付永偉

（吉林市疾病預(yù)防控制中心，吉林 吉林 132000）

0 引言

由于新型冠狀病毒肺炎具備極大的傳染力和感染力，自從進(jìn)入我國(guó)以來(lái)，快速造成了大范圍內(nèi)的傳播感染感染人數(shù)的增加，導(dǎo)致眾多的居民申訴了生命安全威脅當(dāng)中，為了加強(qiáng)對(duì)于民眾生命安全保護(hù)防衛(wèi)工作進(jìn)行，我國(guó)在新型冠狀病毒肺炎防治過(guò)程當(dāng)中積極應(yīng)用相關(guān)政策，通過(guò)減少人口流動(dòng)速度和人口流動(dòng)范圍，將病毒感染控制在較小區(qū)域內(nèi)，盡最大努力控制新型冠狀病毒的傳染。我國(guó)在新型冠狀病毒肺炎呈現(xiàn)流行趨勢(shì)的過(guò)程中及時(shí)進(jìn)行政策調(diào)整，通過(guò)合理的手段和規(guī)范，良好地控制住了疫情的發(fā)展，且對(duì)于當(dāng)前仍然存在的出現(xiàn)病例的情況進(jìn)行了應(yīng)對(duì)措施，由于新型冠狀病毒傳染發(fā)展過(guò)程當(dāng)中呈現(xiàn)出了進(jìn)化突變態(tài)勢(shì)，由此衍生出了德?tīng)査局旰蛫W密克戎變異株，具備更強(qiáng)的感染力和殺傷力，容易造成感染者嚴(yán)重的后遺癥影響，甚至因此而死亡。目前國(guó)內(nèi)仍然保持著對(duì)于公共衛(wèi)生安全的警惕性，其中，核酸檢測(cè)就是重要的環(huán)節(jié)。通過(guò)觀察核酸檢測(cè)不難發(fā)現(xiàn)，患者往往需要多次檢測(cè)才能檢測(cè)陽(yáng)性結(jié)果，這對(duì)于效率和安全問(wèn)題都產(chǎn)生了比較大的影響，因此，本文將進(jìn)行核酸檢測(cè)分析和研究對(duì)比，并主要論述假陰性、假陽(yáng)性的影響因素，同時(shí)做出一些針對(duì)性的解讀，提出提高核酸檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性的操作方法和管控方法，以期為當(dāng)前的核酸檢測(cè)中保障檢測(cè)效率和效果提供參考價(jià)值。

1 新型冠狀病毒核酸檢測(cè)

1.1 COVID-19 病例暴露后核酸檢測(cè)陽(yáng)性率

傳染患者在14天后才會(huì)逐漸暴發(fā)出相關(guān)的病癥，并且此時(shí)可以有效檢測(cè)到患者體內(nèi)的核酸陽(yáng)性狀況，因此在進(jìn)行病例核酸檢測(cè)過(guò)程中需要觀察病例暴露后，確診病例和無(wú)癥狀感染者的情況，對(duì)他們暴露后的核酸檢測(cè)陽(yáng)性率進(jìn)行對(duì)比可以發(fā)現(xiàn)，普遍情況下，隨著時(shí)間的增長(zhǎng)，陽(yáng)性率相對(duì)來(lái)說(shuō)都是比較明顯的下降[1]。

1.2 COVID-19病例暴露后核酸檢測(cè)循環(huán)閾值（Ct值）

從表格中的數(shù)據(jù)可以看出COVID-19病例暴露后核酸檢測(cè)循環(huán)閾值比較，此外，在針對(duì)患者檢測(cè)陽(yáng)性的時(shí)間分析中，普遍發(fā)現(xiàn)確診病例和無(wú)癥狀感染者的陽(yáng)性時(shí)間沒(méi)有較大差異。在無(wú)癥狀感染者核酸病毒監(jiān)測(cè)過(guò)程中較難及時(shí)有效檢測(cè)出相關(guān)的患病情況。

2 影響假陰性的主要因素分析

2.1 病原學(xué)因素

我國(guó)國(guó)內(nèi)通過(guò)控制傳播感染范圍，盡量減少大量人群聚集，加強(qiáng)病毒攜帶者核酸檢測(cè)等相關(guān)措施對(duì)病毒實(shí)現(xiàn)了比較良好的控制，同時(shí)通過(guò)開(kāi)展全面的核酸檢測(cè)、新型冠狀疫苗注射工作提高了全體人民對(duì)于新冠肺炎病毒和疫情的防控能力。但是，新冠肺炎病毒的結(jié)構(gòu)不斷變化，變異，導(dǎo)致病毒的傳染力和破壞力更強(qiáng)，對(duì)人類的生命健康造成更大的威脅。因此需要不斷研究和完善相應(yīng)的病毒檢測(cè)方法，針對(duì)病毒進(jìn)行有效的預(yù)防控制。目前核酸檢測(cè)作為有效檢查并了解病毒感染概率的重要方法，在使用過(guò)程中仍然存在一些問(wèn)題，檢測(cè)反應(yīng)速度較慢、檢測(cè)效率較差等問(wèn)題，在核酸檢測(cè)的試劑上還有待加強(qiáng)，提高檢測(cè)的效率和質(zhì)量。

表1 確診病例組與無(wú)癥狀感染者組暴露后核酸檢測(cè)Ct值比較（）

2.2 標(biāo)本因素

采集標(biāo)本的時(shí)間、類型和質(zhì)量等，實(shí)際上都會(huì)影響到檢測(cè)的結(jié)果。從客觀結(jié)果上來(lái)看，如果采集的標(biāo)本在時(shí)間和類型上有不適當(dāng)之處，例如由于潛伏期原因而導(dǎo)致的所采集的標(biāo)本并非最佳的檢測(cè)時(shí)期，就很容易導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)偏差和問(wèn)題。而在目前的痰液、鼻咽拭子、口咽拭子這三種類型的標(biāo)本中對(duì)比，隨著時(shí)間的不同，它們的檢測(cè)結(jié)果也會(huì)出現(xiàn)問(wèn)題差異。此外是標(biāo)本質(zhì)量本身的問(wèn)題，若標(biāo)本的病毒含量能夠達(dá)到核酸檢測(cè)下限，能夠取得良好的檢測(cè)效果，但反之則很容易導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)差異，這也是當(dāng)前的主要問(wèn)題之一，操作的不規(guī)范、保存問(wèn)題或是由于就診者本身具有其他疾病等因素，都會(huì)導(dǎo)致標(biāo)本的質(zhì)量比較低。因此，一方面，采集標(biāo)本本身就要注意規(guī)范性，然后通過(guò)合理適當(dāng)?shù)氖侄蝸?lái)保存標(biāo)本，盡快進(jìn)行檢測(cè)；另一方面，要注意運(yùn)輸問(wèn)題，避免在運(yùn)輸?shù)倪^(guò)程中由于溫度等原因?qū)е聵?biāo)本質(zhì)量下降，影響檢測(cè)結(jié)果，采集的標(biāo)本應(yīng)當(dāng)盡快進(jìn)行檢測(cè)，并且注意保持一定的溫度。

2.3 人員因素

目前主要采用的核酸檢測(cè)樣本采集方法。有偶像呼吸道樣本，血液樣本，糞便樣本等等吸收下呼吸道樣本是開(kāi)展核酸檢測(cè)的首要選擇，早期新型冠狀病毒感染者癥狀為無(wú)痰、干咳、少痰等等反應(yīng)，通過(guò)檢查下呼吸道樣本可以較為準(zhǔn)確檢測(cè)到患者核酸樣本當(dāng)中的相關(guān)病毒數(shù)據(jù)。在采集過(guò)程當(dāng)中，醫(yī)護(hù)人員需要采集同一患者不同部位的多個(gè)樣本，從而提高樣本檢測(cè)的精準(zhǔn)性。注意在樣本采集過(guò)程中，如果采集部位不當(dāng)、采集深度不足、采集力度不佳，都有可能造成樣本材料不合格。在核酸檢測(cè)的過(guò)程中需要大量的檢測(cè)人員負(fù)責(zé)對(duì)廣大民眾進(jìn)行檢測(cè)樣本收集，將檢測(cè)完畢的樣本進(jìn)行分類保管，快速送至檢驗(yàn)場(chǎng)所進(jìn)行檢查，由于我國(guó)人口眾多，在人員的作業(yè)收集檢測(cè)過(guò)程中需要花費(fèi)大量的人力，人力是開(kāi)展病毒檢測(cè)和分析活動(dòng)的重要力量，但是人力有限，在人力使用活動(dòng)過(guò)程當(dāng)中容易受到個(gè)人操作方法和操作水平的影響，從而導(dǎo)致最終檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確，比如在鼻咽拭子樣本采集過(guò)程當(dāng)中，受到樣本采集部位選擇樣本采集深度和力度樣本是指停留時(shí)間的因素影響，最終檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性將會(huì)發(fā)生相應(yīng)變化，在樣本采集過(guò)程當(dāng)中由于樣本采集部位較為敏感，容易引發(fā)患者出現(xiàn)咳嗽和噴嚏現(xiàn)象，從而導(dǎo)致局部出現(xiàn)較高濃度的飛沫，造成病毒感染隱患。為保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，在檢測(cè)過(guò)程當(dāng)中積極對(duì)于檢測(cè)人員來(lái)說(shuō)，需要進(jìn)行專業(yè)的科學(xué)的培訓(xùn)過(guò)程，個(gè)人基礎(chǔ)能力達(dá)標(biāo)，具備基本的知識(shí)儲(chǔ)備和經(jīng)驗(yàn)等，通過(guò)加強(qiáng)對(duì)于檢測(cè)人員的培訓(xùn)教育，引導(dǎo)檢測(cè)人員了解規(guī)范合理的檢測(cè)方法，能夠勝任檢測(cè)中的操作要求，且規(guī)范自身的操作行為。在整個(gè)提取過(guò)程中需要注意多個(gè)事項(xiàng)，檢測(cè)人員應(yīng)當(dāng)留意這些問(wèn)題，積極根據(jù)檢測(cè)中標(biāo)本出現(xiàn)的問(wèn)題規(guī)范自己的操作，避免由于人員能力等原因?qū)е绿崛　z測(cè)過(guò)程中的誤差。

2.4 設(shè)備因素

在檢測(cè)過(guò)程中會(huì)使用到相關(guān)的設(shè)備儀器，如冰箱、離心機(jī)等，檢測(cè)設(shè)備使用操作和日常維護(hù)都會(huì)影響到最終檢測(cè)結(jié)果，如果在檢測(cè)設(shè)備使用過(guò)程當(dāng)中不注意消毒和清潔，會(huì)使細(xì)菌侵入檢測(cè)設(shè)備當(dāng)中，污染檢測(cè)樣本，不利于檢測(cè)結(jié)果精準(zhǔn)測(cè)驗(yàn)。另外，設(shè)備、儀器的功能對(duì)于標(biāo)本保存、提取和檢測(cè)過(guò)程都有著直接的影響，如冰箱就會(huì)對(duì)標(biāo)本的質(zhì)量產(chǎn)生影響，溫度升高會(huì)導(dǎo)致病毒的繁殖性增強(qiáng)，病毒會(huì)出現(xiàn)大量繁殖現(xiàn)象，污染影響內(nèi)部環(huán)境；溫度過(guò)低會(huì)導(dǎo)致病毒活性增強(qiáng)，無(wú)法快速有效檢測(cè)相關(guān)病毒含量。因此，就要做好新冠疫情檢測(cè)設(shè)備的維護(hù)，整套檢測(cè)設(shè)備以及具體的儀器都需要非常細(xì)致和科學(xué)的維護(hù)，定期對(duì)設(shè)備的功能進(jìn)行檢查，避免設(shè)備出現(xiàn)問(wèn)題。

2.5 試劑因素

COVID-19新型冠狀病毒疫情屬于全球范圍內(nèi)的突發(fā)性公共衛(wèi)生事件，在一出現(xiàn)后迅速造成了大范圍的感染，未有效預(yù)防相關(guān)病毒，并快速針對(duì)病毒感染者進(jìn)行治療，各國(guó)學(xué)者紛紛開(kāi)始加強(qiáng)對(duì)于新型冠狀病毒肺炎核酸檢測(cè)的研究。目前各國(guó)學(xué)者在第一時(shí)間內(nèi)對(duì)病毒核酸檢測(cè)進(jìn)行研究，提出了能夠有效檢測(cè)病毒的核酸檢測(cè)試劑，但是由于時(shí)間有限，核酸檢測(cè)試劑并未能進(jìn)行大范圍內(nèi)的臨床試驗(yàn)和長(zhǎng)期的研究評(píng)估，在檢測(cè)過(guò)程中可能出現(xiàn)部分個(gè)體由于擴(kuò)增區(qū)而導(dǎo)致假陽(yáng)性或假陰性的可能。目前我國(guó)擁有7種以上的核酸檢測(cè)試劑進(jìn)行廣泛使用，不同的核酸檢測(cè)試劑在靈敏性和穩(wěn)定性方面具備一定的差異，核酸檢測(cè)試劑的檢測(cè)結(jié)果也存在一定的差異。另外，在提取方面，由于提取的方法實(shí)際上在當(dāng)前還是有多種不同的，而試劑的品牌也有了不同，則就需要選擇適當(dāng)?shù)奶崛≡噭?，并且保證提取的過(guò)程中規(guī)范科學(xué)操作，如果這些方面中出現(xiàn)問(wèn)題，自然會(huì)影響核酸檢測(cè)的結(jié)果[2-3]；在擴(kuò)增方面，則由于不同廠商所研發(fā)的試劑盒問(wèn)題，需要注意當(dāng)出現(xiàn)異常結(jié)果的時(shí)候，要及時(shí)重新采集樣本并檢測(cè)，根據(jù)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行規(guī)范性的檢測(cè)。

3 影響假陽(yáng)性的主要因素

3.1 污染因素

核酸污染的問(wèn)題，實(shí)際上將會(huì)涉及到提取、上級(jí)擴(kuò)增全程中的污染問(wèn)題，并非某個(gè)特定環(huán)節(jié)的，而這一問(wèn)題所引起的檢測(cè)結(jié)果問(wèn)題相對(duì)也比較集中，所需要規(guī)范的行為也比較統(tǒng)一，因此應(yīng)當(dāng)單獨(dú)列為一項(xiàng)影響因素。提取前以及提取中的污染，例如交叉污染，會(huì)對(duì)樣本等本身產(chǎn)生比較大的影響，導(dǎo)致樣本的質(zhì)量出現(xiàn)問(wèn)題，進(jìn)而影響后續(xù)的一系列操作過(guò)程，是根本性的，同時(shí)也是相對(duì)容易解決的，因此針對(duì)各個(gè)環(huán)節(jié)階段中的污染問(wèn)題要進(jìn)行合理的防控，將污染因素控制好。首先，實(shí)驗(yàn)室必須將各個(gè)區(qū)域獨(dú)立開(kāi)，并且保障檢測(cè)、操作人員之間沒(méi)有互相進(jìn)入?yún)^(qū)域，即避免由于人員等問(wèn)題導(dǎo)致區(qū)域之間產(chǎn)生流通而出現(xiàn)的最后的污染問(wèn)題[4]；其次，則是要合理使用設(shè)備儀器，尤其注意清潔等問(wèn)題，根據(jù)操作的方法和注意事項(xiàng)等及時(shí)對(duì)設(shè)備進(jìn)行管理，避免出現(xiàn)交叉污染的問(wèn)題[5]；最后，還要注意在操作過(guò)程中如果發(fā)現(xiàn)了已存在的污染現(xiàn)象，應(yīng)當(dāng)及時(shí)進(jìn)行應(yīng)對(duì)措施，對(duì)針對(duì)性的環(huán)節(jié)進(jìn)行合理的檢查。

3.2 非特異性擴(kuò)增因素

由于引物設(shè)計(jì)不夠特異，也容易在整個(gè)檢測(cè)過(guò)程中導(dǎo)致問(wèn)題，進(jìn)而導(dǎo)致最后的假陽(yáng)性。這一問(wèn)題的關(guān)鍵點(diǎn)在于會(huì)對(duì)S型擴(kuò)增曲線產(chǎn)生影響，導(dǎo)致最后的檢測(cè)結(jié)果和數(shù)據(jù)出現(xiàn)偏差，進(jìn)而導(dǎo)致更多的檢測(cè)質(zhì)量問(wèn)題和判斷問(wèn)題。因此在進(jìn)行核酸檢測(cè)試劑應(yīng)用過(guò)程當(dāng)中，需要選擇適當(dāng)?shù)膭┬筒∑?，要根?jù)相應(yīng)檢測(cè)需求設(shè)置擴(kuò)增條件，最好采用密閉性上架的8連管上機(jī)，有效避免而在。擴(kuò)增過(guò)程中造成大量樣本污染，在實(shí)驗(yàn)結(jié)束以后需要應(yīng)用75%含量的酒精清洗核酸檢測(cè)盒，保障檢測(cè)器具的安全性和衛(wèi)生性。

3.3 判斷失誤因素

由于需要對(duì)結(jié)果進(jìn)行判斷和解讀，就導(dǎo)致了在判斷上也可能會(huì)出現(xiàn)失誤，進(jìn)而影響最終的結(jié)果確定，這一問(wèn)題是主觀上的因素，因此也是容易解決的，在檢測(cè)結(jié)果上，需要提高判斷能力，對(duì)結(jié)果進(jìn)行合理的調(diào)整和對(duì)比，從而更準(zhǔn)確地對(duì)結(jié)果曲線進(jìn)行合理判斷，避免由于人為的判讀失誤原因而導(dǎo)致結(jié)果問(wèn)題[6-7]。另外在檢測(cè)結(jié)束以后需要開(kāi)展復(fù)查工作，對(duì)檢測(cè)人員進(jìn)行重新采樣或者更換不同品牌的試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，通過(guò)復(fù)查檢測(cè)得出明確的檢查樣本，有效排除因?yàn)榻幮乱蛩卮嬖诙霈F(xiàn)的檢測(cè)結(jié)果誤差。

4 結(jié)論

綜上分析，從整個(gè)新型冠狀病毒核酸檢測(cè)以及假陰性、假陽(yáng)性的影響因素來(lái)看，在當(dāng)前的核酸檢測(cè)中，仍然由于主觀以及客觀的許多因素而存在著對(duì)于檢測(cè)結(jié)果的影響，包括人員自身的操作、判斷等，以及對(duì)于客觀環(huán)境的控制和檢測(cè)，因此，要做出針對(duì)性的提高和管控，盡最大努力來(lái)保障核酸檢測(cè)的結(jié)果[8-10]。核酸檢測(cè)技術(shù)對(duì)于新型冠狀病毒的防控具備巨大的意義，本文初步探討分析了在病毒核酸檢測(cè)過(guò)程中的關(guān)鍵要點(diǎn)和影響因素，通過(guò)不斷完善新型冠狀病毒的檢測(cè)，科學(xué)監(jiān)督和檢測(cè)合理程度，提高新型冠狀病毒核酸檢測(cè)準(zhǔn)確性，有助于疫情的防控監(jiān)測(cè)。在整個(gè)檢測(cè)過(guò)程中，需要更加注重對(duì)每個(gè)環(huán)節(jié)的規(guī)范性，正確采集標(biāo)本，避免采集、運(yùn)輸過(guò)程中的問(wèn)題影響檢測(cè)結(jié)果，同時(shí)還要提高檢測(cè)本身的能力，規(guī)范實(shí)驗(yàn)室人員的操作，保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，以此來(lái)保障在當(dāng)前社會(huì)中的核酸檢測(cè)能夠普遍產(chǎn)生作用，為保障公共衛(wèi)生安全提供幫助。