武海波 李 磊 谷泉霖

(ThePracticalJournalofCancer,2023,38:0025～0028)

膀胱癌作為常見的泌尿外科腫瘤，淺表性膀胱癌占大多數(shù)，臨床上治療膀胱癌的首選手段為手術(shù)治療，其中經(jīng)尿道膀胱腫瘤電切術(shù)最為常見[1-2]。有研究顯示，經(jīng)該手術(shù)治療的患者術(shù)后存在較高的復(fù)發(fā)率，因此在術(shù)前明確易導(dǎo)致膀胱癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)的相關(guān)原因并及時干預(yù)是降低其術(shù)后復(fù)發(fā)及改善預(yù)后的關(guān)鍵措施[3-4]。DNA 甲基轉(zhuǎn)移酶DNMT3b 是 DNA 甲基化的酶促參與者，作為DNA甲基轉(zhuǎn)移酶，DNMT3B已經(jīng)通過調(diào)節(jié)基因的啟動子用于增殖、遷移和侵襲[5-6]。重要的甲基化參與腫瘤進展，例如，DNMT3B 介導(dǎo)的轉(zhuǎn)移抑制因子 1 (MTSS1)啟動子的甲基化在表觀遺傳上抑制了膀胱尿路上皮癌中的 MTSS1 轉(zhuǎn)錄[7-8]。因此本研究檢測了DNMT3b在膀胱癌組織中的表達，并分析其與經(jīng)尿道膀胱腫瘤電切術(shù)后復(fù)發(fā)的相關(guān)性，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2016年4月至2018年4月本院收治膀胱癌患者82例，年齡42～79歲，平均(67.37 ±7.68)歲。納入標準：①符合膀胱癌的臨床標準[9]，經(jīng)臨床確診為膀胱癌；②經(jīng)尿道膀胱腫瘤電切術(shù)治療；③患者簽署自愿受試同意書，患者及其家屬需簽署知情同意書。排除標準：①精神疾病患者；②合并其他惡性腫瘤患者；③合并其他器官嚴重性病變患者；④臨床病歷及隨訪資料不完整或缺乏準確性。

1.2 免疫組織化學(xué)染色

使用10%甲醛溶液固定膀胱癌組織，經(jīng)石蠟包埋后制備4 μm厚切片。切片烘烤后分別用二甲苯、酒精脫蠟、脫水；自來水沖洗后用H2O2溶液浸泡10 min以滅活內(nèi)源過氧化物酶，PBS溶液沖洗3次；切片在檸檬酸鹽緩沖液中加熱15 min修復(fù)抗原，PBS溶液沖洗切片3次；甩干后滴加0.25%牛血清蛋白，室溫孵育30 min；分別加CCL2、CDCA5抗體，4 ℃孵育14 h；復(fù)溫90 min、PBS清洗后加生物素標記的二抗，38 ℃環(huán)境下孵育30 min，PBS清洗3次，每次5 min； DAB顯色劑染色，5 min后沖洗進行蘇木精復(fù)染1 min，沖洗、脫水后二甲苯固定，風(fēng)干后封片。具體操作按照免疫組化染色試劑盒說明書進行。置于顯微鏡下觀察，并采集圖像資料。每張切片隨機選取5個高倍鏡視野進行陽性細胞計數(shù)。經(jīng)免疫組化染色，細胞質(zhì)呈棕黃色或棕褐色的細胞為陽性細胞。染色結(jié)果評分標準：按照染色強度和陽性細胞所占百分比記分。①染色強度：無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。②陽性細胞所占百分比： <5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。兩者記分相乘，≤3分為陰性表達，>3分為陽性表達。

1.3 收集臨床資料以及隨訪資料

收集患者年齡、性別、組織學(xué)分級、腫瘤最大徑等臨床資料。采用電話及門診或住院復(fù)查等方式進行3年隨訪，了解患者生存情況。隨訪時間截止2021年5月，根據(jù)隨訪結(jié)果將患者分為復(fù)發(fā)組和未復(fù)發(fā)組。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 膀胱癌組織中DNMT3b表達及與患者的臨床病理特征的關(guān)系

82例膀胱癌組織中DNMT3b陽性表達57例(69.5%)。DNMT3b表達與TNM分期、T分期、腫瘤最大直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，見表1。

2.2 影響膀胱癌患者經(jīng)尿道膀胱腫瘤電切術(shù)后復(fù)發(fā)的單因素分析

經(jīng)尿道膀胱腫瘤電切術(shù)后復(fù)發(fā)14例。DNMT3b表達陽性、TNM分期越高膀胱癌患者經(jīng)尿道膀胱腫瘤電切術(shù)后復(fù)發(fā)率均顯著升高(P<0.05)，見表2。

表2 影響膀胱癌患者經(jīng)尿道膀胱腫瘤電切術(shù)后復(fù)發(fā)的單因素分析/例

2.3 影響膀胱癌患者經(jīng)尿道膀胱腫瘤電切術(shù)后復(fù)發(fā)多因素logistic分析

多因素logistic 回歸分析顯示，DNMT3b表達、TNM分期均為影響膀胱癌患者經(jīng)尿道膀胱腫瘤電切術(shù)后復(fù)發(fā)的獨立危險因素(P<0.05)， 見表3。

表3 影響膀胱癌患者經(jīng)尿道膀胱腫瘤電切術(shù)后復(fù)發(fā)的多因素logistic分析

3 討論

膀胱癌是一種發(fā)生于膀胱黏膜的惡性腫瘤，是世界范圍內(nèi)第10位最常見的癌癥類型[10]。據(jù)全球癌癥統(tǒng)計，2018年膀胱癌新發(fā)病例約54.9萬例，死亡20萬例[11]。膀胱癌不僅影響泌尿系統(tǒng)的功能，而且容易復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移[12]。目前臨床上所有實體腫瘤治療中，膀胱癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)率最高，因此術(shù)后復(fù)發(fā)成為了評估膀胱癌患者術(shù)后預(yù)后的重要性指標[13]。研究報道稱影響膀胱癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)的因素有很多，如致癌物質(zhì)的持續(xù)接觸和刺激以及手術(shù)治療不徹底等，但是具體因素還尚不清楚[14-15]。

DNA甲基化，即由DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNMT)催化的甲基向DNA分子的轉(zhuǎn)移，幾乎只發(fā)生在哺乳動物的CpG島中[16-17]。非CpG甲基化發(fā)生在胚胎干細胞中，最近在人類B細胞分化過程中觀察到[18]。DNMT家族包括DNMT1、DNMT3a和DNMT3b。DNMT1已被證明在體細胞中維持甲基化，并且DNMT3a和DNMT3b被認為參與胚胎干細胞和早期胚胎的DNA從頭甲基化[19-20]。最近發(fā)現(xiàn)，與相應(yīng)的正常組織相比，DNMT1、DNMT3a和DNMT3b在幾種人類腫瘤中過表達[21]。DNMT3b基因在膀胱癌組織中存在過表達，參與了膀胱癌的發(fā)生發(fā)展[22]。本研究中DNMT3b與TNM分期、T分期、腫瘤最大直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。DNMT3b表達陽性膀胱癌患者經(jīng)尿道膀胱腫瘤電切術(shù)后復(fù)發(fā)率更高。提示DNMT3b蛋白是經(jīng)尿道膀胱腫瘤電切術(shù)后膀胱癌復(fù)發(fā)的危險因子。有研究顯示臨床分期是膀胱癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)的預(yù)測因素，且分期越高，其復(fù)發(fā)的可能性越大[23]。本研究中TNM分期越高膀胱癌患者經(jīng)尿道膀胱腫瘤電切術(shù)后復(fù)發(fā)率也越高，這與既往研究一致。本研究中DNMT3b表達、TNM分期均為影響膀胱癌患者經(jīng)尿道膀胱腫瘤電切術(shù)后復(fù)發(fā)的獨立危險因素，提示DNMT3b表達、TNM分期可作為預(yù)測膀胱癌患者經(jīng)尿道膀胱腫瘤電切術(shù)后復(fù)發(fā)的指標。

綜上所述， 經(jīng)尿道膀胱腫瘤電切術(shù)治療的膀胱癌患者術(shù)后存在一定的復(fù)發(fā)性，DNMT3b表達、TNM分期是導(dǎo)致膀胱癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)的獨立危險因素。但本研究規(guī)模較小，未進行深入研究，在今后的研究中還需要擴大樣本量以及研究范圍，完善實驗結(jié)果，確保其準確性，為新的預(yù)測指標應(yīng)用于臨床提供參考依據(jù)。