況司琦,黃 瑋，李 躍，黃耀文，董雅迪

(1.南昌大學(xué)a.研究生院醫(yī)學(xué)部2019級(jí)；b.附屬口腔醫(yī)院特需門診；c.研究生院醫(yī)學(xué)部2017級(jí)；d.研究生院醫(yī)學(xué)部2018級(jí)，南昌 330006；2.江西省口腔生物醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南昌 330006；3.吉林大學(xué)口腔醫(yī)院急診科，長(zhǎng)春 130000)

乳恒牙替換期是兒童頜骨發(fā)育、頜建立的關(guān)鍵時(shí)期，這一期間出現(xiàn)任何問(wèn)題都可能導(dǎo)致兒童出現(xiàn)牙列不齊、錯(cuò)頜畸形的現(xiàn)象，影響兒童的咀嚼功能及身心的健康成長(zhǎng)[1]。牙齒的萌出是一個(gè)長(zhǎng)期、復(fù)雜且受到多種生物分子嚴(yán)密調(diào)控的過(guò)程，目前學(xué)界對(duì)于牙齒萌出過(guò)程及其背后的機(jī)制尚未完全了解[2]。破骨細(xì)胞抑制因子(OPG)是一種可以調(diào)節(jié)骨吸收且能與肝素相結(jié)合的分泌型糖蛋白，是核因子κB受體活化因子配體(RANKL)的誘餌受體[3]。OPG既可以抑制破骨細(xì)胞(OC)的分化又可以抑制骨吸收活性，從而誘導(dǎo)OC的凋亡[4]。RANKL是以O(shè)PG為探針找到的配體，是OPG的結(jié)合蛋白，通過(guò)受體RANK相互作用可誘導(dǎo)破骨細(xì)胞形成和骨吸收作用。RANKL與RANK結(jié)合后不但能促進(jìn)OC分化成熟產(chǎn)生骨溶解，還能活化OC，增強(qiáng)其破骨能力[5]。RANKL和OPG之間的平衡狀態(tài)決定了骨吸收的速度[6]。

有研究[7]表明，在牙齒萌出期間，RANK和RANKL在濾泡中表達(dá)；成年期后，二者在牙周膜中表達(dá)。通過(guò)采集萌牙期兒童的下頜中切牙牙齦溝液并測(cè)定其中OPG、RANKL的含量，可為進(jìn)一步闡明牙齒萌出過(guò)程及其背后的細(xì)胞和分子機(jī)制提供有價(jià)值的參考數(shù)據(jù)。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

隨機(jī)抽取南昌市區(qū)幼兒園和小學(xué)各5所，征集5～6歲的萌牙期兒童作為調(diào)查對(duì)象。選擇標(biāo)準(zhǔn)：1)出生于南昌市并有長(zhǎng)期居住史；2)身體健康；3)牙周狀況良好；4)無(wú)代謝相關(guān)疾病。最終確定的調(diào)查對(duì)象共424例。

1.2 分組方法

準(zhǔn)備好足量的一次性手套和一次性診療盤(內(nèi)含鑷子、口鏡、探針)。由檢查員在自然光下使用以上檢查工具對(duì)納入調(diào)查的424名兒童進(jìn)行口腔檢查，記錄員對(duì)每個(gè)兒童下頜中切牙的萌出情況進(jìn)行記錄。根據(jù)《兒童口腔疾病預(yù)防指南》推薦的標(biāo)準(zhǔn)，將解剖牙冠萌出程度分成3級(jí)，其中Ⅱ級(jí)和Ⅲ級(jí)分別為解剖冠萌出1/2和解剖冠全萌出。依據(jù)對(duì)象年齡和其解剖牙冠萌出程度，將424例分4組：其中A組和B組分別為5歲、6歲兒童解剖牙冠萌出1/2組，C組和D組分別為5歲、6歲兒童解剖牙冠全萌出組，每組106例。

1.3 取樣和檢測(cè)

取樣前囑受檢兒童刷牙。在人工光源下使用無(wú)菌干棉球擦干所要取樣的牙位并用棉卷隔濕，用探針清除軟垢和菌斑，氣槍輕吹受檢牙面以及相應(yīng)的牙齦黏膜。將準(zhǔn)備好的吸潮紙尖輕輕插入下頜左中切牙或右中切牙唇側(cè)的近中、中點(diǎn)和遠(yuǎn)中3個(gè)位點(diǎn)的齦溝內(nèi)，遇到阻力后立即停止。停留30 s后取出吸潮紙尖，立即裝入已消毒和編號(hào)的Eppendoff管中，稱重后保存。取樣過(guò)程中注意避免唾液或血液污染吸潮紙尖，最后樣本放置于-70 ℃的冰箱內(nèi)保存待檢。采用ELISA法檢測(cè)樣品中的OPG和RANKL含量(ELISA試劑盒由上海超研生物科技有限公司提供)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

A組與C組的OPG測(cè)定值分別為(246.17±58.87)、(240.12±62.55)mg·μL-1，2組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；RANKL測(cè)定值分別為(41.79±15.61)、(36.18±12.59)mg·μL-1，2組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。B組與D組的OPG測(cè)定值分別為(250.18±56.7)、(243.36±65.51)mg·μL-1，2組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；RANKL測(cè)定值分別為(39.87±14.47)、(37.89±13.52)mg·μL-1，2組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。相同年齡不同程度萌出的解剖牙冠其齦溝液中的OPG、RANKL表達(dá)水平差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但二者表達(dá)水平均隨著下頜中切牙的萌出而降低。

3 討論

牙齒萌出是指發(fā)育中的牙齒沿著咬合方向朝口腔內(nèi)移動(dòng)。萌出過(guò)程與牙齒在骨槽窩中的萌出路徑有著密切的關(guān)系，在此過(guò)程中牙胚周圍的牙囊可被破骨細(xì)胞前體募集、融合和激活進(jìn)而被吸收。在牙齒萌出的各個(gè)階段，破骨細(xì)胞的募集和激活依賴于復(fù)雜的信號(hào)機(jī)制。替牙期兒童乳牙牙根被吸收時(shí)，RANKL、OPG由成牙骨質(zhì)細(xì)胞表達(dá)。RANKL可啟動(dòng)OC前體細(xì)胞，可減緩OC的凋亡，從而加快骨溶解導(dǎo)致骨脆性增大[8]。而OPG主要由成骨細(xì)胞(OB)分泌產(chǎn)生，可以抑制OC的活性和功能，并誘導(dǎo)其凋亡，從而防止骨丟失，增加骨密度和骨強(qiáng)度[9]，與RNKP相互拮抗。這提示RANKL/OPG比值可調(diào)控骨代謝平衡,調(diào)節(jié)牙槽骨的吸收和修復(fù)，在乳牙的脫落及恒牙萌出的過(guò)程中起著至關(guān)重要的作用[10-11]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，下頜中切牙在不同萌出階段，其牙齦溝液中都存在OPG、RANKL，但其含量平均值并不相同。這表明恒牙的主動(dòng)萌出過(guò)程中始終有OPG、RANKL的參與[12-16]。另外，不同受檢者其齦溝液中的OPG、RANKL含量也稍有不同，這提示OPG、RANKL含量具有個(gè)體差異性。在各年齡組中，解剖牙冠全萌出時(shí)，牙齦溝液中OPG、RANKL含量平均值要低于解剖牙冠萌出1/2時(shí)的平均值，說(shuō)明在下頜中切牙主動(dòng)萌出過(guò)程中，其OPG、RANKL含量是不斷變化的，很可能受到動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)。說(shuō)明他們相互協(xié)調(diào)，共同控制牙及牙周組織改建，但這與他們的拮抗作用并不相矛盾。

4 小結(jié)

牙齒的萌出是一個(gè)漫長(zhǎng)且復(fù)雜的生理過(guò)程，會(huì)受到基因和環(huán)境的影響，但其背后的萌出機(jī)制目前還沒(méi)有一個(gè)明確的答案。該過(guò)程有多種細(xì)胞的參與，如OB、OC和巨噬細(xì)胞等[17-18]。本研究從被檢者的牙齦溝液中監(jiān)測(cè)到了OPG、RANKL，證明二者在恒牙主動(dòng)萌出過(guò)程中確實(shí)存在。同時(shí)，本研究發(fā)現(xiàn)，OPG、RANKL表達(dá)水平在牙齒萌出過(guò)程中出現(xiàn)變化的現(xiàn)象，表明OPG、RANKL可能在乳恒牙替換過(guò)程中起重要的調(diào)節(jié)作用。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)恒牙解剖冠萌出1/2時(shí)其OPG、RANKL表達(dá)水平和解剖冠全萌出時(shí)有所下降，這是由于RANKL的生物學(xué)效應(yīng)會(huì)被OPG抑制[19-21]，說(shuō)明RANKL/OPG的相對(duì)比例對(duì)OC的生成具有調(diào)節(jié)作用。至于不同萌出程度的下頜中切牙其齦溝液中的OPG、RANKL表達(dá)水平無(wú)顯著差異，其具體原因還有待進(jìn)一步研究。