王潔，柴曉洋，李昱晨，陸克義

（1山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，山西 太原 030001；2首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京潞河醫(yī)院，北京 101149；3山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院核醫(yī)學(xué)科，山西 太原 030001）

創(chuàng)傷后癲癇（post-traumatic epilepsy，PTE）是患者在創(chuàng)傷性腦損傷（traumatic brain injury，TBI）一周之后出現(xiàn)的癲癇發(fā)作［1］，其潛伏期由數(shù)周至數(shù)年不等。在TBI患者中PTE的發(fā)病率為1.9%～30%［2］。臨床上，基于一些評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，如格拉斯哥昏迷評(píng)分、顱骨損傷程度、神經(jīng)影像檢查結(jié)果等，可將TBI分為輕度、中度及重度，輕型TBI占TBI的90%以上［3］。輕型TBI后發(fā)生PTE危害巨大，然而臨床研究發(fā)現(xiàn)，腦電圖［4］、腦磁圖［5］等均無(wú)法作為預(yù)測(cè)PTE發(fā)生的有效檢查手段，故尚不知如何預(yù)測(cè)及預(yù)防PTE的發(fā)生，明確輕型TBI后PET的發(fā)病機(jī)制對(duì)于早期預(yù)測(cè)并預(yù)防其發(fā)生顯得尤為重要。

目前認(rèn)為，PTE是一種非刺激性、由腦組織功能缺損而誘發(fā)的癲癇發(fā)作形式。一些研究表明，TBI后引發(fā)的興奮性遞質(zhì)釋放增多、神經(jīng)細(xì)胞丟失［6］及血腦屏障破壞均可增加PTE發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)。這些證據(jù)提示在PTE潛伏期內(nèi)發(fā)生的神經(jīng)生物學(xué)改變是引起PTE的重要原因。

谷氨酸（glutamate，Glu）是中樞興奮性神經(jīng)遞質(zhì)，大腦皮質(zhì)含量最高。Glu過(guò)多可引起活性氧過(guò)量生成和/或細(xì)胞內(nèi)抗氧化防御系統(tǒng)受損，使腦細(xì)胞過(guò)度興奮、自由基產(chǎn)生增多，并進(jìn)而導(dǎo)致腦細(xì)胞損傷，引起癲癇、癡呆等疾?。?］。Glu可通過(guò)誘導(dǎo)腦細(xì)胞線粒體釋放活性氧，進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞損傷。有研究發(fā)現(xiàn)，通過(guò)調(diào)節(jié)神經(jīng)元氧化應(yīng)激損傷［8］、保護(hù)線粒體膜電位［9］，可以減弱Glu所介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用，發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。

本研究制備輕型TBI后PTE模型，觀察在PTE潛伏期內(nèi)，皮層組織谷氨酸、凋亡及自噬水平變化。探討PTE潛伏期內(nèi)的病理生理改變，為研究PTE的發(fā)生機(jī)制提供依據(jù)。

材料和方法

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物雄性SD大鼠，體重180～220 g，由山西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證編號(hào)為：SCXK（晉）2019-0004。大鼠在室溫（25℃）下進(jìn)行12 h的光照/黑暗循環(huán)飼養(yǎng)，適時(shí)喂水、喂食。本研究獲得山西醫(yī)科大學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 主要試劑兔抗大鼠微管相關(guān)蛋白1輕鏈3（microtubule-associated protein 1 light chain 3，LC3）、beclin-1和β-actin抗體（Cell Signaling Technology）；生物素標(biāo)記的山羊抗兔IgG、生物素標(biāo)記的馬抗小鼠IgG和辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈親和素（北京中衫生物技術(shù)有限公司）；caspase ELISA試劑盒為Invitrogen產(chǎn)品；雷帕霉素（rapamycin，Rapa）為L(zhǎng)C Laboratories產(chǎn)品；其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

2 方法

2.1 輕型TBI后PTE模型制備用10%水合氯醛（3 mL/kg）腹腔注射麻醉大鼠后，將其置入Noble-Collip創(chuàng)傷儀中（直徑約30.5 cm），以每分鐘40轉(zhuǎn)，轉(zhuǎn)動(dòng)5 min。創(chuàng)傷組大鼠隨鼓轉(zhuǎn)動(dòng)，每轉(zhuǎn)1圈跌落1次，sham組大鼠固定于創(chuàng)傷儀內(nèi)壁，只隨創(chuàng)傷儀轉(zhuǎn)動(dòng)，不由高處跌落。觀察造模后大鼠飲食活動(dòng)情況，觀察并記錄TBI后7～90 d內(nèi)發(fā)生癇性發(fā)作大鼠的數(shù)量及其發(fā)作形式。對(duì)于發(fā)生癇性發(fā)作的大鼠通過(guò)腦電圖觀察并記錄其腦電波情況，確認(rèn)發(fā)生癇性發(fā)作。TBI后4 d將4μL的100 mmol/L FeCl2水溶液注射至成年SD大鼠感覺(jué)運(yùn)動(dòng)皮層（硬膜下1.2 mm），注射速度為1μL/min。對(duì)照組注射生理鹽水。觀察并記錄TBI后7～90 d內(nèi)發(fā)生癇性發(fā)作大鼠的數(shù)量及其發(fā)作形式。對(duì)于發(fā)生癇性發(fā)作的大鼠通過(guò)腦電圖觀察并記錄其腦電波情況，確認(rèn)發(fā)生癇性發(fā)作。

2.2 癲癇記錄觀察并記錄大鼠創(chuàng)傷前（30 min）、后（7～90 d）大鼠的行為學(xué)變化。用數(shù)字?jǐn)z像機(jī)持續(xù)監(jiān)測(cè)大鼠的行為。根據(jù)Racine［10］制定的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)判定癲癇發(fā)作：0級(jí)（無(wú)任何癲癇發(fā)作）、Ⅰ級(jí)（凝視發(fā)作）、Ⅱ級(jí)（出現(xiàn)規(guī)律性點(diǎn)頭、伴或不伴面部抽動(dòng)）、Ⅲ級(jí)（一側(cè)前肢震顫）、Ⅳ級(jí)（站立、雙前肢震顫及持續(xù)性點(diǎn)頭）、Ⅴ級(jí)（前肢震顫加重，失去平衡跌倒而出現(xiàn)全身強(qiáng)直-陣攣性發(fā)作）和Ⅵ級(jí)（發(fā)作衰竭導(dǎo)致死亡）。PTE發(fā)生率=發(fā)生癇性發(fā)作的大鼠數(shù)/每組大鼠數(shù)×100%。

2.3 電極植入和視頻腦電圖記錄將發(fā)作癲癇的大鼠稱重，用水合氯醛（400 mg/kg，腹腔注射）麻醉。將大鼠固定于立體定位儀上，用鑷子輕輕拉出舌頭，防止呼吸道阻塞，兩側(cè)對(duì)稱，調(diào)整齒桿-2.3 mm固定，使顱骨處于同一水平面。用單面刀片剃去頭部毛，用碘伏消毒頭部皮膚。依次切開(kāi)皮膚、皮下組織及骨膜，鈍性分離骨膜以暴露顱骨。3%H2O2燒灼止血并消毒顱骨表面，清晰暴露前、后囟。用顱骨鉆鉆透顱骨，小心打2個(gè)孔。將兩個(gè)腦電記錄電極置于顱骨孔中，輕輕接觸皮層。使用牙科水泥覆蓋并固定電極在顱骨上，無(wú)線發(fā)射端置于肩背側(cè)。縫合皮膚，將動(dòng)物放回鼠籠，置溫暖安靜處，直至清醒。用于記錄腦電信號(hào)。

2.4 Western blot將創(chuàng)傷后大鼠海馬組織在冰浴環(huán)境中用酶解緩沖液溶解，超聲勻漿后離心，SDSPAGE分離蛋白，將蛋白轉(zhuǎn)至PVDF膜上，經(jīng)封閉、與Ⅰ抗孵育、與相應(yīng)Ⅱ抗孵育后，檢測(cè)免疫印跡。配制化學(xué)發(fā)光液，通過(guò)全自動(dòng)曝光儀顯像，用ImageJ軟件分析條帶灰度值。以β-actin為內(nèi)參照，得出目的蛋白相對(duì)表達(dá)量。

2.5 ELISA法取創(chuàng)傷后大鼠海馬組織50 mg組織置于培養(yǎng)皿中，手術(shù)剪剪碎，加入200μL預(yù)冷的裂解液工作液，冰上用玻璃勻漿器勻漿。將勻漿好的樣本轉(zhuǎn)移到1.5 mL的離心管中，冰浴放置5 min裂解，12 000 r/min在4°C下離心10～15 min，小心地吸取上清轉(zhuǎn)移至新的EP管中，并置于冰上待用。取少量樣本用Bradford法測(cè)定蛋白濃度，按照試劑盒流程測(cè)定caspase-3及caspase-9酶活性。

2.6 高效液相色譜將已經(jīng)過(guò)濾并脫氣的流動(dòng)相注入儲(chǔ)液罐；用流動(dòng)相沖洗金屬過(guò)濾器，然后將過(guò)濾器浸入儲(chǔ)液罐的流動(dòng)相中；依次啟動(dòng)高效液相色譜儀：泵→檢測(cè)器→高效液相色譜軟件→設(shè)置軟件參數(shù)；啟動(dòng)泵，運(yùn)行5 min，結(jié)束后關(guān)閉所有排氣閥；以固定的速率（1 mL/min）運(yùn)行流動(dòng)相，走基線，直到基線平穩(wěn)；基線平穩(wěn)后，在軟件中設(shè)置樣品的運(yùn)行參數(shù)；將固定體積的樣品溶液注入進(jìn)樣閥，然后在軟件中啟動(dòng)注入命令，進(jìn)樣器中的樣品溶液就隨流動(dòng)相進(jìn)入色譜柱；通過(guò)軟件監(jiān)視各項(xiàng)讀數(shù)，當(dāng)檢測(cè)器檢測(cè)到樣品所有峰值，停止運(yùn)行并設(shè)置新的進(jìn)樣。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）表示。兩組間均數(shù)比較用兩樣本t檢驗(yàn)，多組之間的比較采用單因素方差分析，率的比較采用卡方檢驗(yàn)或Fisher檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 TBI后大鼠PTE易患性增加

TBI后大鼠7～90 d內(nèi)PTE的發(fā)生率為11.2%，與sham組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），提示PTE模型制備成功。

為觀察TBI之后大鼠對(duì)不良刺激的敏感性，在造模后第4天予大鼠皮層注射明顯低于致癇劑量的FeCl2，結(jié)果顯示TBI+FeCl2組73.2%大鼠出現(xiàn)復(fù)雜部分性發(fā)作，同期sham+FeCl2組無(wú)1例大鼠出現(xiàn)癇性發(fā)作，TBI+FeCl2組與TBI組及sham+FeCl2組相比均有顯著差異（P＜0.01），見(jiàn)圖1。

Figure 1.Incidence of post-traumatic epilepsy（PTE）of the rats in sham，TBI，TBI+FeCl2，sham+FeCl2 and zVAD+TBI+FeCl2 groups.Mean±SD.n=6.**P＜0.01 vs sham group；##P＜0.01 vs TBI group；△△P＜0.01 vs TBI+FeCl2 group.圖1 各組大鼠PTE的發(fā)生率

2 神經(jīng)細(xì)胞凋亡是TBI后PTE易患性增加的可能原因之一

TBI后給予FeCl2檢測(cè)到大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡明顯增多，caspase-3及caspase-9活性升高，與sham+FeCl2組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），見(jiàn)圖2。

為觀察凋亡對(duì)PTE的影響，預(yù)先給予凋亡抑制劑zVAD-FMK（zVAD），結(jié)果顯示zVAD+TBI+FeCl2組PTE發(fā)生率下降至32.6%，與TBI+FeCl2組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），見(jiàn)圖1。

Figure 2.The activity of caspase-3 and caspase-9 in sham，TBI，sham+FeCl2，TBI+FeCl2，riluzole+TBI+FeCl2 groups.Mean±SD.n=6.**P＜0.01 vs sham group；##P＜0.01 vs sham+FeCl2 group；△△P＜0.01 vs TBI+FeCl2 group.圖2 各組大鼠caspase-3和caspase-9活性

3 PTE潛伏期內(nèi)腦組織中Glu生成增多可引起神經(jīng)細(xì)胞凋亡水平升高

與sham+FeCl2組相比，TBI+FeCl2組 腦 內(nèi)Glu含量顯著增多（P＜0.01），見(jiàn)圖3。為進(jìn)一步明確Glu升高對(duì)凋亡的影響，預(yù)先給予Glu釋放抑制劑riluzole，結(jié)果顯示caspase-3和caspase-9活性均顯著降低（P＜0.01），見(jiàn)圖2。

4 PTE潛伏期內(nèi)穩(wěn)定線粒體膜及清除自由基可抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡

與TBI+FeCl2組相比，預(yù)先給予線粒體膜穩(wěn)定劑cyclosporine A可 顯 著 降 低caspase-3和caspase-9活性（P＜0.01），而給予自由基清除劑SOD后，caspase-9和caspase-3活性亦顯著下降（P＜0.05），見(jiàn)圖4。

5 TBI后自噬水平下降可導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞凋亡增多

與sham+FeCl2組相比，TBI+FeCl2組大腦皮層組織的LC3-II及beclin-1蛋白水平均顯著下降（P＜0.01）；預(yù)先給予自噬激動(dòng)劑Rapa后，自噬水平升高，引起caspase-3水平下降，與TBI+FeCl2組相比有顯著差異（P＜0.01），見(jiàn)圖5。這提示上調(diào)自噬可減輕神經(jīng)細(xì)胞凋亡。

Figure 3.Glutamate（Glu）content in rat brain tissues in sham，TBI，sham+FeCl2，and TBI+FeCl2 groups.Mean±SD.n=6.*P＜0.05 vs sham group；##P＜0.01 vs sham+FeCl2 group.圖3 各組大鼠腦內(nèi)Glu含量

Figure 4.Effects of stabilizing mitochondrial membrane and scavenging free radicals on the apoptosis in TBI，TBI+FeCl2，Cyclo+TBI+FeCl2 and SOD+TBI+FeCl2 groups.Mean±SD.n=6.△P＜0.05，△△P＜0.01 vs TBI+FeCl2 group.圖4 穩(wěn)定線粒體膜及清除自由基對(duì)凋亡的影響

Figure 5.The protein expression of autophagy-related molecules and apoptosis-related molecules.Mean±SD.n=6.##P＜0.01 vs sham+FeCl2 group；△△P＜0.01 vs TBI+FeCl2 group.圖5 各組細(xì)胞自噬和凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)情況

討 論

PTE是TBI后的遲發(fā)性并發(fā)癥之一，TBI可以是由單純腦創(chuàng)傷引起，也可以是全身機(jī)械性創(chuàng)傷的局部表現(xiàn)。在實(shí)際生活中，TBI往往是一些柔和的以及震蕩性的輕型TBI。輕型TBI通常被稱為運(yùn)動(dòng)相關(guān)損傷的腦震蕩［11］，輕型TBI的發(fā)病率是重度及中度腦損傷的10倍以上。在美國(guó)，每年有超過(guò)380萬(wàn)人被診斷出患有外傷性腦損傷，其常見(jiàn)原因包括機(jī)動(dòng)車(chē)事故、運(yùn)動(dòng)損傷和與工作相關(guān)的事故［12］。這部分患者在全身?yè)p傷過(guò)程中，頭顱及心臟并未出現(xiàn)直接的損傷，然而有研究報(bào)道，其PTE發(fā)生率［13］明顯升高。目前3種最常用于研究PTE的TBI動(dòng)物模型是：外側(cè)液壓沖擊損傷、重量下降沖擊加速度損傷和受控的皮質(zhì)損傷。這三種動(dòng)物模型均需要精確的外科開(kāi)顱手術(shù)，使大腦的結(jié)構(gòu)完整性遭到破壞，均為局灶性損傷，且損傷程度較重。除此之外實(shí)行開(kāi)顱術(shù)（或顱骨切除術(shù)），可能會(huì)對(duì)硬腦膜產(chǎn)生輕微損傷或手術(shù)期間導(dǎo)致出血，這種損傷本身就有引起癲癇發(fā)作的可能。本研究中，我們使用Noble-Collip鼓制輕型TBI后PET模型，該模型可較好的模擬臨床上柔和的以及震蕩性的損傷過(guò)程。本研究發(fā)現(xiàn)，輕型TBI后大鼠7～90 d內(nèi)PTE的發(fā)生率為11.2%，與既往報(bào)道相似，提示模型制備成功。

創(chuàng)傷后癲癇模型的局限性之一在于其PET發(fā)生率較低，尤其是輕型TBI后的PET，而非創(chuàng)傷后癲癇動(dòng)物模型的癲癇發(fā)生率相對(duì)穩(wěn)定。嚴(yán)重創(chuàng)傷可以直接損傷腦細(xì)胞，導(dǎo)致皮層神經(jīng)細(xì)胞異常放電，引起早發(fā)性癲癇，而輕度創(chuàng)傷可以通過(guò)使神經(jīng)元細(xì)胞對(duì)損傷的敏感性增高，導(dǎo)致PTE易患性增加。皮層下注射FeCl2是制造創(chuàng)傷后癲癇的經(jīng)典模型，通過(guò)模擬損傷后紅細(xì)胞外滲、溶解和含鐵血黃素沉積于神經(jīng)纖維網(wǎng)內(nèi)而導(dǎo)致癲癇發(fā)生，其致癇效果與劑量相關(guān)，小劑量不足以引起癲癇發(fā)作［14］。本研究在TBI后第4天予大鼠皮層下注射明顯低于致癇劑量的FeCl2，期間73.2%大鼠出現(xiàn)復(fù)雜部分性發(fā)作，而同期對(duì)照組中無(wú)1例大鼠出現(xiàn)癇性發(fā)作。結(jié)果表明，輕型TBI后PET對(duì)損傷的敏感性增加，提示其潛伏期內(nèi)可能存在神經(jīng)生物學(xué)改變，進(jìn)而導(dǎo)致其對(duì)輕微損傷的敏感性增加。

細(xì)胞凋亡是一種由基因調(diào)控和一系列酶參與的細(xì)胞主動(dòng)死亡過(guò)程，是一系列caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)的結(jié)果［15］。caspase可通過(guò)多條途徑被活化，其中經(jīng)線粒體途徑導(dǎo)致線粒體外膜通透化，釋放多種致凋亡因子引起caspase-9活化，最終激活凋亡效應(yīng)酶即caspase-3，通過(guò)水解多種重要的蛋白而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。已有研究證實(shí)，神經(jīng)保護(hù)劑可以通過(guò)減輕TBI后腦水腫及皮層細(xì)胞凋亡發(fā)揮腦保護(hù)作用［16］；通過(guò)降低caspase活性進(jìn)而起到改善TBI后大鼠認(rèn)知的作用［17］；通過(guò)減少TBI后繼發(fā)性神經(jīng)元丟失促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)［18］，提示神經(jīng)細(xì)胞凋亡在TBI后腦損傷過(guò)程中發(fā)揮了重要作用。本研究發(fā)現(xiàn)，與sham+FeCl2組相比，TBI后給予FeCl2檢測(cè)到大鼠腦內(nèi)神經(jīng)細(xì)胞凋亡明顯增多，caspase-3和caspase-9活性顯著升高。為進(jìn)一步明確PTE易患性增加是否與神經(jīng)細(xì)胞凋亡有關(guān)，我們?cè)谄幼⑸湫┝縁eCl2前，給予凋亡抑制劑zVAD-FMK后，caspase-3水平下降，且PTE的發(fā)生率明顯下降，提示神經(jīng)細(xì)胞凋亡是TBI后PTE易患性增加的重要原因之一。在生理情況下，細(xì)胞凋亡受多種促凋亡分子和（或）抑制凋亡分子之間平衡的調(diào)控，而在病理狀況下，調(diào)控機(jī)制的失衡將導(dǎo)致疾病的發(fā)生。因此，闡明PTE潛伏期內(nèi)促凋亡的機(jī)制，將成為預(yù)防PTE研究中非常有意義的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。

Glu是中樞興奮性神經(jīng)遞質(zhì)，Glu過(guò)多可引起活性氧過(guò)量生成和/或細(xì)胞內(nèi)抗氧化防御系統(tǒng)受損，使腦細(xì)胞過(guò)度興奮、自由基產(chǎn)生增多，并進(jìn)而導(dǎo)致腦細(xì)胞損傷。有研究發(fā)現(xiàn)，Glu可通過(guò)誘導(dǎo)腦細(xì)胞線粒體釋放活性氧，導(dǎo)致細(xì)胞損傷，而通過(guò)抑制一氧化氮合酶活性及減少一氧化氮的生成可以減弱Glu所介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用，發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用［8］。以上研究提示，腦內(nèi)Glu產(chǎn)生增多可介導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞損傷。在正常情況下，大多數(shù)位于線粒體內(nèi)膜上的通透性轉(zhuǎn)換孔（mitochondrial permeability transition pore，MPTP）處于關(guān)閉狀態(tài)，當(dāng)機(jī)體在各種損傷因素作用下MPTP開(kāi)放，線粒體膜電位下降，線粒體的通透性升高，細(xì)胞內(nèi)活性氧等物質(zhì)生成增多，促進(jìn)細(xì)胞凋亡并導(dǎo)致相關(guān)器官的損傷。本研究發(fā)現(xiàn)，與sham+FeCl2組相比，TBI+FeCl2組檢測(cè)到大鼠腦內(nèi)Glu含量和神經(jīng)細(xì)胞凋亡均明顯增多，以caspase-3及caspase-9的表達(dá)增高為主。而預(yù)先給予Glu抑制劑后，caspase-3及caspase-9表達(dá)下降，提示PTE潛伏期內(nèi)Glu產(chǎn)生增多可能通過(guò)損傷線粒體導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞凋亡增多。

在進(jìn)一步探討線粒體損傷在促進(jìn)凋亡中的作用機(jī)制時(shí)，我們發(fā)現(xiàn)預(yù)先給予線粒體膜穩(wěn)定劑后，caspase-3及caspase-9明顯下降，而給予自由基清除劑后，雖然能夠降低caspase-9明顯，但只能輕度降低caspase-3，而這一現(xiàn)象無(wú)法用損傷線粒體釋放活性氧促凋亡的機(jī)制解釋，提示由Glu導(dǎo)致的線粒體損傷可能通過(guò)其他機(jī)制介導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡。

正常情況下，受損傷的線粒體需要被及時(shí)清除以維持細(xì)胞的正?；顒?dòng)狀態(tài)。研究表明，細(xì)胞主要通過(guò)自噬選擇性地清除損傷的線粒體［19］。自噬作為真核生物細(xì)胞內(nèi)基本的新陳代謝活動(dòng)之一，存在于神經(jīng)元、膠質(zhì)細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)中，在其中發(fā)揮著的雙刃劍作用［20］，在生理狀況下，自噬能起到保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞的作用，而自噬的調(diào)節(jié)失常會(huì)引起神經(jīng)退行性疾?。?1］及癲癇［22］。本研究中，我們檢測(cè)了PTE潛伏期內(nèi)神經(jīng)細(xì)胞的自噬水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其水平明顯下降，而注射小劑量FeCl2之前預(yù)先給予自噬激動(dòng)劑Rapa后，自噬水平升高，神經(jīng)細(xì)胞凋亡明顯降低，提示自噬水平的降低是導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞凋亡的可能原因。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)PTE潛伏期內(nèi)Glu釋放增多，通過(guò)引起自噬水平下降進(jìn)而導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞凋亡增加，可能是輕型TBI后PTE易患性增加的機(jī)制之一。