馬艷芳 張 鑫 李 慧 程 東 孫昌華

(1.泰安市岱岳區(qū)畜牧獸醫(yī)事業(yè)發(fā)展服務(wù)中心，泰安 271000)(2.山東泰山生力源集團股份有限公司，泰安 271000)(3.山東省疾病預(yù)防控制中心，濟南 250014)

骨質(zhì)疏松癥(osteoporosis，OP)是由Pommer在1885年提出來的，它是一種以骨組織微細結(jié)構(gòu)退變和骨質(zhì)量降低為特性的全身性骨骼疾病，易引起骨骼脆性增加，導(dǎo)致骨折的發(fā)生[1-7]。研究表明，骨折發(fā)生率與骨密度密切相關(guān)[8]。骨質(zhì)疏松癥及由其引起的骨折等并發(fā)癥，對中老年人尤其是絕經(jīng)后婦女的身體健康和生存質(zhì)量構(gòu)成了嚴重威脅，目前正日益成為一個公眾健康問題，因此骨質(zhì)疏松癥的防治成為廣大科研人員廣泛關(guān)注的熱點問題。

選擇并建立理想的實驗動物模型是骨質(zhì)疏松癥預(yù)防和治療的基礎(chǔ)，深入實驗研究的關(guān)鍵則是實驗動物和動物模型的選擇。目前，常用于骨質(zhì)疏松研究的動物有大鼠、兔、狗、小鼠、羊、豬和靈長類動物等，但主要選用大鼠[9]，其中SD大鼠[10-11]和Wistar大鼠[12-13]較為適宜。1969年Savill通過手術(shù)切除大鼠卵巢，造成動物機體內(nèi)雌激素水平下降，使其對成骨細胞的促成熟功能和對破骨細胞的抑制功能減弱，最終使得骨量嚴重丟失，從而導(dǎo)致骨質(zhì)疏松，該模型與女性絕經(jīng)或卵巢切除后的骨丟失極為相似，是FDA和WHO推薦的研究絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的經(jīng)典模型之一[14-18]。本文選擇SD大鼠作為模型動物，探討卵巢切除手術(shù)過程中的技術(shù)要點及其術(shù)后護理，為骨質(zhì)疏松動物模型的成功建立提供了參考依據(jù)。

1 材料

1.1 實驗動物與飼養(yǎng)環(huán)境

SD大鼠，SPF級，雌性，140只，體質(zhì)量220～250 g，購于濟南朋悅實驗動物繁育有限公司，許可證號：SCXK(魯)2019-0003。本實驗由山東省疾病預(yù)防控制中心實驗動物福利倫理委員會批準(zhǔn)，實驗動物倫理編號為201902007。

SD大鼠飼養(yǎng)于屏障環(huán)境動物實驗室，使用許可證號：SYXK(魯)2018-0014，環(huán)境溫度20 ℃～26 ℃，相對濕度40%～70%，動物照明晝夜交替12 h/12 h，SPF級大小鼠生長繁殖飼料，自由采食飲水。

1.2 主要試劑與儀器

戊巴比妥鈉(上海氟德化工有限公司)、新潔兒滅、75%乙醇(山東利爾康消毒科技有限公司)、0.9%氯化鈉注射液(山東辰欣藥業(yè)股份有限公司)、青霉素(山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司)、高壓蒸汽滅菌器(山東新華醫(yī)療器械股份有限公司)。

2 手術(shù)前準(zhǔn)備

2.1 手術(shù)器械、器皿消毒

本試驗應(yīng)用高壓蒸汽滅菌法[19]，設(shè)定條件為121 ℃、30 min。

2.2 手術(shù)場所、輔助用具消毒

手術(shù)前將手術(shù)場所地面、手術(shù)臺、手術(shù)板等清潔干凈，用0.1%新潔兒滅噴灑、噴霧消毒，打開紫外線燈照射過夜。

2.3 禁食

動物在手術(shù)麻醉前不禁飲水，禁食12～16 h。

2.4 麻醉

大鼠腹腔注射1%戊巴比妥鈉(40 mg/kg)，3～5 min后麻醉成功[20](圖1A)。

2.5 剃毛、保定

大鼠麻醉后，用剃毛刀清除腹部被毛，紗布清理殘留被毛，保證剃毛區(qū)干凈，大鼠仰臥位固定四肢和頭部于手術(shù)板上(圖1B)。

3 卵巢切除要點

3.1 大鼠保定與卵巢摘除

大鼠保定后，剃毛處碘伏消毒，兩指繃緊大鼠腹中部皮膚，沿腹部正中線在腹中部切2～3 cm的切口，止血鉗剝離切口處兩側(cè)皮膚(圖1C～E)。

眼科鑷提起皮膚開口處腹壁肌肉，縱向剪開2～2.5 cm開口，止血鉗分別夾住切口向兩側(cè)分離，眼科鑷緊貼腹壁內(nèi)側(cè)尋找子宮體或子宮角，動作輕柔避免損傷腹腔其他組織臟器，子宮體或子宮角定位后順勢尋找被脂肪組織包裹呈粉紅色桑葚裝的卵巢(圖1F)。

卵巢定位后，在輸卵管下方子宮角處用可吸收縫合線結(jié)扎打結(jié)，剝離卵巢周圍脂肪后摘除卵巢，檢查卵巢是否切除干凈及術(shù)部有無出血，如有出血及時用無菌紗布按壓，順勢將子宮角和脂肪輕輕推回腹腔，采用同法摘除另一側(cè)卵巢(圖2)。

3.2 手術(shù)縫合及處理

關(guān)閉腹腔前仔細檢查是否有異物，腹腔注射1 mL 60萬U的青霉素，用可吸收縫合線縫合腹部肌肉層，創(chuàng)緣、創(chuàng)壁應(yīng)相互均勻接近對合，合理調(diào)整針間距，縫合時松緊適度，打結(jié)時適當(dāng)收緊，縫合完畢后用碘伏消毒(圖3A)。

用不可吸收縫合線縫合皮膚，縫合完畢后用眼科鑷輕輕調(diào)整縫合口，避免創(chuàng)緣內(nèi)翻而影響愈合(圖3B)。

皮膚縫合完畢后，縫合處碘伏消毒。手術(shù)結(jié)束后，解除保定并肌肉注射1 mL 60萬U的青霉素，仰臥于鼠盒內(nèi)(圖3C～D)。

4 術(shù)后護理措施

4.1 麻醉蘇醒期護理(圖4)

4.1.1保證呼吸暢通：手術(shù)結(jié)束后，大鼠在麻醉期需要一段時間方可蘇醒，蘇醒期間機體保護性反射還沒有完全恢復(fù)，容易發(fā)生嘔吐物、舌部或墊料阻塞而引起窒息死亡，為保證其呼吸道通暢，大鼠應(yīng)呈仰臥或側(cè)臥姿勢單籠飼養(yǎng)于鼠盒內(nèi)，盡量減少顆粒粉塵的吸入。

4.1.2保暖保溫：術(shù)后大鼠處于麻醉蘇醒過程，機體反應(yīng)處于抑制狀態(tài)，此時身體非常虛弱，避免出現(xiàn)低體溫休克或引發(fā)其他并發(fā)癥，需要保溫保暖，飼養(yǎng)室溫度應(yīng)保持在24～26 ℃，為大鼠提供一個較為舒適的環(huán)境。

4.1.3術(shù)部消毒：手術(shù)結(jié)束后，術(shù)部碘伏消毒，用無菌紗布沿術(shù)部、腹部包裹，仰臥后用消毒的百潔布覆蓋于體表。

4.1.4體征監(jiān)視：術(shù)后增加觀察頻率并詳細記錄，密切監(jiān)視大鼠呼吸、心跳、體溫等生命體征。

4.2 急性炎性期護理

手術(shù)的感染率與手術(shù)時無菌操作的執(zhí)行情況、清創(chuàng)是否徹底以及動物的全身抵抗力等密切相關(guān)，同時與術(shù)后的護理情況也有很大關(guān)系，有時術(shù)后護理不良是術(shù)部感染的主要原因[21]。術(shù)后1～3 d的護理是手術(shù)成敗的關(guān)鍵，這期間創(chuàng)口進入急性炎性期[22-23]。

4.2.1全面消毒：急性炎性期需進行全面消毒，主要包括手術(shù)部位、飼養(yǎng)室、鼠盒籠具及墊料。術(shù)部采用碘伏消毒；飼養(yǎng)室選用0.1%新潔兒滅和84消毒液輪流交替使用；鼠盒籠具、墊料采用高壓蒸汽滅菌器消毒，每周至少更換2次。

4.2.2預(yù)防術(shù)后感染：按照臨床要求，防止術(shù)后創(chuàng)口感染和激發(fā)感染，故術(shù)后肌肉注射1 mL 60萬U的青霉素，連用3 d，抗菌消炎。

4.2.3狀態(tài)觀察及飲食護理：保證充足飲食，密切觀察動物精神狀態(tài)、飲水、飲食及排便等情況。

4.3 創(chuàng)口恢復(fù)期護理

急性炎性期后創(chuàng)口開始進入愈合階段，恢復(fù)期(時間段約為術(shù)后4～10 d)創(chuàng)口會有不同程度的發(fā)癢癥狀，大鼠表現(xiàn)為不斷舔咬和抓撓術(shù)部，動物的本能活動會延遲創(chuàng)口的愈合[24]，此時皮膚的縫合線會被大鼠自行拆除，故術(shù)部碘伏消毒持續(xù)至術(shù)后7 d即可。此時，大鼠各項體征和飲食情況逐步恢復(fù)正常，恢復(fù)期每日觀察動物飲食飲水、精神及活動等情況，飼養(yǎng)室定期消毒，鼠盒籠具及墊料定期更換，加強日常飼養(yǎng)管理。

5 結(jié)論

眾所周知，骨質(zhì)疏松是由各種原因?qū)е鹿墙M織結(jié)構(gòu)破壞，常見破骨細胞活性較成骨細胞活性更強，最終新骨形成減少而骨吸收增多[25-26]。隨著老齡化社會的來臨，骨質(zhì)疏松的發(fā)病率較高，嚴重影響患者的生活質(zhì)量，因此，骨質(zhì)疏松越來越多的受到社會的關(guān)注。在研究人類疾病時，模型動物和造模方法的選擇尤為重要，只有在模型與人類疾病發(fā)病機制和組織學(xué)變化相似的情況下，試驗才有借鑒意義。因此，理想骨質(zhì)疏松試驗動物模型的病變過程、病理改變及轉(zhuǎn)歸都應(yīng)該與人類骨質(zhì)疏松盡可能相似[27]。

研究表明，大鼠是骨質(zhì)疏松造模最穩(wěn)定、最實用、應(yīng)用最廣泛的一種動物模型，其中卵巢切除大鼠模型是目前公認的研究絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的經(jīng)典動物模型[14,28]，此動物模型于1969年Saville建立，后被反復(fù)證實，具有造模因素單一、模型確定、重復(fù)性好、實驗結(jié)果可信度大、能很好的模擬絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥代謝的特點等優(yōu)點[29-34]。動物模型是實驗研究的基礎(chǔ)，本文從實驗技術(shù)和動物福利倫理角度探討了大鼠卵巢切除手術(shù)要點及其術(shù)后護理，為骨質(zhì)疏松動物模型的成功建立提供了參考依據(jù)。