李 勝， 白力格扣， 袁非凡， 李寒梅， 陳子賢， 建曉倩，王 華， 張 眉， 郭 潔， 李 潔， 馮蓮英， 叢日華*

（1.陜西省畜牧技術(shù)推廣總站，陜西西安 710016；2.西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，陜西楊凌 712100；3.陜西省水產(chǎn)研究與技術(shù)推廣總站，陜西西安 710086；4.西安海吉焦生物科技研究院有限公司，陜西西安 710016；5.陜西康大飼料有限公司，陜西咸陽(yáng) 713700）

母體妊娠期及泌乳期的營(yíng)養(yǎng)水平對(duì)子代的生長(zhǎng)發(fā)育有著非常重要的作用。丁酸梭菌又名酪酸菌，進(jìn)入動(dòng)物機(jī)體后會(huì)產(chǎn)生多種有益機(jī)體的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，能夠調(diào)節(jié)動(dòng)物機(jī)體腸道微生物生態(tài)平衡，可以提高機(jī)體對(duì)蛋白、脂肪等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的分解吸收，增強(qiáng)動(dòng)物免疫功能、促進(jìn)生長(zhǎng)性能（張自杰等，2021；趙娜等，2018）。β-胡蘿卜素是動(dòng)物體內(nèi)維生素A的重要來(lái)源，但是，動(dòng)物體內(nèi)不能合成β-胡蘿卜素，必須由食物攝入，β-胡蘿卜素作為維生素及類(lèi)維生素類(lèi)飼料添加劑產(chǎn)品具有抗氧化、著色、提高免疫力和繁殖機(jī)能，促進(jìn)細(xì)胞間的縫隙聯(lián)接等多種生理功能，同時(shí)有研究表明，在飼料中添加β-胡蘿卜素可以提高肉仔雞日增重，提高血清和肝臟中抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶活力（李俊營(yíng)等，2012；任延利等，2007）。目前，兩者單獨(dú)或與其他生物活性物質(zhì)聯(lián)合研究的報(bào)道較多，但兩者聯(lián)合應(yīng)用對(duì)機(jī)體的作用研究報(bào)道較少。因此，本文的目的主要是通過(guò)在母體妊娠期及泌乳期日糧中添加β-胡蘿卜素和丁酸梭菌，研究母體日糧中添加β-胡蘿卜素和丁酸梭菌對(duì)后代生長(zhǎng)性能以及血清生化指標(biāo)的影響，為β-胡蘿卜素和丁酸梭菌在臨床生產(chǎn)中的聯(lián)合應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物及試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)選擇20只8周齡KM小鼠，雌雄各半，購(gòu)自成都達(dá)碩試驗(yàn)動(dòng)物有限公司，于動(dòng)物室驗(yàn)室分籠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，雌雄合籠交配，雌鼠受孕后隨機(jī)分為5組，孕前正常喂養(yǎng)，待雌鼠妊娠第11天起，對(duì)照組飼喂普通鼠糧，試驗(yàn)組1、2、3分別飼喂日采食0.05‰、0.1‰、0.15‰的β-胡蘿卜素和丁酸梭菌（純度≥20%）自制糧，試驗(yàn)組4只飼喂日采食0.1‰的β-胡蘿卜素自制糧，飼喂至子代鼠21 d時(shí)，每組隨機(jī)抽取6只小鼠剖檢、采樣。

1.2 試驗(yàn)日糧 本試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)日糧配方參考了國(guó)標(biāo)GB14924.2-2001試驗(yàn)動(dòng)物飼料標(biāo)準(zhǔn)，各原料種類(lèi)添加量見(jiàn)表1所示。

表1 基礎(chǔ)日糧配方組成

1.3 樣品采集 在子代鼠21 d時(shí)，對(duì)全部小鼠進(jìn)行活體稱(chēng)重，取眼眶血液，置于4℃冰箱過(guò)夜，在室驗(yàn)室將血液樣品通過(guò)離心（3500 r/min，10 min）制成血清，送檢進(jìn)行血清生化指標(biāo)檢測(cè)。采集血液樣本后，將小鼠斷頸處死，解剖取樣。取肝、脾、胃、小腸和大腸各段，并用生理鹽水對(duì)胃腸道內(nèi)容物沖洗后進(jìn)行稱(chēng)重，計(jì)算器官指數(shù)：

1.4 血清生化指標(biāo) 使用深圳雷杜生命科技Chemray 240自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶（AST）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（γ-GGT）、堿性磷酸酶（ALP）、總膽紅素（TBIL）、直接膽紅素（DBIL）、堿性磷酸酶（ALP）、白蛋白（ALB）、總膽汁酸（TBA）、總膽固醇（T-CHO）、甘油三酯（TG）、高密度膽固醇（HDL-C）、低密度膽固醇（LDL-C）、糖化血清蛋白（GSP）、葡萄糖（GLU）、尿素氮（UREA）、肌酐（CR）、尿素（BUN）含量。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用軟件SPSS 26.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用One-way ANOVA進(jìn)行方差分析，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。當(dāng)P＜0.05時(shí)，判定具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的顯著性差異，當(dāng)P＜0.01時(shí)，判定具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的極顯著性差異。

2 結(jié)果

2.1 β-胡蘿卜素和丁酸梭菌對(duì)子代鼠體重、器官重和器官指數(shù)的影響 由表2可知，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組1小鼠體重、肝臟重量、肝臟指數(shù)、回腸重量、盲腸重量和胸腺重量極顯著增加了36.36%、77.5%、19.55%、107.14%、116.67%和44.12%（P＜0.01），脾臟重量、盲腸指數(shù)顯著增加52.78%、41.71%（P＜0.05）；試驗(yàn)組2小鼠體重、肝臟重量、肝臟指數(shù)、回腸重量和盲腸重量極顯著增 加 了27.27%、52.5%、18.83%、171.43%和61.11%（P＜0.01），回腸指數(shù)和胸腺重量顯著增加116.48%和29.41%（P＜0.05），結(jié)腸指數(shù)顯著降低了37.19%（P＜0.05）；試驗(yàn)組3小鼠體重、脾臟重量、空腸重量、回腸重量、盲腸重量、胸腺重量、肝臟重量極顯著增加了54.54%、83.33%、50.00%、178.57%、88.89%、61.76%、67.5%（P＜0.01），小鼠回腸指數(shù)顯著增加了84.00%（P＜0.05）；試驗(yàn)組4小鼠肝臟指數(shù)和回腸重量極顯著增加了17.64%和107.14%（P＜0.01），肝臟重量、回腸指數(shù)顯著增加22.5%、100.88%（P＜0.05）。

表2 β-胡蘿卜素和丁酸梭菌對(duì)子代鼠體重、器官重、器官指數(shù)的影響

與試驗(yàn)組1相比，試驗(yàn)組2小鼠肝臟重量極顯著減少了14.08%（P＜0.01），脾臟重量、脾臟指數(shù)、十二指腸重量和盲腸重量顯著減少了32.73%、23.12%、26.47%和25.64%（P＜0.05），回腸指數(shù)顯著增加53.84%（P＜0.05）；試驗(yàn)組3小鼠體重極顯著增加了13.33%（P＜0.01），小鼠肝臟指數(shù)顯著減少了9.11%（P＜0.05）；試驗(yàn)組4小鼠體重、肝臟重量、脾臟重量、盲腸重量和胸腺重量極顯著減少了20.00%、30.99%、47.27%、47.69%和32.65%（P＜0.01），小鼠脾臟指數(shù)、十二指腸重量和盲腸指數(shù)減少了24.02%、31.37%和34.35%（P＜0.05）。

與試驗(yàn)組2相比，試驗(yàn)組3小鼠體重、脾臟重量、脾臟指數(shù)、十二指腸重量和空腸重量極顯著升高了21.43%、78.38%、49.61%、53.33%和46.15%（P＜0.01），小鼠胸腺重量、結(jié)腸重量顯著升高了25.00%、58.33%（P＜0.05），肝臟指數(shù)顯著下降8.56%（P＜0.05）；試驗(yàn)組4小鼠體重、肝臟重量極顯著降低了14.29%和19.67%（P＜0.01），胸腺重量、盲腸重量和盲腸指數(shù)顯著降低了25.00%、29.66%和29.27%（P＜0.05），小鼠結(jié)腸指數(shù)顯著升高55.55%（P＜0.05）。

與試驗(yàn)組3相比，試驗(yàn)組4小鼠體重、胸腺重量、肝臟重量、脾臟重量、脾臟指數(shù)、十二指腸重量、空腸重量和盲腸重量極顯著降低了29.41%、40.00%、26.87%、56.06%、33.94%、39.13%、47.37%和40.00%（P＜0.01）。新生小鼠其余各器官重和器官指數(shù)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。

2.2 β-胡蘿卜素和丁酸梭菌對(duì)子代鼠血清生化指標(biāo)的影響 由表3可見(jiàn)，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組1、2、3小鼠谷丙轉(zhuǎn)氨酶極顯著降低（P＜0.01）；試驗(yàn)組3、4小鼠γ-谷氨酰基轉(zhuǎn)移酶顯著升高了13.21%、10.29%（P＜0.05）；試驗(yàn)組1總膽紅素顯著降低了46.80%（P＜0.05）；試驗(yàn)組1直接膽紅素顯著降低了53.23%（P＜0.05）；試驗(yàn)組1、2、3、4小鼠白蛋白極顯著升高了14.15%、12.55%、21.28%、16.67%（P＜0.01）；試驗(yàn)組3總膽汁酸顯著升高了69.80%（P＜0.05）；試驗(yàn)組3血糖極顯著升高了230.00%（P＜0.01）；試驗(yàn)組1、2、3、4小鼠尿酸極顯著降低了40.73%、41.53%、32.89%、45.12%（P＜0.01）；試驗(yàn)組1肌酐顯著降低了32.58%（P＜0.05）。

表3 β-胡蘿卜素和丁酸梭菌對(duì)子代鼠生化指標(biāo)的影響

與試驗(yàn)組1相比，試驗(yàn)組3小鼠總膽汁酸極顯著升高了113.52%（P＜0.01）；試驗(yàn)組3肌酐顯著升高了48.08%（P＜0.05）；與試驗(yàn)組2相比，試驗(yàn)組3總膽汁酸極顯著升高了105.83%（P＜0.01）；與試驗(yàn)組3相比，試驗(yàn)組4總膽汁酸極顯著降低了55.83%（P＜0.01），試驗(yàn)組4糖化血清蛋白顯著降低了34.67%（P＜0.05）。

3 討論

動(dòng)物體重是檢測(cè)動(dòng)物生長(zhǎng)最直觀(guān)的指標(biāo)。任延利等（2007）和褚千然等（2021）研究表明，添加不同水平的β-胡蘿卜素能夠提高肉仔雞和蛋雛雞的平均日增重。Murano等（2005）試驗(yàn)表明長(zhǎng)期口服β-胡蘿卜素可增加幼齡雪貂的體重。武麗達(dá)等（2022）研究表明，飼料中添加丁酸梭菌可有效提高白羽肉雞的日增重。李玉鵬等（2017）研究表明，添加丁酸梭菌的飼糧飼喂斷奶仔豬，可以提高斷奶仔豬的平均增重。在本試驗(yàn)中，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組1、2、3小鼠體重極顯著升高；與試驗(yàn)組4相比，試驗(yàn)組1、2、3小鼠體重極顯著升高；而與試驗(yàn)組1和試驗(yàn)組2相比，試驗(yàn)組3小鼠體重極顯著升高，與上述研究結(jié)果相一致。因此在母體飼料中添加1.5‰β-胡蘿卜素和丁酸梭菌可以更好提高新生小鼠生長(zhǎng)性能。

胸腺是機(jī)體重要的免疫器官，通常胸腺指數(shù)也作為評(píng)估免疫功能的基礎(chǔ)指標(biāo)。袁慧坤等（2018）研究發(fā)現(xiàn)，在北京鴨中添加丁酸梭菌可以顯著提高胸腺指數(shù)。在本試驗(yàn)中，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組1、3小鼠胸腺重量極顯著升高，試驗(yàn)組2小鼠胸腺重量顯著升高，與上述研究結(jié)果相一致；與試驗(yàn)組4相比，試驗(yàn)組1、3小鼠胸腺重量極顯著升高，試驗(yàn)組2小鼠胸腺重量顯著升高；與試驗(yàn)組2相比，試驗(yàn)組3小鼠胸腺重量顯著升高。脾是一個(gè)關(guān)鍵的外周淋巴器官，在產(chǎn)生免疫反應(yīng)中起主導(dǎo)作用，脾臟指數(shù)是評(píng)價(jià)動(dòng)物免疫功能直接、簡(jiǎn)單、有效的重要指標(biāo)（李玉鵬等，2017；Mast等，1999）。 Garcia等（2003）研究表明，飼喂含β-胡蘿卜素的日糧可以增強(qiáng)小鼠的免疫功能。李可等（2015）研究表明，在飼料中添加丁酸梭菌，可以顯著提高脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)。劉海艷等（2016）研究表明，在日糧中添加β-胡蘿卜素能明顯增強(qiáng)早期雛雞的免疫器官指數(shù)。在本試驗(yàn)中，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組1小鼠脾臟重量顯著升高，試驗(yàn)組3小鼠脾臟重量極顯著升高；與試驗(yàn)組2相比，試驗(yàn)組1小鼠脾臟重量、脾臟指數(shù)顯著升高，試驗(yàn)組3小鼠脾臟重量、脾臟指數(shù)極顯著升高；與試驗(yàn)組4相比，試驗(yàn)組3脾臟重量、脾臟指數(shù)極顯著升高，與上述研究結(jié)果相一致。

肝臟作為關(guān)鍵的代謝器官，可調(diào)控動(dòng)物機(jī)體的能量代謝和脂代謝。與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組1、2、3小鼠肝臟重量極顯著升高，試驗(yàn)組1、2肝臟指數(shù)極顯著升高，試驗(yàn)組3肝臟指數(shù)顯著升高；與試驗(yàn)組4相比，試驗(yàn)組1、2、3小鼠肝臟重量極顯著升高；與試驗(yàn)組2相比，試驗(yàn)組1肝臟重量極顯著升高；與試驗(yàn)組3相比，試驗(yàn)組1、2小鼠肝臟指數(shù)顯著升高；因此試驗(yàn)組1可以更好提高新生小鼠肝臟代謝生長(zhǎng)能力。

胃腸道是動(dòng)物消化、吸收養(yǎng)分的主要器官，常以消化器官的重量和指數(shù)來(lái)衡量動(dòng)物的消化吸收功能。丁酸梭菌可以促進(jìn)畜禽腸道發(fā)育，有利于改善腸道的消化吸收功能 （趙敏孟等，2018）。與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組2小鼠十二指腸指數(shù)極顯著降低，試驗(yàn)組4小鼠十二指腸指數(shù)顯著降低；與試驗(yàn)組2相比，試驗(yàn)組1、3小鼠十二指腸重量顯著升高；與試驗(yàn)組4相比，試驗(yàn)組1、3十二指腸重量升高。與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組3空腸重量極顯著升高，與試驗(yàn)組4相比，試驗(yàn)組1、3小鼠空腸重量極顯著升高；與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組1、2、3、4小鼠回腸重量極顯著升高，試驗(yàn)組2、3、4小鼠回腸指數(shù)顯著升高。與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組1、2、3盲腸重量極顯著升高，試驗(yàn)組1盲腸指數(shù)顯著升高；與試驗(yàn)組2、4相比，試驗(yàn)組1盲腸重量顯著升高；與試驗(yàn)組4相比，試驗(yàn)組3盲腸重量顯著升高。與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組2結(jié)腸指數(shù)顯著降低；與試驗(yàn)組2相比，試驗(yàn)組3結(jié)腸重量顯著升高。這與蔣一秀等（2021）研究發(fā)現(xiàn)飼料中添加丁酸梭菌可以提高仔鵝空腸和回腸重量研究結(jié)果相一致。因此試驗(yàn)組1、3可以提高小鼠腸道消化吸收能力，提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)與腸道的接觸面積，改善腸道對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收效率。

血清生化指標(biāo)可以反映動(dòng)物機(jī)體對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收以及營(yíng)養(yǎng)代謝和機(jī)體的健康狀態(tài)，通過(guò)動(dòng)物血清生化指標(biāo)可以評(píng)估動(dòng)物的健康狀況和生理代謝水平（趙晨等，2022）。血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）主要分布在肝細(xì)胞內(nèi)，當(dāng)機(jī)體處于健康狀態(tài)時(shí)血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性較低，如果肝臟受損或損傷，會(huì)使血液中ALT的活性升高，所以ALT常作為檢測(cè)肝臟損傷的敏感指標(biāo)之一；ALT在本試驗(yàn)中與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組1、2、3小鼠ALT極顯著下降，因此試驗(yàn)組1、2、3對(duì)小鼠肝臟損傷較小；γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（GGT）是一種非特異的肝功能指標(biāo)，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組3、4顯著升高；血清中白蛋白（ALB）含量可以反映動(dòng)物機(jī)體對(duì)飼料中蛋白質(zhì)的消化吸收程度，通過(guò)對(duì)ALB的測(cè)定可以間接反映出動(dòng)物機(jī)體的代謝功能（陳永華等，2012），當(dāng)體內(nèi)蛋白質(zhì)的合成作用增強(qiáng)時(shí)，血清中ALB含量較高。盧連強(qiáng)等（2022）研究結(jié)果表明，在飼料中添加β-胡蘿卜素和胡蘿卜渣可以提升白蛋白、總蛋白的含量。任延利（2008）研究發(fā)現(xiàn)，在飼料中添加β-胡蘿卜素可以顯著提升血清總蛋白和白蛋白的含量。本試驗(yàn)中，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組1、2、3、4血清ALB含量極顯著升高，與上述研究結(jié)果相一致，可能為試驗(yàn)組飼料蛋白質(zhì)攝入量高且合成作用強(qiáng)，同樣在生長(zhǎng)性能上也表現(xiàn)為試驗(yàn)組1、2、3體重極顯著高于對(duì)照組，表明在飼料中同時(shí)添加β-胡蘿卜素和丁酸梭菌可提高小鼠生長(zhǎng)性能。葡萄糖（GLU）的含量是動(dòng)物機(jī)體重要的能量來(lái)源，GLU在正常范圍內(nèi)的高低能反映機(jī)體能量代謝和糖代謝情況（代二朋等，2022；李巖等，2022），本試驗(yàn)中與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組3小鼠GLU極顯著升高、試驗(yàn)組1、4小鼠血糖顯著升高，結(jié)果表明在飼料中添加1.5‰胡蘿卜素和丁酸梭菌可提高新生小鼠對(duì)糖類(lèi)物質(zhì)的代謝。尿酸（UREA）可以衡量動(dòng)物機(jī)體的蛋白質(zhì)代謝水平和飼料氨基酸平衡狀況的直觀(guān)指標(biāo)，UREA含量與體內(nèi)氮沉積有密切的關(guān)系（盧連強(qiáng)等，2022）。在本試驗(yàn)中與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組1、2、3、4血清UREA含量均極顯著下降，可能是由于新生小鼠生長(zhǎng)需要大量蛋白質(zhì)，因此機(jī)體會(huì)減少UREA的產(chǎn)生增加氮的保留，從而更有利于機(jī)體生長(zhǎng)的發(fā)育。膽紅素是肝臟代謝的重要物質(zhì)，肝細(xì)胞對(duì)血液中的膽紅素?cái)z取、結(jié)合，當(dāng)肝細(xì)胞受損時(shí)血液中膽紅素含量會(huì)升高，本試驗(yàn)中與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組1小鼠血清總膽紅素，直接膽紅素顯著下降，與試驗(yàn)組3、4相比，試驗(yàn)組1小鼠血清總膽紅素極顯著降低，結(jié)果可說(shuō)明在飼料中添加β-胡蘿卜素和丁酸梭菌不會(huì)對(duì)肝臟造成影響。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，各組小鼠血清生化指標(biāo)均在正常范圍內(nèi)，說(shuō)明在飼料中添加β-胡蘿卜素和丁酸梭菌不會(huì)對(duì)新生小鼠產(chǎn)生不良反應(yīng)，并且可以提高子代鼠生長(zhǎng)性能、免疫功能，促進(jìn)體內(nèi)蛋白質(zhì)的合成、利用。

4 小結(jié)

本試驗(yàn)結(jié)果表明，在飼料中同時(shí)添加0.15‰β-胡蘿卜素和丁酸梭菌對(duì)于提高子代鼠生長(zhǎng)性能、免疫功能、促進(jìn)蛋白質(zhì)的代謝合成更為有效。