′), 38.8 (C-2′), 160.3 (C-5), 126.2 (C-6), 69.0 (C-3′), 132.5 (C-2), 165.7 (C-3), 42.4 (C- 4), 188.7 (C-1), 23.4 (4′-CH3), 26.1 (7-CH3), 26.1 (8-CH3), 11.6 (9-CH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[16]，故鑒定化合物10為3-(3′-hydroxybutyl)-2,4,4-trimethylcyclohexa-2,5-dienone。

(11)化合物11白色無定型粉末狀，HR-TOF-MSm/z：219.098 9 [M+Na]+，分子式為C11H16O3。1H-NMR (400 MHz, CH3OH-d4)δ: 5.75 (1H, s, H-7), 1.27 (3H, s, 10-CH3), 1.47 (3H, s, 9-CH3), 1.76 (3H, s, 11-CH3), 1.53 (1H, dd,J=14.4, 3.5 Hz, H-2a), 1.99 (1H, dt,J=14.4, 2.7 Hz, H-2b), 1.75 (1H, m, H- 4a), 2.42 (1H, dt,J=13.8, 2.6 Hz, H- 4b), 4.21 (1H, p,J=3.5 Hz, H-3);13C-NMR (100 MHz, CH3OH-d4)δ: 48.2 (C-2), 46.6 (C- 4), 67.4 (C-3), 113.5 (C-7), 185.8 (C-6), 89.1 (C-5), 37.3 (C-1), 174.6 (C-8), 31.2 (10-CH3), 27.6 (11-CH3), 27.1(9-CH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[13]，故鑒定化合物11為異黑麥草內(nèi)酯。

(12)化合物12白色粉末狀，HR-TOF-MSm/z：353.265 6 [M+Na]+，分子式為C19H38O4。1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ: 4.18 (1H, dd,J=11.6, 4.7 Hz, H-1a), 3.68 (1H, dd,J=11.6, 4.0 Hz, H-1b), 4.13 (1H, dd,J=11.6, 6.1 Hz, H-3a), 3.58 (1H, dd,J=11.6, 5.8 Hz, H-3b), 2.33 (2H, t,J=7.6 Hz, H-2′), 1.60 (2H, m, H-3′), 1.23 (24H, m, H- 4′～15′), 3.91 (1H, ddd,J=8.7, 5.9, 4.3 Hz, H-2), 0.86 (3H, t,J=6.8 Hz, H-16′)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 70.5 (C-2)，65.4 (C-1), 63.6 (C-3), 34.4 (C-2′), 32.2 (C-3′), 29.9 (C- 4′～8′), 29.8 (C-9′), 29.7 (C-10′), 29.6 (C-11′), 29.5 (C-12′), 29.4 (C-13′), 25.3 (C-14′), 23.0 (C-15′), 14.4 (C-16′), 174.6 (C-1′)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[17]，故鑒定化合物12為單棕櫚酸甘油酯。

(13)化合物13白色無定型粉末狀，HR-TOF-MSm/z：171.099 7 [M+Na]+，分子式為C9H8O2。1H-NMR (400 MHz, CH3OH-d4)δ: 7.65 (1H, d,J=16.0 Hz, H-7), 6.48 (1H, d,J=16.0 Hz, H-8), 7.59 (2H, m, H-2, 6), 7.40 (3H, dd,J=5.1, 2.0 Hz, H-3, 4, 5)；13C-NMR (100 MHz, CH3OH-d4)δ: 129.3 (C-2, 6), 130.1 (C-3, 5), 131.4 (C- 4), 146.0 (C-7), 120.2 (C-8), 136.1 (C-1), 171.1 (C-9)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[18]，故鑒定化合物13為桂皮酸。

(14)化合物14白色針狀晶體，HR-TOF-MSm/z：453.369 9 [M+Na]+，分子式為C29H50O2。1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ:3.53 (1H, m, H-3), 5.33 (1H, dt,J=5.6, 1.8 Hz, H-6), 0.68 (3H, s, H-18), 0.99 (3H, s, H-19), 0.90 (3H, d,J=6.8 Hz, H-21), 3.71 (1H, dd,J=12.5, 1.9 Hz, H-22), 0.77 (3H, d,J=6.8 Hz, H-26), 0.88 (3H, d,J=7.0 Hz, H-27), 0.87 (3H, s, H-29)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ: 37.5 (C-1), 31.9 (C-2), 42.5 (C- 4), 32.2 (C-7), 21.3 (C-11), 40.0 (C-12), 24.7 (C-15), 27.7 (C-16), 30.1 (C-23), 23.8 (C-28), 72.0 (C-3), 121.8 (C-6), 32.1 (C-8), 50.4 (C-9), 56.6 (C-14), 53.2 (C-17), 42.7 (C-20), 71.6 (C-22), 41.6 (C-24), 29.0 (C-25)，141.0 (C-5), 36.7 (C-10), 42.9 (C-13), 12.1 (C-18), 19.6 (C-19), 12.5 (C-21), 17.8 (C-26), 20.8 (C-27), 12.1 (C-29)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[19]，故鑒定化合物14為(3β,22α)-stigmast-5-ene-3,22-diol。

(15)化合物15白色無定型粉末狀，HR-TOF-MSm/z：381.130 2 [M+Na]+，分子式為C20H22O6。1H-NMR (600 MHz, CH3OH-d4)δ: 4.11 (1H, dd,J=9.3, 1.2 Hz, H-9′a), 3.84 (1H, d,J=6.3 Hz, H-9′b), 3.79 (1H, t,J=8.7 Hz, H-9a), 3.27 (1H, m, H-9b), 4.86 (1H, m, H-7), 4.42 (1H, d,J=7.0 Hz, H-7′), 3.40 (1H, m, H-8), 2.95 (1H, m, H-8′), 6.97 (1H, d,J=1.7 Hz, H-2), 6.95 (1H, d,J=1.9Hz, H-2′), 6.82 (1H, dd,J=8.0, 1.9 Hz, H-6′), 6.80 (1H, d,J=9.7 Hz, H-6), 6.78 (1H, d,J=8.0 Hz, H-5), 6.76 (1H, d,J=9.7 Hz, H-5′), 3.86 (6H, s, 3, 3′-OCH3)；13C-NMR (150 MHz, CH3OH-d4)δ: 72.1 (C-9′), 70.8 (C-9)，55.8 (C-8′), 51.4 (C-8), 89.6 (C-7′), 83.7 (C-7), 111.0 (C-2′), 110.6 (C-2), 116.2 (C-5′), 116.1 (C-5), 120.3 (C-6′), 119.5 (C-6), 133.9 (C-1′), 131.5 (C-1), 149.3 (C-3′), 149.0 (C-3), 147.6 (C- 4′), 146.8 (C- 4), 56.5 (3, 3′ - OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[20]，故鑒定化合物15為表松脂酚。

(16)化合物16白色無定型粉末狀，HR-TOF-MSm/z：223.205 9 [M+H]+，分子式為C13H18O3。1H-NMR (400 MHz, CH3OH-d4)δ: 5.94 (1H, s, H- 4), 6.43 (1H, d,J=15.9 Hz, H-8), 6.99 (1H, d,J=15.9 Hz, H-7), 2.31 (3H, s, 10-CH3), 1.90 (3H, d,J=1.4 Hz, 13-CH3), 1.02 (3H, s, 11-CH3), 1.06 (3H, s, 12-CH3), 2.29 (1H, m, H-2a), 2.60 (1H, d,J=17.1 Hz, H-2b)；13C-NMR (100 MHz, CH3OH-d4)δ: 50.7 (C-2), 128.2 (C- 4), 148.5 (C-7), 131.9 (C-8), 80.1 (C-6), 164.8 (C-5), 42.8 (C-1), 200.5 (C-3), 200.8 (C-9), 27.8 (10-CH3), 23.7 (11-CH3), 24.9 (12-CH3), 19.3 (13-CH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[21]，故鑒定化合物16為去氫吐葉醇。

(17)化合物17無色油狀，HR-TOF-MSm/z：233.165 4 [M+Na]+，分子式為C13H22O2。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ: 1.08 (3H, d,J=6.1 Hz, 10-CH3), 1.12 (3H, s, 11-CH3), 1.12 (3H, s, 12-CH3), 1.66 (3H, s, 13-CH3), 1.42 (2H, m, H-8), 1.73 (2H, m, H-7), 2.36 (2H, m, H-3), 2.13 (1H, td,J=12.3, 11.6, 5.9 Hz, H-2a), 2.32 (1H, m, H-2b), 3.65 (1H, dq,J=11.5, 6.1 Hz, H-9)；13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ: 26.6 (C-2), 33.8 (C-3), 36.8 (C-7), 37.8 (C-8), 66.2 (C-9), 197.5 (C- 4), 129.4 (C-5), 36.1 (C-1), 165.1 (C-6), 23.3 (10-CH3), 26.6 (11-CH3), 26.6 (12-CH3), 11.1 (13-CH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道基本一致[22]，差別可歸屬于溶劑效應所致，故鑒定化合物17為9-hydroxymegastigm-5-en- 4-one。

(18)化合物18白色粉末狀，HR-TOF-MSm/z：395.147 1 [M+Na]+，分子式為C21H24O6。1H-NMR (400 MHz, CH3OH-d4)δ: 2.90 (1H, dd,J=13.9, 5.3 Hz, H-7b), 2.82 (1H, dd,J=13.9, 7.1 Hz, H-7a), 4.17 (1H, dd,J=7.0, 9.0 Hz, H-9b), 3.94 (1H, t,J=8.1 Hz, H-9a), 2.67 (1H, q,J=7.0 Hz, H-7b′), 2.55 (1H, m, H-7a′), 2.48～2.59 (2H, m, H-8, 8′), 6.63～6.56 (1H, m, H-6′), 6.63～6.56 (1H, m, H-6), 6.70 (1H, d,J=8.1 Hz, H-5′), 6.63～6.56 (1H, m, H-2′), 6.68 (1H, d,J=1.8 Hz, H-2), 6.82 (1H, d,J=8.1 Hz, H-5), 3.79 (6H, d,J=4.7 Hz, 3, 4-OCH3), 3.76 (3H, s, 3′-OCH3)；13C-NMR (100 MHz, CH3OH-d4)δ: 73.1 (C-9), 35.6 (C-7′), 39.1 (C-7), 42.6 (C-8), 48.0 (C-8′), 113.9 (C-2′), 113.4 (C-2), 116.3 (C-5′), 114.1 (C-5), 122.3 (C-6), 123.2 (C-6′), 133.1 (C-1), 181.7 (C-9′), 149.4 (C- 4), 150.7 (C-3), 130.9 (C-1′), 149.2 (C-3′), 146.6 (C- 4′), 56.7 (3′-OCH3), 56.6 (3-OCH3), 56.5 (4-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道一致[23]，故鑒定化合物18為牛蒡子苷元。

2.2 活性結(jié)果

對分離得到的18個化合物進行抗炎活性篩選，其中，化合物4具有抑制LPS誘導RAW 264.7巨噬細胞釋放NO的作用，其IC50為(5.48±1.48)μmol/L。

3 結(jié)論

本研究從胭脂樹帶果樹枝的乙醇提物中分離鑒定了18個化合物，除化合物9外，其余所有化合物均首次從該植物中分離得到。對其抗炎活性進行了初步篩選，結(jié)果表明化合物4—(S)-3-羥基-β-紫羅蘭酮具有抗炎活性，在一定程度上揭示了該植物藥用治療作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，對于胭脂樹中活性成分的后期研究和質(zhì)量控制研究具有一定的參考價值和指導意義。本研究在前期研究基礎(chǔ)上，進一步豐富了胭脂樹的化學成分種類，為該種藥用資源的綜合開發(fā)和利用奠定了基礎(chǔ)。

作者貢獻聲明

陳宜敏：設(shè)計實驗、統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)，撰寫論文；許天啟：統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)；范春林：采集藥材和制備醇提取物；張曉琦：采集藥材和制備醇提取物；葉文才：選題和指導；周光雄：提出研究思路和框架，修改論文。

利益沖突聲明

本研究未受到企業(yè)、公司等第三方資助，作者與任何第三方之間不存在潛在利益沖突。