劉志恒袁霞紅劉 林*

(1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院,長(zhǎng)沙 410007;2.湖南中醫(yī)藥大學(xué),長(zhǎng)沙 410208)

隨著物質(zhì)條件和生活水平的提高,不僅是生理上的疾病,同時(shí)心理精神類(lèi)疾病的發(fā)生率也同樣在提升。根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查數(shù)據(jù)顯示,抑郁癥已成為嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康的第二大疾病[1],其以顯著而持久的情緒低落為主要臨床特征,主要表現(xiàn)有心境低落、意志活動(dòng)減退、思維遲緩和認(rèn)知功能損害,同時(shí)可伴有睡眠障礙、焦慮,甚者可出現(xiàn)嚴(yán)重的自殘或自殺行為。盡管現(xiàn)在大眾對(duì)抑郁癥的關(guān)注日益提高,但其發(fā)病機(jī)制尚未明確,可能與遺傳因素、生物因素、社會(huì)因素等相關(guān)?，F(xiàn)有的臨床藥物治療方案,存在其毒副作用明顯,停藥后容易復(fù)發(fā)等問(wèn)題,而且目前在抗抑郁藥物的研發(fā)進(jìn)展上并無(wú)突破[2]。相較之下,以祖國(guó)醫(yī)學(xué)為主要治療手段的臨床治療中明顯取得相對(duì)不錯(cuò)的療效。所以從中醫(yī)藥基礎(chǔ)研究出發(fā),以祖國(guó)醫(yī)學(xué)的角度去探索抑郁癥的發(fā)病機(jī)制和相關(guān)藥物的治療機(jī)制是一個(gè)新的突破口。根據(jù)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中“同病異治”和“辨證論治”的理論指導(dǎo),抑郁癥患者群體有著相對(duì)一致的主癥和相對(duì)差異較大的伴發(fā)癥,所以針對(duì)其個(gè)體的不同情況,采取的藥物和治療方案也不相一致。因此,在中醫(yī)藥基礎(chǔ)研究中,建立與傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)相對(duì)應(yīng)的證候抑郁證動(dòng)物模型是關(guān)鍵環(huán)節(jié)。

1 抑郁癥動(dòng)物模型的制備

理想的抑郁癥造模動(dòng)物主要有兩個(gè)要求:第一點(diǎn)是其生理病理機(jī)制與人類(lèi)高度相似;第二點(diǎn)是與人類(lèi)抑郁癥發(fā)病機(jī)制相似,且抑郁癥癥狀能被人類(lèi)使用所使用的抗抑郁藥物所緩解[3]。這些要求都是為了更好的模擬人類(lèi)機(jī)體,從而對(duì)抑郁癥發(fā)病機(jī)制和治療方法的研究產(chǎn)生更具有可行性且有信服力的結(jié)果。

1.1 造模動(dòng)物種類(lèi)及品系的選取

目前應(yīng)用于抑郁癥造模的動(dòng)物主要有大鼠、小鼠、非人靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物[4]等,其中以小鼠、大鼠最為常用[5]。雖然非人靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物與人類(lèi)有較高的親緣關(guān)系,情感神經(jīng)中樞和內(nèi)分泌都與人有較高的重合度,因而作為最理想的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物[6],但其造價(jià)昂貴,樣本量稀少,因此不多論述。目前最常用于制備抑郁癥動(dòng)物模型的動(dòng)物種類(lèi)是小鼠、大鼠。

不同品系的小鼠都有其獨(dú)特的表型跟適用方向,是目前疾病動(dòng)物研究中應(yīng)用最廣的動(dòng)物模型。其具有體積小、價(jià)格低、同時(shí)還可從網(wǎng)絡(luò)獲取基因組測(cè)序圖譜、方便采取基因工程技術(shù)誘導(dǎo)小鼠模型建立等優(yōu)勢(shì)[7]。目前國(guó)內(nèi)外常用的小鼠有:KM小鼠[8-9],BALB/c小 鼠[10]、C57BL/6J小 鼠[11-12]等。與小鼠相比較,抑郁癥造模實(shí)驗(yàn)中大鼠的體重變化和行為學(xué)觀(guān)測(cè)數(shù)據(jù)更為明顯,使抗抑郁藥物的效果及其指標(biāo)更具有參考性。常用的大鼠品系主要有Sprague Dawley(SD)大鼠[13]、Wistar大鼠[14]、Wistar Kyoto(WKY)大鼠[15-16],Flinder Resistant Line(FSL)大鼠[17]、Fawn-Hooded(FH)大鼠[18]。

1.2 模型制備方法

應(yīng)激作為人類(lèi)抑郁癥發(fā)病的主要原因之一,且通過(guò)人為手段給予動(dòng)物不同的應(yīng)激因素來(lái)制備的抑郁癥動(dòng)物模型能有效地被臨床抗抑郁藥物所緩解,故應(yīng)激造模是目前最常用的方法之一,其中包括行為絕望模型[19-20]、習(xí)得性無(wú)助模型[21]、社會(huì)應(yīng)激模型[22-23]、慢性不可預(yù)知溫和性模型等。慢性不可預(yù)知溫和性應(yīng)激(chronic unpredictable mild stress, CUMS)是應(yīng)激模型中最為常用的一種,通過(guò)每日不定時(shí)給予動(dòng)物不同的較溫和的刺激因子,一般是兩種以?xún)?nèi),連續(xù)2 d不重復(fù),從而對(duì)動(dòng)物造成長(zhǎng)時(shí)間穩(wěn)定的應(yīng)激壓力,引起實(shí)驗(yàn)動(dòng)物類(lèi)抑郁癥相關(guān)行為的出現(xiàn)[24]。該造模方法有效地避免了單一應(yīng)激可能會(huì)引起動(dòng)物的適應(yīng)性的問(wèn)題,同時(shí)具備高度有效性,所以可靠性較強(qiáng)[25],是一種較為廣泛使用的抑郁癥造模方法。

除了應(yīng)激造模外,還有手術(shù)造模、藥物誘導(dǎo)造模、遺傳造模等方式。手術(shù)造模穩(wěn)定性高、且無(wú)藥物交互影響,但模型制備難度高,不同動(dòng)物操作不一,而且難以保證實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的操作一致性。藥物誘導(dǎo)模型是針對(duì)目前廣泛認(rèn)可的抑郁癥發(fā)病機(jī)制,通過(guò)藥物的方式去誘導(dǎo)抑郁癥的發(fā)生[26-27],主要用于篩選專(zhuān)一性靶點(diǎn)的抗抑郁藥物。但以藥物誘導(dǎo)的抑郁癥與人類(lèi)抑郁癥的發(fā)病機(jī)制有一定的差異,因此該造模方式受到一定的使用限制[28]。遺傳造模是通過(guò)近代雜交或者基因手段去構(gòu)建抑郁癥動(dòng)物模型。有研究表明,抑郁癥有明顯的家族易感性,且與部分基因存在關(guān)聯(lián)[29],但是通過(guò)對(duì)單一基因或多個(gè)基因位點(diǎn)執(zhí)行基因敲除等手段構(gòu)建的抑郁癥動(dòng)物模型尚不穩(wěn)定,且存在重復(fù)性不高、造價(jià)昂貴等問(wèn)題,所以一般較少使用。

2 病證結(jié)合動(dòng)物模型進(jìn)展

抑郁癥,屬于傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)里的“郁證”范疇?，F(xiàn)代不同的醫(yī)家在繼承前人的知識(shí)下對(duì)抑郁癥又有了不同的理解與闡述。有醫(yī)家認(rèn)為肝主疏泄,對(duì)情志有重要的調(diào)節(jié)作用,故情志內(nèi)傷以致肝氣郁結(jié),肝的生理特性受到影響,則發(fā)為郁證[30]。而肝、脾二者各為木土,根據(jù)五行相生相克,肝氣郁結(jié),易木旺乘土,故脾亦失健運(yùn),此理論是“見(jiàn)肝之病,知肝傳脾”思想重要體現(xiàn)[31],所以臨床上既有肝氣郁結(jié)證型,也有肝郁脾虛證型病人。同時(shí)有醫(yī)家在臨床上對(duì)抑郁癥患者進(jìn)行觀(guān)察,發(fā)現(xiàn)其常伴隨神疲乏力,反應(yīng)遲鈍,憂(yōu)愁多思等心神失養(yǎng),心神不振癥狀,從而提出陽(yáng)氣抑竭、神頹志衰也是抑郁癥的病機(jī)之一[32]。還有醫(yī)家主張腎主精,肝藏血,而精血同源,肝腎藏精血以充養(yǎng)腦髓,只有精血充足,腦髓得以充盈,人的精神活動(dòng)得以正常維持[33]。若肝腎的生理功能失調(diào),也容易發(fā)生抑郁癥?？偠灾?基于傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中的“整體觀(guān)念”,不同臟腑病變都有可能導(dǎo)致抑郁癥的發(fā)生。臨床上主要包括了這幾種證型:肝氣郁滯、肝郁脾虛、肝腎陰虛等[34]。

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)是中醫(yī)藥與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)接軌的重要橋梁,所以構(gòu)建適合于中醫(yī)藥研究的動(dòng)物模型是重中之重。以傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的角度看來(lái),一個(gè)疾病的發(fā)生不是單一的病因起作用,而是綜合性的病因與機(jī)體內(nèi)在因素相互作用,最終呈現(xiàn)出的一個(gè)病理狀態(tài)[35]。很明顯,單純地構(gòu)建疾病動(dòng)物模型不能滿(mǎn)足中醫(yī)學(xué)概念中的“整體觀(guān)念”以及“辨證論治”。因此在制備單一的抑郁癥動(dòng)物模型基礎(chǔ)上,結(jié)合證候模型來(lái)模擬人類(lèi)抑郁癥發(fā)病以及其證型特點(diǎn),以構(gòu)建病證結(jié)合抑郁癥動(dòng)物模型運(yùn)用于中醫(yī)藥基礎(chǔ)研究[36]。

2.1 肝郁氣滯證郁證動(dòng)物模型

目前肝郁氣滯證型抑郁癥動(dòng)物模型的具體制備方式主要是CUMS造模和慢性束縛性應(yīng)激(chronic restraint stress,CRS)造模。有學(xué)者基于傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中“肝屬木,主疏泄,喜條達(dá)而惡抑郁”的理論,認(rèn)為肝郁氣滯模型造模的關(guān)鍵應(yīng)是造成“郁怒”,故采用慢性束縛性應(yīng)激造模來(lái)構(gòu)建肝郁氣滯證型抑郁癥動(dòng)物模型[37]。通過(guò)將小鼠被困于自制的束縛管中,只有四肢能進(jìn)行微小的動(dòng)作,且隨著小鼠體重的增加,體積增大,造模小鼠全身被限制于狹小空間內(nèi),使其郁怒,從而構(gòu)建肝郁氣滯證型抑郁癥動(dòng)物模型。其動(dòng)物模型在符合抑郁癥相關(guān)行為學(xué)改變的前提下,與同實(shí)驗(yàn)的肝郁脾虛證型抑郁癥動(dòng)物模型相比,曠場(chǎng)自我活動(dòng)次數(shù)明顯要少,符合肝郁氣滯證表現(xiàn)。而運(yùn)用CUMS構(gòu)建肝郁氣滯型抑郁癥小鼠,同樣是通過(guò)“郁怒”病因來(lái)誘發(fā)肝的疏泄失常,氣機(jī)不暢,以致肝郁氣滯證型郁證的發(fā)病[38]。造模成功后,小鼠蔗糖水?dāng)z取量減少, 表現(xiàn)了對(duì)獎(jiǎng)賞的不敏感,同時(shí)還有體重增加速度減緩,內(nèi)分泌系統(tǒng)活性異常等一系列表現(xiàn),符合臨床上抑郁癥患者的表現(xiàn)。而在此動(dòng)物模型上使用具有疏肝理氣作用的逍遙散,能明顯減輕甚至消除其抑郁癥癥狀,以證明該肝郁氣滯病證結(jié)合模型的成功[39]?，F(xiàn)有研究者通過(guò)使用疏肝、疏肝健脾、健脾三種不同主要功效的代表中藥復(fù)方湯劑比較不同治則對(duì)肝郁氣滯證抑郁癥動(dòng)物模型海馬中神經(jīng)遞質(zhì)相關(guān)表達(dá)基因的不同干預(yù)作用[40]。結(jié)果顯示疏肝和疏肝健脾兩種代表方劑對(duì)該動(dòng)物模型都有著明顯的抗抑郁作用,而健脾組的中藥復(fù)方則無(wú)明顯作用。這不僅說(shuō)明了在肝郁氣滯證型抑郁癥的治療中,疏肝理氣是其最重要的治則,可對(duì)大鼠海馬的神經(jīng)遞質(zhì)受體基因表達(dá)有促進(jìn)作用,同時(shí)也驗(yàn)證了該證候動(dòng)物模型的成功制備,具備證候的獨(dú)特性。

2.2 肝郁脾虛證郁證動(dòng)物模型

目前針對(duì)中醫(yī)藥研究實(shí)驗(yàn)所使用的肝郁脾虛證型抑郁癥動(dòng)物模型基本為CRS動(dòng)物模型[41]或CUMS動(dòng)物模型。近來(lái)有學(xué)者基于“苦寒?dāng)∥?而胃與脾相表里”的中醫(yī)學(xué)理論,結(jié)合CUMS造模方法和大黃水溶液灌胃構(gòu)建肝郁脾虛證型抑郁癥動(dòng)物模型。其模型小鼠表現(xiàn)活動(dòng)速度減緩、活躍度下降、蔗糖偏好指數(shù)降低、懸尾不動(dòng)時(shí)間和強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間延長(zhǎng)等典型抑郁癥狀;同時(shí)還出現(xiàn)進(jìn)食欲望下降、體重增長(zhǎng)緩慢、大便稀溏的肝郁脾虛癥狀,說(shuō)明該小鼠模型同時(shí)具備抑郁癥表現(xiàn)和肝郁脾虛證的相關(guān)表現(xiàn)[42]。也有研究者根據(jù)“味過(guò)于酸,肝氣以津,脾氣乃絕”的中醫(yī)理論,在CRS制備的肝郁氣滯證型抑郁癥動(dòng)物模型基礎(chǔ)上,同時(shí)全天給動(dòng)物飲用5%食醋溶液[37]。該模型相對(duì)于單純的CRS模型在曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中爬行格數(shù)明顯降低,強(qiáng)迫性游泳不動(dòng)時(shí)間延長(zhǎng),可能與“脾主肉”有關(guān),脾虛則肌肉萎縮,進(jìn)而少動(dòng),這對(duì)病證結(jié)合動(dòng)物模型制備的探索和評(píng)估證候模型有一定啟示作用。

有研究表明BALB/c小鼠在不同的抑郁癥造模方式下均表現(xiàn)出明顯且穩(wěn)定的氣虛證候易感性體質(zhì),主要表現(xiàn)為前爪抓力下降,負(fù)重游泳時(shí)間下降和掌紋血色度下降等[43]。同時(shí)該小鼠的肝郁脾虛證郁證癥狀能被健脾益氣代表中醫(yī)方劑四君子湯所逆轉(zhuǎn),小鼠肌肉和海馬中PKA-CREB信號(hào)表達(dá)均明顯增加[44]。此說(shuō)明了該品系所制備的抑郁癥動(dòng)物模型符合氣虛證候,同時(shí)還提示了四君子湯改善氣虛證候治療抑郁癥的機(jī)制可能與PKA-CREB信號(hào)通路有關(guān),為探究抑郁癥發(fā)病機(jī)制提供新的思路。接著再有進(jìn)一步的研究,以理氣為主要功效的中藥復(fù)方越鞠丸治療BALB/c小鼠的氣虛證抑郁癥并無(wú)四君子湯般顯著。雖然對(duì)小鼠抑郁癥同樣有治療作用,也提高了肌肉和海馬中PKA-CREB信號(hào)表達(dá),但其氣虛證癥狀并無(wú)改善[45]。此說(shuō)明了越鞠丸也同樣可能是通過(guò)調(diào)節(jié)PKA-CREB信號(hào)通路來(lái)達(dá)到治療抑郁癥的效果。通過(guò)構(gòu)建不同的病證結(jié)合抑郁癥動(dòng)物模型,以不同的中藥復(fù)方湯劑去探索其共同點(diǎn),也許可以為抑郁癥的發(fā)病基礎(chǔ)機(jī)制提供一種新思路,同時(shí)其中不同的點(diǎn)也許可以為中醫(yī)藥不同證型的區(qū)別提供現(xiàn)代理論基礎(chǔ),也是為抑郁癥患者個(gè)體間的差異提供更好的治療方案以及研發(fā)更好的對(duì)癥藥物。

2.3 肝腎陰虛證郁證動(dòng)物模型

有研究通過(guò)對(duì)比CUMS結(jié)合溫燥藥灌胃、CUMS結(jié)合懸尾以及CUMS結(jié)合甲狀腺激素注射此3種肝腎陰虛證抑郁癥動(dòng)物模型制備方法,以尋求一種較符合肝腎陰虛證的模型[46]。從結(jié)果來(lái)看,CUMS結(jié)合甲狀腺激素注射誘導(dǎo)的肝腎陰虛證抑郁癥模型大鼠處于一種陰虛型亢奮的狀態(tài);其表現(xiàn)為易驚怒、大便干燥、毛濕無(wú)光澤、捉拿時(shí)反應(yīng)劇烈,因而明顯較其他兩種制備方法更具有代表性[47]。但通過(guò)化學(xué)藥物誘導(dǎo)的中醫(yī)證候相關(guān)表現(xiàn)存在一個(gè)共同的缺點(diǎn),即由藥物誘導(dǎo)所表現(xiàn)出來(lái)的癥狀與中醫(yī)理論中的病因病機(jī)不符。有研究表示,以滋腎陰為主要功效的憂(yōu)慮康液不僅能對(duì)陰虛證抑郁癥小鼠的行為學(xué)有逆轉(zhuǎn)作用,同時(shí)能修復(fù)腎、腎上腺、足跖汗腺細(xì)胞形態(tài)學(xué)損傷,以及降低血漿環(huán)腺苷酸(cAMP)含量,甚至高劑量的憂(yōu)慮康液比滋補(bǔ)腎陰的代表方六味地黃丸有著更好的治療效果。也有研究表示,以滋補(bǔ)肝腎為主要功效的滋腎益腦方在由CUMS結(jié)合甲狀腺激素注射制備的肝腎陰虛證抑郁癥小鼠身上,可對(duì)抗由慢性應(yīng)激引起的行為學(xué)變化,同時(shí)還可使海馬區(qū)的BDNF、TrKB基因表達(dá)明顯升高[48-49]。這些研究都不單單說(shuō)明了該中藥復(fù)方湯劑的臨床意義和其治療藥理機(jī)制,同時(shí)也為探索抑郁癥的發(fā)病機(jī)制提供了新的思路。

2.4 其他證型

除了上述證型,傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中的郁證還有其他證型,如心脾兩虛、氣郁化火、陽(yáng)虛[50]等。有研究指出通過(guò)利血平注射造模的抑郁癥小鼠出現(xiàn)體溫下降以及行動(dòng)能力下降等陽(yáng)虛癥狀,因此可把該模型用作陽(yáng)虛證抑郁癥的研究中。而臨床上針對(duì)心脾兩虛證和氣郁化火證兩種郁證的復(fù)方中藥湯劑,即歸脾湯[51]和丹梔逍遙散[52]在抑郁癥實(shí)驗(yàn)中對(duì)CUMS抑郁癥動(dòng)物模型都有明顯的抗抑郁效果,故其藥理機(jī)制還需要進(jìn)一步的探索。在抑郁癥臨床治療上中醫(yī)藥治療具有很高的研究?jī)r(jià)值。

3 小結(jié)與展望

目前抑郁癥臨床西藥治療方案,存在其毒副作用明顯,停藥后容易復(fù)發(fā)等問(wèn)題,而以祖國(guó)醫(yī)學(xué)為主要治療手段的臨床治療中明顯取得相對(duì)不錯(cuò)的療效。所以以祖國(guó)醫(yī)學(xué)的角度出發(fā),探索以中醫(yī)藥治療為主的臨床治療方案,以中醫(yī)藥理論的視角去探索抑郁癥的發(fā)病機(jī)制,也許能夠成為抑郁癥發(fā)病機(jī)制的突破點(diǎn)。

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)是所有醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究的基石,但目前中醫(yī)藥基礎(chǔ)研究的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)尚存在著問(wèn)題。目前最適用于中醫(yī)藥基礎(chǔ)研究的動(dòng)物模型是病證結(jié)合動(dòng)物模型,其優(yōu)點(diǎn)主要有:(1)其是根據(jù)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的病理病因理論復(fù)制出來(lái)的疾病模型,所以符合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)理論對(duì)動(dòng)物模型的要求;(2)其同樣基于中醫(yī)整體觀(guān)念及辨證論治等中醫(yī)藥特色傳統(tǒng)理論,把人類(lèi)疾病某特定階段所表現(xiàn)出來(lái)的癥狀在動(dòng)物身上加以復(fù)制,使其具有中醫(yī)藥特色;(3)其同時(shí)符合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)與傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的相關(guān)理論,所以對(duì)于中醫(yī)藥基礎(chǔ)研究來(lái)說(shuō),病證結(jié)合動(dòng)物模型是中醫(yī)藥研究與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的結(jié)合點(diǎn)。但缺點(diǎn)同樣是明顯的:(1)目前評(píng)估證候動(dòng)物模型成功與否的標(biāo)準(zhǔn)尚未能從定性向定量轉(zhuǎn)變,即使有學(xué)者提出相關(guān)的定量標(biāo)準(zhǔn)也沒(méi)有得到大多數(shù)認(rèn)可;(2)難以用現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的生化指標(biāo)或者病理標(biāo)準(zhǔn)去評(píng)估證候動(dòng)物模型是否成功;(3)病證結(jié)合動(dòng)物模型的制備尚未有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn),都是依據(jù)各自對(duì)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的理解來(lái)設(shè)置相關(guān)的應(yīng)激因素,通常是單一因素或多個(gè)因素來(lái)制備,這與人類(lèi)生活中由綜合性病因引起疾病的發(fā)生有一定的差別;(4)與單純的疾病動(dòng)物模型制備和證候動(dòng)物模型制備相比,病證結(jié)合模型的制備都要困難,且重復(fù)性較低,不利推廣。目前對(duì)于病證結(jié)合動(dòng)物模型的評(píng)估大多采取以方測(cè)證或者以藥測(cè)證的方法評(píng)估動(dòng)物模型證候方面的表現(xiàn),同時(shí)用現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的行為表現(xiàn)學(xué)、生理病理學(xué)表現(xiàn)去評(píng)估動(dòng)物模型疾病方面的表現(xiàn)。病證結(jié)合動(dòng)物模型作為一種現(xiàn)代醫(yī)學(xué)知識(shí)理論和傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)知識(shí)理論相結(jié)合的產(chǎn)物,對(duì)中醫(yī)藥基礎(chǔ)研究有著不可或缺的作用,雖然目前問(wèn)題也同樣存在著許多,但今后會(huì)在不斷的發(fā)展下變得完善,為中醫(yī)藥理論和現(xiàn)代醫(yī)學(xué)理論相融合作出巨大的貢獻(xiàn)。