何健萍 彭國斌

河南省周口市第一人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科 466700

急性腦梗死(Acute cerebral infarction，ACI)與動脈受血栓阻塞相關(guān)，進而導致腦組織缺血，而隨著缺血時間的延長，其程度逐漸加重，最終導致缺血半暗帶縮小，因此臨床上認為，ACI的治療應以挽救缺血半暗帶為主要治療原則[1-2]。阿替普酶靜脈溶栓療法可在短時間內(nèi)修復缺血半暗帶損傷，恢復血流，屬臨床治療ACI的主要手段[3]。但隨著靜脈溶栓療法的逐漸研究發(fā)現(xiàn)，此種治療手段可能會存在部分血栓殘留，而部分血栓殘留不利于功能的恢復[4]。因此早期預測ACI患者靜脈溶栓后功能結(jié)局，制定相對應的挽救措施，可改善功能結(jié)局，提高靜脈溶栓療效，鑒于此，在本研究中分析閉鎖蛋白(Occludin)、甲基CpG結(jié)合蛋白2(Methyl-CpG-binding protein 2，MECP2)、鈣調(diào)蛋白(Calmodulin，CAM)在ACI患者靜脈溶栓前后表達變化，并分析與功能結(jié)局的相關(guān)性，現(xiàn)報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取2020年1月—2022年1月我院收治的符合《中國急性缺血性腦卒中診治指南2018》[5]中ACI診斷標準的ACI患者134例作為ACI組，同期進行健康體檢的健康志愿者50例作為NC組。兩組一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表1。納入標準：ACI組首次診斷，均行靜脈溶栓治療，符合靜脈溶栓治療指征，且為首次接受靜脈溶栓治療。NC組無腦血管疾病，身體健康。兩組均自愿參與，簽署了知情同意書，且獲得我院倫理委員會批準。排除標準：年齡低于18歲；創(chuàng)傷性腦損傷；存在急性腦出血癥狀；無法溝通、精神異常者；有惡性腫瘤；重要臟器功能障礙。

表1 NC組、ACI組一般資料對比

1.2 方法

1.2.1 Occludin、MECP2、CAM檢測：抽取NC組入組后、ACI組靜脈溶栓前空腹靜脈血3ml，在離心半徑r=5cm，轉(zhuǎn)速為3 000r/min下離心，離心10min后保存于-80℃冰箱中，使用南京德鐵DeTie酶標儀測定Occludin、MECP2、CAM水平。

1.2.2 靜脈溶栓治療方案：ACI患者入院后均行阿替普酶靜脈溶栓治療，根據(jù)患者體重使用不同相對治療劑量的阿替普酶，標準劑量為0.9mg/kg，總劑量的10%在60s內(nèi)靜脈推注完畢，剩余90%以輸液泵持續(xù)輸注，在60min內(nèi)輸注完畢，所用的最大劑量不超過90mg，在患者接受靜脈溶栓治療期間不使用抗血小板聚集藥物，在24h后做頭顱CT復查，以排除患者顱內(nèi)出血，指導患者使用阿司匹林，200mg/d，2周后改為100mg/d，持續(xù)治療90d。

1.2.3 功能結(jié)局評價：在ACI患者靜脈溶栓后90d時，使用日常生活活動能力量表評價功能結(jié)局，量表包括吃飯、穿衣等，量表最低分為0分，最高分為100分，若患者評分高于60分則說明靜脈溶栓后功能結(jié)局優(yōu)良，若患者評分低于60分則說明靜脈溶栓后功能結(jié)局不良。

1.3 觀察指標 (1)對比NC組、ACI組Occludin、MECP2、CAM表達水平。(2)在ACI組靜脈溶栓治療后90d抽取靜脈血，測定Occludin、MECP2、CAM表達水平，對比靜脈溶栓治療前后Occludin、MECP2、CAM表達水平差異。(3)根據(jù)ACI患者靜脈溶栓后功能結(jié)局分為結(jié)局不良組、結(jié)局良好組兩個亞組，對比兩組Occludin、MECP2、CAM表達水平差異。(4)采用Pearson相關(guān)性分析Occludin、MECP2、CAM與ACI患者靜脈溶栓后功能結(jié)局的相關(guān)性。(5)采用ROC曲線分析Occludin、MECP2、CAM對ACI患者靜脈溶栓后功能結(jié)局的預測價值。

2 結(jié)果

2.1 NC組、ACI組Occludin、MECP2、CAM表達水平對比 ACI組Occludin水平低于NC組，MECP2、CAM水平高于NC組，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 NC組、ACI組Occludin、MECP2、CAM表達水平對比

2.2 ACI患者靜脈溶栓治療前后Occludin、MECP2、CAM表達水平對比 ACI患者溶栓后90d Occludin水平高于溶栓前，MECP2、CAM水平低于溶栓前，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表3。

2.3 ACI患者靜脈溶栓后不同功能結(jié)局間Occludin、MECP2、CAM表達水平對比 結(jié)局不良組Oc-cludin水平低于結(jié)局良好組，MECP2、CAM水平高于結(jié)局良好組，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表4。

表3 ACI患者靜脈溶栓治療前后Occludin、MECP2、CAM表達水平對比

表4 ACI患者靜脈溶栓后不同功能結(jié)局間Occludin、MECP2、CAM表達水平對比

2.4 Occludin、MECP2、CAM與ACI患者靜脈溶栓后功能結(jié)局的相關(guān)性 由Pearson相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，Occludin、MECP2、CAM與ACI患者靜脈溶栓后功能結(jié)局相關(guān)(r=-0.812、0.705、0.855，均P<0.05)。

2.5 Occludin、MECP2、CAM對ACI患者靜脈溶栓后功能結(jié)局的預測價值 ROC曲線顯示，相比于Occludin、MECP2、CAM單項預測，三項聯(lián)合預測效能最佳，三項聯(lián)合預測的AUC為0.912(95%CI=0.828～1.036)，敏感度為89.00%，特異度為81.50%，P<0.001。見圖1。

3 討論

Occludin被認為是與緊密連接相關(guān)的跨膜蛋白，羧基端、氨基端均在胞內(nèi)定位，而兩個胞外環(huán)伸向細胞間隙[6]。研究表明[7]，Occludin既屬于緊密連接的結(jié)構(gòu)蛋白，又屬于功能蛋白，具有維持細胞極性和調(diào)節(jié)上皮細胞滲透性的作用，與血腦屏障功能相關(guān)。血腦屏障是位于腦細胞與血液間的屏障，在機體處于正常狀態(tài)下時，可隔開中樞神經(jīng)系統(tǒng)和外周血液，經(jīng)選擇性向腦組織輸送營養(yǎng)物質(zhì)和限制炎性因子和毒性物質(zhì)的進入，進而穩(wěn)定整個中樞神經(jīng)系統(tǒng)的內(nèi)環(huán)境，而Occludin在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定中發(fā)揮著重要的作用[8]。報道稱[9-10]，在腦腦缺血疾病中，外周血中Occludin含量均降低，且其研究認為，Occludin的變異、缺失以及減少均會改變血腦屏障的通透性。劉俊超等[11]在其研究中表明，Occludin與急性腦梗死患者認知障礙有關(guān)，在急性腦梗死中含量降低。本研究結(jié)果示：與NC組相比，ACI組患者Occludin表達明顯降低。此結(jié)果與上述研究結(jié)果保持一致，且分析患者靜脈溶栓前后表達變化發(fā)現(xiàn)，在靜脈溶栓后其表達升高。此結(jié)果提示：Occludin在急性腦梗死發(fā)生時因組織缺血而表達降低，經(jīng)溶栓治療后臨床癥狀明顯改善，進而表現(xiàn)為治療后降低被糾正，含量升高。

MECP2屬于甲基化CPG結(jié)合蛋白的一種類型，MECP2蛋白包含3個結(jié)構(gòu)域，包括C末端結(jié)構(gòu)域、轉(zhuǎn)錄抑制結(jié)構(gòu)域、甲基CPG結(jié)合結(jié)構(gòu)域[12-13]。研究認為[14-15]，其作為一種具有轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)功能因子，經(jīng)結(jié)合甲基化DNA、識別CPG結(jié)合域而發(fā)揮促進神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育、控制和穩(wěn)定突出興奮性的作用。MECP2作為神經(jīng)元中重要的轉(zhuǎn)錄調(diào)控基因，當其功能異常時可經(jīng)抑制下游靶基因的表達而誘發(fā)多種疾病的發(fā)生，如帕金森、腦梗死等[16]。高英英等[17]研究發(fā)現(xiàn)，MECP2表達水平的升高預示著急性腦梗死的風險增大。本研究同樣發(fā)現(xiàn)，MECP2在ACI患者中表達升高，與上述研究結(jié)果保持一致。之后對比分析患者靜脈溶栓前后MECP2表達變化，結(jié)果顯示，MECP2在溶栓治療后水平降低，此結(jié)果說明，在患者接受靜脈溶栓治療后神經(jīng)元損傷被修復，此時MECP2含量降低。

報道稱，鈣超載是加重腦組織缺血損傷的原因之一，在腦組織缺血損傷加重過程中，鈣超載和鈣離子之間動態(tài)平衡被打破，此時外周血中CAM含量明顯增加[18-19]。CAM屬于保守性較高的啞鈴狀蛋白，屬于鈣離子的受體蛋白，其可與靶蛋白產(chǎn)生特異性結(jié)合，而對機體內(nèi)蛋白質(zhì)、多種酶的活性進行調(diào)節(jié)[20]。研究發(fā)現(xiàn)[21]，在腦組織發(fā)生缺血損傷后鈣離子超載，超載的鈣離子進入至神經(jīng)元內(nèi)，激活鈣離子/CAM依賴性的信號轉(zhuǎn)導通路進而損傷腦細胞。唐彥等[22]在其研究中驗證了急性腦梗死患者血CAM水平與神經(jīng)功能缺損嚴重程度相關(guān)，缺損越嚴重CAM水平升高更加劇。本文亦證實了CAM在ACI患者中表達升高，且在溶栓后鈣超載和鈣離子之間恢復原有平衡，進而表現(xiàn)為溶栓后CAM水平降低。

研究認為，功能結(jié)局是反映ACI患者靜脈溶栓長期療效的重要指標，功能結(jié)局越佳說明患者接受靜脈溶栓治療效果越優(yōu)。本研究結(jié)果顯示，Occludin、MECP2、CAM與ACI患者靜脈溶栓后功能結(jié)局相關(guān)，提示三者可作為早期預測ACI患者靜脈溶栓長期療效的敏感指標。

綜上可知，ACI患者Occludin水平降低，MECP2、CAM水平升高，靜脈溶栓可改善Occludin、MECP2、CAM水平，而溶栓功能結(jié)局不良與Occludin、MECP2、CAM異常有關(guān)。