李 紅 范增慧 譚穎穎△

（1.陜西中醫(yī)藥大學(xué)，陜西 咸陽(yáng) 712046；2.空軍軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院，陜西 西安 710038）

心肌缺血是由于冠狀動(dòng)脈硬化所致的一支或多支血管狹窄或冠狀動(dòng)脈痙攣引起的血管不完全性閉塞，導(dǎo)致所供血部位的心肌暫時(shí)缺血（氧）［1］。冠狀動(dòng)脈粥樣硬化是引起心肌缺血最主要的病因［2-3］。防治心肌缺血，研究有效的治療方法已成為心血管疾病臨床及實(shí)驗(yàn)研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。心肌缺血常見的心前區(qū)疼痛癥狀與中醫(yī)中“胸痹”“真心痛”相對(duì)應(yīng)，胸痹為本虛標(biāo)實(shí)之證，虛性病理因素以氣虛、陰虛為著，實(shí)性病理因素主要為血瘀、痰濁、氣滯、寒凝為著［4］。臨床中，中西醫(yī)結(jié)合最成功的經(jīng)驗(yàn)是“病與證”的方法，即中醫(yī)的證與西醫(yī)的病相結(jié)合［5］，全面分析疾病發(fā)生發(fā)展，將中、西醫(yī)兩者治療優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)，以達(dá)到最佳治療效果。對(duì)應(yīng)在實(shí)驗(yàn)中，構(gòu)建兼有中西醫(yī)特色的病證結(jié)合動(dòng)物模型則具有了重要意義，既能體現(xiàn)西醫(yī)的病理特點(diǎn)，又具有中醫(yī)的證候表現(xiàn)，在中醫(yī)臨床與基礎(chǔ)之間架起橋梁，是中醫(yī)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型發(fā)展的新方向［6］。本文將實(shí)驗(yàn)中常使用的制備心肌缺血模型的方法與建立符合中醫(yī)證候特點(diǎn)的模型制備方法相結(jié)合，歸納總結(jié)出具有心肌缺血病證結(jié)合特點(diǎn)的動(dòng)物模型。

1 瘀血阻滯心脈

1.1 模型制備 心血瘀阻證多由于氣血運(yùn)行不暢，血滯成瘀，閉阻心脈而成，臨床上以胸部刺痛，固定不移，入夜尤甚，舌質(zhì)紫黯，脈沉弦為主要表現(xiàn)［7］。

牟菲等［8］在建立胸痹心血瘀阻證大鼠模型時(shí)，采用冠狀動(dòng)脈結(jié)扎術(shù)，并將血液流變學(xué)檢測(cè)結(jié)果結(jié)合血液“黏、聚、凝、稠”的改變作為心血瘀阻證的客觀指標(biāo)。冠狀動(dòng)脈結(jié)扎法即在胸骨左緣第3～5肋間開胸，結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支，此法是最常用的復(fù)制急性心肌缺血的方法之一。孫維娜等［9］給中華小豬行冠脈造影及鈍緣支明膠海綿封堵術(shù)，導(dǎo)絲及動(dòng)脈鞘管由右側(cè)股動(dòng)脈處穿刺送入，最終將Runthrough微導(dǎo)管遠(yuǎn)端送入OM支近端，推入明膠海綿混懸液，以中斷OM支遠(yuǎn)端血流，用此法模擬急性心肌缺血狀態(tài)。冠狀動(dòng)脈結(jié)扎術(shù)與明膠海綿封堵術(shù)兩者原理類似，意在直接阻斷心臟冠脈血流，造成心肌缺血缺氧。

1.2 模型評(píng)價(jià) 中醫(yī)理論中提到“瘀者，積血也”，當(dāng)冠狀動(dòng)脈管腔狹窄或阻塞，血流量減少，即為血運(yùn)不暢，血運(yùn)不暢屬“瘀”，為血瘀證［10］。按照上述方法所制備的動(dòng)物模型具有符合血瘀證的一般表現(xiàn)，即精神萎靡，毛發(fā)失去光澤，大鼠鼻尖、口唇、掌心、舌面均發(fā)生不同程度的變紫變暗［11］，血液“黏、聚、凝、稠”的改變也符合血瘀證的血液特點(diǎn)。但此法需行開胸手術(shù)，創(chuàng)傷性大，死亡率相對(duì)較高。另外，此法造模是直接阻斷血液的機(jī)械流通，但中醫(yī)所表述的心血瘀阻證是由于久病體虛，或思慮勞心過(guò)度，以致心之陽(yáng)氣不足，無(wú)力推動(dòng)血液運(yùn)行所致，相對(duì)比而言，難以準(zhǔn)確把握造成心血瘀阻證的病因病機(jī)。

2 痰濁阻遏心氣

2.1 模型制備 痰濁閉阻多由于脾胃損傷，運(yùn)化失健，聚濕生痰，上犯心胸，阻遏心陽(yáng)，使氣機(jī)不暢，心脈閉阻所致。臨床上以胸悶痛，痰多氣短，肢體困重，頭暈嗜睡，倦怠乏力，大便黏膩不爽，舌苔厚膩，脈滑為主要表現(xiàn)［7］。

杜瑩等［12］在制備脾虛痰濁動(dòng)脈粥樣硬化疾病模型時(shí)選用巴馬小型豬為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，采用高脂飼料結(jié)合冠脈機(jī)械損傷與跑步過(guò)勞的多因素復(fù)合方法，高脂飼料持續(xù)喂養(yǎng)，第2周時(shí)給予模型組行冠狀動(dòng)脈機(jī)械損傷術(shù)，第6周開始使小型豬每日過(guò)勞跑步，至第24周造模結(jié)束。張成哲等［13］在研究益氣健脾方治療冠心病的作用機(jī)制時(shí)，給巴馬小型豬以高脂飼料喂養(yǎng)造模，并于第2周行冠脈結(jié)扎術(shù)以復(fù)制心肌缺血模型，在小型豬術(shù)后恢復(fù)后，給予隔日力竭游泳措施進(jìn)行干預(yù)，連續(xù)10周。造模結(jié)束后小型豬出現(xiàn)精神萎靡、神疲、便溏、納差等表現(xiàn)，并通過(guò)電鏡及光鏡下觀察小型豬心肌組織，發(fā)現(xiàn)心肌細(xì)胞有壞死、水腫等表現(xiàn)，符合心肌缺血病理表現(xiàn)。

2.2 模型評(píng)價(jià) 以高脂飼料模擬肥甘厚膩之物，過(guò)食油膩之品傷及脾胃，運(yùn)化失司，致使體內(nèi)膏脂積存過(guò)多，形成痰濁，使微血管阻塞，誘發(fā)心肌缺血?！皠趧t氣耗”“唯勞倦最能傷脾”，以跑步或游泳過(guò)勞模擬脾虛模型，給予痰濁形成的病理基礎(chǔ)，且有研究表明，過(guò)勞應(yīng)激反應(yīng)會(huì)損傷心肌細(xì)胞，影響心臟功能［14］。在痰濁閉阻模型制備中，絕大部分需要采用高脂飼料，高脂飼料配方中多有含量較高的豬油，適口性一般，動(dòng)物在長(zhǎng)期食用高脂飼料后易出現(xiàn)厭食情況，影響造模結(jié)果，且定制高脂飼料價(jià)格昂貴，對(duì)于經(jīng)費(fèi)要求較高。

3 氣機(jī)壅滯心胸

3.1 模型制備 氣滯心胸證多由于情志不暢，肝失疏泄，氣機(jī)郁滯所致，臨床上以心胸滿悶，陣陣隱痛，痛有定處，時(shí)欲太息，遇情志不遂時(shí)容易誘發(fā)或加重，苔薄，脈細(xì)弦為主要臨床表現(xiàn)［7］。

賴瀟筱［15］根據(jù)腎上腺素增多與焦慮不安、煩躁、暴怒等情緒密切相關(guān)，選取健康雄性SD大白鼠，多次腎上腺素皮下注射，以此誘發(fā)焦慮狀態(tài)，模擬情志變化，再結(jié)合冰水刺激。后經(jīng)檢測(cè)血流動(dòng)力學(xué)提示平均血流量明顯下降，血液流變學(xué)提示紅細(xì)胞聚集指數(shù)明顯增加、全血黏度明顯增高，血清檢測(cè)指標(biāo)CK-MB、LDH、NO含量顯著增高。符合“血瘀證”模型表現(xiàn)。除了使用藥物造模，也有研究者采用外界刺激方法，觸怒動(dòng)物，使動(dòng)物長(zhǎng)期保持暴怒或驚恐狀態(tài)，以達(dá)到肝郁氣滯，進(jìn)而演化為氣滯血瘀。許穎智等［16］利用不可預(yù)知的多種應(yīng)激隨機(jī)組合方法刺激大鼠，如24 h晝夜失調(diào)刺激、黑暗時(shí)燈光閃爍刺激、冰水站立刺激、夾尾激惹刺激等，致使大鼠情志異常，并于2周后行冠狀動(dòng)脈結(jié)扎術(shù)。造模結(jié)束后發(fā)現(xiàn)模型組大鼠情緒過(guò)激易怒，攻擊性強(qiáng)。實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)示血小板聚集率升高，心肌組織病理學(xué)結(jié)果顯示大面積梗死區(qū)域。郭文鶴等［17］運(yùn)用“寒凝則氣滯”這一理論，復(fù)制寒、氣、血、瘀相互影響、相互作用的病理狀態(tài)，從而構(gòu)建出冠狀動(dòng)脈粥樣硬化氣滯血瘀證病證結(jié)合動(dòng)物模型。

3.2 模型評(píng)價(jià) 近年來(lái)，研究者多從動(dòng)物情志方面入手，給予藥物注射，使體內(nèi)血流直接呈現(xiàn)出過(guò)激情緒后的狀態(tài)，或是給予外界刺激，通過(guò)影響動(dòng)物情志，刺激機(jī)體內(nèi)環(huán)境改變，然后根據(jù)西醫(yī)檢測(cè)指標(biāo)和中醫(yī)證候特點(diǎn)分析驗(yàn)證造模是否成功。也有研究者著重制造具有病理因素的環(huán)境（通常為寒冷環(huán)境），依據(jù)中醫(yī)理論中疾病發(fā)展的規(guī)律及病理因素間的相互作用，最終轉(zhuǎn)化為氣滯血瘀證。

4 陰寒凝滯血脈

4.1 模型制備 寒凝血脈證多由于素體陽(yáng)虛，感受寒邪，陰寒凝滯，閉阻心脈所致。臨床上以心痛如絞，心痛徹背，遇冷疼痛加重，伴手足不溫，心悸氣短，苔白脈緊為主要特點(diǎn)［7］。

王朋等［18］選擇單一藥物因素造模的方法，先制造西醫(yī)疾病模型，不施加人為干預(yù)，再依據(jù)對(duì)動(dòng)物模型的觀察以及實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果，判定動(dòng)物模型的中醫(yī)屬性。他們給予SD大鼠股靜脈注射垂體后葉素6 U/kg（質(zhì)量濃度2 U/mL），5 s恒速注射完畢，注射后30 min內(nèi)通過(guò)觀察大鼠一般情況、體征、心電圖、微靜脈管徑及紅細(xì)胞流速以及血漿血栓素B2（TXB2）、6-酮-前列環(huán)素F1α（6-Keto-PGF1α），發(fā)現(xiàn)大鼠符合冠脈痙攣性心絞痛動(dòng)物模型指標(biāo)，且其一般表現(xiàn)與體征符合中醫(yī)寒凝血脈證的病證特點(diǎn)。由此他們推斷垂體后葉素大劑量造模具有明顯的寒邪致病特點(diǎn)，采用該法可成功建立大鼠冠心病心絞痛寒凝血瘀證模型。趙姍姍等［19］在優(yōu)化寒凝血瘀證動(dòng)物模型造模方法時(shí)，采用全身冷凍法造模，將SD大鼠每日放入-20℃低溫冰柜中受凍1 h，并得出結(jié)論大鼠連續(xù)冷凍14 d為最優(yōu)時(shí)間，造模效果最佳。楊延澤等［20］在制備寒凝血瘀證大鼠模型時(shí)采用藥物加寒凝法造模，模型組大鼠皮下注射0.1%鹽酸腎上腺素注射液0.8 mL/kg，再置于0～2℃冰水中游泳4 min，2 h后再次皮下注射等量0.1%鹽酸腎上腺素，8 d后血液流變學(xué)提示全血黏度明顯增高，心臟血流動(dòng)力學(xué)提示心率增快，左心室收縮壓顯著降低。另外血小板聚集增強(qiáng)、血細(xì)胞比容顯著增高，驗(yàn)證造模成功。李馳坤等［21］在制備冠心病心肌缺血寒凝血瘀證大鼠模型時(shí)采用藥物加寒凝法造模，將模型組大鼠每日置于-15℃低溫冰柜1 h，連續(xù)6周，并在最后3 d連續(xù)每日腹腔注射垂體后葉素20 U/kg，造模結(jié)束后監(jiān)測(cè)大鼠肛溫明顯降低，心電圖J點(diǎn)位移明顯增加，TXB2升高、6-Keto-PGF1α下降，證明該造模方法可行。

4.2 模型評(píng)價(jià) 研究者們?cè)谥苽浜鲎C模型中，利用“寒性收引，寒邪易傷陽(yáng)氣”的中醫(yī)理論，使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物接受長(zhǎng)期的外界低溫環(huán)境刺激，以致血脈運(yùn)行不暢通，進(jìn)而出現(xiàn)瘀滯。除去寒戰(zhàn)、打噴嚏、流涕、唇爪耳尾色青紫、大便濕爛等體征的改變，結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)檢測(cè)手段，以心電圖示J點(diǎn)（QRS波群的終點(diǎn)與ST段交接處）的位移顯著變化［18］和紅細(xì)胞變形指數(shù)、血漿黏度、凝血功能測(cè)定以及TSH、ET、NO作為寒凝血瘀證模型成功復(fù)制的評(píng)價(jià)指標(biāo)［19-20］。

但有研究者發(fā)現(xiàn)若采用低溫環(huán)境刺激法（將大鼠每日放在-20℃低溫冰柜中受凍1 h），在造模7 d時(shí)，ET、NO以及血流變指標(biāo)有明顯變化，而20 d后這些檢測(cè)結(jié)果卻趨于正常［19］。由此推斷在受到規(guī)律的長(zhǎng)期刺激后，大鼠對(duì)于寒冷環(huán)境產(chǎn)生適應(yīng)性反應(yīng)，故認(rèn)為以此等方法造模只能使血液暫時(shí)性的表現(xiàn)為黏、凝狀態(tài)，并不能完全復(fù)制中醫(yī)所述的“血瘀證”。

5 心氣陰血兩虛

5.1 模型制備 氣陰兩虛證是由心氣不足，陰血虧耗，血行瘀滯所致。臨床上以胸悶隱痛，時(shí)作時(shí)止，心悸氣短，動(dòng)則益甚，倦怠懶言，聲息低微，易汗出，頭暈?zāi)垦?，遇勞則甚，舌偏紅或有齒印，苔薄白，脈細(xì)弱無(wú)力，或結(jié)代為主要特點(diǎn)［7］。

莊先飛等［22］采用慢性間歇性缺氧復(fù)合異丙腎上腺素的方法建立氣陰兩虛心血管疾病模型，將小鼠放入氧分壓為7%～8%的低壓氧儀中持續(xù)缺氧20 min，連續(xù)14 d，第15日于尾靜脈注射異丙腎上腺素5 mg/kg，經(jīng)檢測(cè)模型小鼠心電圖T波抬高，心臟B超示左心室射血分?jǐn)?shù)顯著升高，血清中CK-MB以及hs-CPR明顯升高，也出現(xiàn)了形體消瘦，食欲不振，體倦乏力，煩躁等符合氣陰兩虛證特點(diǎn)的表現(xiàn)。馬慕秾等［23］建立氣陰兩虛模型時(shí)把握中醫(yī)理論中傷陰耗氣的病理因素，采用食燥熱之品、限食加負(fù)重游泳三因素結(jié)合法，給予燥熱藥物灌胃，減少飲食為正常量的30%，且每日間強(qiáng)迫大鼠負(fù)重游泳，強(qiáng)度以大鼠力竭為標(biāo)準(zhǔn)，6周后模型建立成功。鐘森杰等［24］則在建立心氣陰兩虛模型時(shí)，采用“以方測(cè)證”法，首先建立心衰大鼠模型，再將大鼠分組給予藥效完全相反的藥物，給藥周期結(jié)束后，對(duì)比各組大鼠檢測(cè)結(jié)果，發(fā)現(xiàn)服用補(bǔ)益氣陰藥物組大鼠治療效果顯著，即判定所造模型屬氣陰兩虛模型。

5.2 模型評(píng)價(jià) 氣虛則無(wú)以行血，陰虛則脈絡(luò)不利。以大鼠每日高強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)給予“體勞”刺激，以每日被迫游泳，剝奪睡眠時(shí)間給予“神勞”刺激，基于“勞則氣耗”“過(guò)勞傷陰”這一理論，建立氣陰兩虛模型［25-26］。另外大鼠長(zhǎng)期“熬夜”，以致陰陽(yáng)氣血失和，營(yíng)衛(wèi)失調(diào)，會(huì)加重了氣陰兩虛表現(xiàn)［27］。但在既往研究者造模過(guò)程中，不論是給予實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模擬缺氧環(huán)境還是每日強(qiáng)制過(guò)勞運(yùn)動(dòng)，都重點(diǎn)突出了導(dǎo)致氣虛的致病因素，未能明確呈現(xiàn)模擬陰虛的應(yīng)激源。

6 討 論

總結(jié)近年來(lái)構(gòu)建病證結(jié)合動(dòng)物模型的方法，大致分有4類：第1類，先建立現(xiàn)代醫(yī)學(xué)概念中的疾病，在疾病的基礎(chǔ)上復(fù)制符合中醫(yī)特點(diǎn)的證候模型。第2類，先根據(jù)證候的形成特點(diǎn)復(fù)制出證候模型，再依據(jù)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)病理概念制作疾病模型［28］。第3類，確定某種方法制備現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的疾病模型，不加以人為干預(yù)，觀察該模型的一般表現(xiàn)、行為特點(diǎn)以及實(shí)驗(yàn)室檢查等，判定該模型所屬證候類型。第4類，“以方測(cè)證”，先建立疾病模型，再選用臨床價(jià)值較高的經(jīng)方，分析服藥后的治療效果，確定是否方證相對(duì)，以判斷模型所屬證型［29］，或建立證候模型后，選用功效不同甚至相悖的經(jīng)方分組治療，對(duì)比各組治療結(jié)果，判斷模型建立是否成功［30-31］。其中前兩類造模方法是目前實(shí)驗(yàn)研究過(guò)程中最常用的方法，以期達(dá)到疾病共性規(guī)律與個(gè)體個(gè)性特征的有機(jī)結(jié)合［28］。

中醫(yī)證候動(dòng)物模型作為中醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)研究的主要載體，其造模水平高低將直接影響到中醫(yī)藥現(xiàn)代化的進(jìn)程［32］，但是建立病證結(jié)合動(dòng)物模型迄今為止還未成熟，現(xiàn)在所用的造模方法都有一定局限性。1）缺失中醫(yī)的主導(dǎo)性。構(gòu)建具有中醫(yī)證候特色的動(dòng)物模型，從本質(zhì)上講就是最大限度還原患者的臨床特征，再給予藥物治療，檢測(cè)中藥方劑對(duì)于某一疾病的治療療效。所以動(dòng)物模型是將中醫(yī)與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)相結(jié)合的橋梁。但目前，在制作動(dòng)物模型過(guò)程中缺失中醫(yī)與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)關(guān)聯(lián)，大部分的造模過(guò)程只能根據(jù)成型的中醫(yī)理論盡可能地去模擬動(dòng)物的飲食或生存環(huán)境，中醫(yī)處于輔助地位，失去了指定疾病發(fā)展方向的主動(dòng)性。2）在選擇實(shí)驗(yàn)對(duì)象時(shí)缺乏統(tǒng)一性。建立同樣的證候模型在不同的實(shí)驗(yàn)中可能選擇了不同的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。不同種屬的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)于各因素的反應(yīng)可能有質(zhì)的不同，即使是同一種屬、不同種系的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物面對(duì)同一刺激產(chǎn)生的反應(yīng)也會(huì)有很大差異［33］。因此在構(gòu)建病證結(jié)合動(dòng)物模型時(shí)，尚不能明確可以排除由實(shí)驗(yàn)對(duì)象的不同所帶來(lái)的結(jié)果差異。3）在制作動(dòng)物模型的手段上缺乏針對(duì)性。在一些造模過(guò)程中，陽(yáng)虛證［34］與寒凝證都采用短時(shí)期的低溫環(huán)境刺激法，而虛、實(shí)病證從中醫(yī)理論的病因病機(jī)角度來(lái)說(shuō)有很大差別，即便隨著病情演變，兩者之間可相互轉(zhuǎn)化，也需要一定的時(shí)間或轉(zhuǎn)化條件，但目前實(shí)驗(yàn)造模周期普遍較短，在造模過(guò)程中沒(méi)有明確的理化標(biāo)準(zhǔn)去判定模型證候建立是否達(dá)到一定的標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)于研究者所認(rèn)為的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在造模后出現(xiàn)的行為改變，如倦怠、萎靡等，只能是研究者根據(jù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的一般表現(xiàn)做出的主觀判定。也有研究者提出將病證結(jié)合動(dòng)物模型的造模結(jié)果用西醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果規(guī)范化統(tǒng)一，如將血液中cAMP/cGMP比值、Na+-K+-ATPase和SOD水平的降低對(duì)應(yīng)于氣陰虛證的指征［35］。4）多因素造模時(shí)缺乏邏輯性。在有些造模過(guò)程中會(huì)采用多因素組合刺激實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，使得干預(yù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的因素過(guò)于復(fù)雜，受控程度變差，不能明確各個(gè)因素之間是否相互影響，亦不能明確各因素對(duì)結(jié)果是否有消極影響，這一點(diǎn)缺乏邏輯性。

構(gòu)建病證結(jié)合動(dòng)物模型現(xiàn)在有了一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，但還沒(méi)有完整的體系，研究者們也處于探索時(shí)期，本文從心肌缺血模型入手，對(duì)近年常用造模方法進(jìn)行綜述，以期對(duì)病證結(jié)合動(dòng)物模型的構(gòu)建有所幫助。