詹有芳 張玨 王鵬

作者單位：200021 上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院檢驗(yàn)科(詹有芳，張玨)；上海市第七人民醫(yī)院檢驗(yàn)科(王鵬)

肝細(xì)胞癌(Hepatocellular carcinoma, HCC)作為原發(fā)性肝癌(Primary hepatocarcinoma, PHC)的主要組織學(xué)類(lèi)型，是全球高發(fā)的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康[1-2]。HCC通常發(fā)病隱匿，初期缺乏特異性臨床表現(xiàn)，但病情進(jìn)展迅速，多數(shù)患者至疾病晚期因各類(lèi)并發(fā)癥就診時(shí)，已失去早期最佳治療機(jī)會(huì)，導(dǎo)致預(yù)后極差[3]。目前，甲胎蛋白(Alpha-fetoprotein, AFP)是臨床上常用的篩查HCC的血清標(biāo)志物，但由于血清AFP水平易受肝炎及其他肝病的影響，導(dǎo)致HCC假陽(yáng)性率和假陰性率仍然很高[4-5]。因此，尋找高靈敏度和高特異度的HCC早期腫瘤標(biāo)志物一直是研究熱點(diǎn)。溶質(zhì)載體家族成員(solute carrier family 7 member 11, SLC7A11)為一種氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，近來(lái)研究表明，SLC7A11在HCC患者中表達(dá)明顯上升[6]。本研究旨在探討血清SLC7A11在早期HCC診斷中的價(jià)值。

資料與方法

一、研究對(duì)象

選取2018年1月—2020年12月上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院收治的HCC患者120例作為研究對(duì)象，其中HCC早期(Ⅰ期和Ⅱ期)和晚期(Ⅲ期和Ⅳ期)患者各60例(參考我國(guó)肝癌分期方案CNLC[7])，另選取同期的60例肝硬化(LC)患者作為對(duì)照組。HCC患者均通過(guò)手術(shù)切除或肝穿刺活組織標(biāo)本進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。HCC診斷標(biāo)準(zhǔn)參考《原發(fā)性肝癌診療規(guī)范(2019年版)》[7]；LC診斷標(biāo)準(zhǔn)參考《肝硬化診治指南》[8]。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理診斷為HCC，或經(jīng)組織學(xué)檢查或門(mén)脈高壓檢測(cè)診斷為L(zhǎng)C，且經(jīng)影像學(xué)檢查排除HCC可能性；②無(wú)其他重大功能障礙。排除標(biāo)準(zhǔn)：①不符合納入標(biāo)準(zhǔn)；②合并有其他惡性腫瘤；③妊娠期或哺乳期女性。所有患者均簽訂知情同意書(shū)并經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)同意。

二、研究方法

詢問(wèn)患者詳細(xì)病史，包括年齡、性別、腫瘤病理分期等相關(guān)參數(shù)。采集研究對(duì)象清晨空腹全血5 mL，分離血清后保存于-80 ℃冰箱待測(cè)。肝臟生化指標(biāo)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶(AST)等采用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定。AFP采用化學(xué)發(fā)光法定量檢測(cè)，按《原發(fā)性肝癌診療規(guī)范(2019年版)》[7]，AFP≥400 ng/mL判定為陽(yáng)性。采用SLC7A11 ELISA檢測(cè)試劑盒檢測(cè)血清SLC7A11水平，檢測(cè)過(guò)程嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)完成，操作步驟如下：(1)分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00 μL，其余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100 μL，37 ℃反應(yīng)120 min；(2)棄去液體，甩干，每孔加生物素標(biāo)記抗體工作液100 μL，37 ℃，60 min；(3)棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次；(4)每孔加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素工作液100 μL，37 ℃，60 min；(5)棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次；(6)依序每孔加底物溶液90 μL，37 ℃避光顯色；(7)依序每孔加終止溶液50 μL，終止反應(yīng)；(8)用酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 26.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)。診斷評(píng)價(jià)采用ROC曲線分析。

結(jié) 果

一、兩組患者一般資料比較

HCC組120例，男75例，女35例，年齡39～92歲，LC組78例，男52例，女26例，年齡35～92歲，兩組性別、年齡、TBil、ALT差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)；HCC組的PT水平低于LC組，而HCC組的Alb水平高于LC組(P<0.01)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。并發(fā)癥發(fā)生及病因差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(表1)。

二、早期HCC患者與晚期HCC和LC患者血清SLC7A11、AFP等指標(biāo)比較

早期HCC患者血清TBil、PT指標(biāo)明顯低于晚期HCC組，Alb則高于晚期HCC組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.01)，而AFP及ALT差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05), 早期HCC患者血清 SLC7A11低于晚期HCC組(P<0.01)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；早期HCC患者血清TBil、PT明顯低于LC組，SLC7A11、AFP、Alb則明顯高于LC組(P均<0.01)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，晚期HCC組，ALT差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(表2)。

三、AFP和SLC7A11單獨(dú)及聯(lián)合診斷HCC、早期HCC的ROC曲線分析比較

AFP診斷HCC的AUC為0.792，95%CI為0.725～0.858，靈敏度為67.50%，特異度為75.64%；SLC7A11診斷的AUC為0.801，95%CI為0.740～0.862，靈敏度為68.33%，特異度為80.77%。兩項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)時(shí)，AUC為0.869，95%CI為0.817～0.920，靈敏度為73.50%，特異度為85.55%(圖1)。

在早期HCC組中，單項(xiàng)檢測(cè)時(shí)，AFP診斷的AUC為0.752，95%CI為0.663～0.842，靈敏度為65.00%，特異度為70.51%；SLC7A11診斷的AUC為0.765，95%CI為0.685～0.846，靈敏度為66.67%，特異度為75.64%。兩項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)時(shí)，AUC為0.802，95%CI為0.725～0.878，靈敏度為71.67%，特異度為78.33%(圖2)。

討 論

本研究中，我們發(fā)現(xiàn)HCC患者血清SLC7A11水平顯著高于LC患者，同時(shí)，晚期HCC患者血清SLC7A11水平顯著高于早期HCC患者，提示血清SLC7A11水平可能與肝臟疾病進(jìn)程相關(guān)，對(duì)HCC的早期篩查診斷具有潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，診斷HCC及早期HCC患者時(shí)，SLC7A11的AUC、靈敏度以及特異度等均優(yōu)于AFP。評(píng)估血清中SLC7A11和AFP聯(lián)合診斷HCC的能力，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，聯(lián)合檢測(cè)診斷HCC或早期HCC的AUC、靈敏度以及特異度等指標(biāo)均高于單獨(dú)檢測(cè)，診斷能力明顯優(yōu)于單項(xiàng)指標(biāo)。

表1 HCC患者和LC患者一般資料比較

表2 早期HCC患者與晚期HCC和LC患者血清SLC7A11、AFP等指標(biāo)比較(±s)

圖1 AFP和SLC7A11及聯(lián)合診斷HCC的ROC曲線

圖2 AFP和SLC7A11及聯(lián)合診斷早期HCC的ROC曲線

SLC7A11作為溶質(zhì)載體家族成員之一，是胱氨酸/谷氨酸反向轉(zhuǎn)運(yùn)體(也稱(chēng)Xc-系統(tǒng))的輕鏈亞基，主要功能是將細(xì)胞內(nèi)的谷氨酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞外，而將細(xì)胞外液內(nèi)的胱氨酸攝取到細(xì)胞內(nèi)[9]。既往研究表明，在多種惡性腫瘤中SLC7A11呈高表達(dá)水平[10]。已有大量研究證明，SLC7A11與腫瘤生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移、化療耐藥、營(yíng)養(yǎng)依賴(lài)等密切相關(guān)[11]。有研究者利用公共數(shù)據(jù)庫(kù)中大量的HCC患者數(shù)據(jù)，構(gòu)建了HCC診斷和預(yù)后模型，證明SLC7A11具有一定的HCC診斷和預(yù)后判別能力[12]。也有研究者檢測(cè)了HCC患者外周血中SLC7A11濃度，發(fā)現(xiàn)SLC7A11針對(duì)HCC的檢測(cè)陽(yáng)性率可達(dá)80.2%，初步確定了其作為HCC腫瘤標(biāo)志物的潛在價(jià)值[13]。

綜上所述，血清SLC7A11水平在HCC發(fā)展進(jìn)程中呈現(xiàn)增高趨勢(shì)，與AFP聯(lián)合檢測(cè)可提高HCC診斷性能，尤其在HCC的早期診斷上表現(xiàn)出明顯優(yōu)勢(shì)，具有良好的臨床應(yīng)用價(jià)值。

利益沖突聲明：所有作者均聲明不存在利益沖突。