田彩云，高博聞

（1.成都中醫(yī)藥大學(xué)，成都 611137；2.包頭醫(yī)學(xué)院，包頭 014040）

中藥品質(zhì)（brand quality）是指中藥及相關(guān)產(chǎn)品的品種、產(chǎn)地、規(guī)格、等級、質(zhì)量及其與功效相關(guān)的屬性[1]。傳統(tǒng)中藥材的品質(zhì)評價多采用中醫(yī)理論中的“辨質(zhì)用藥”方法，即基于理論及實踐經(jīng)驗，對中藥材采用看、摸、聞、口嘗等方法，觀察中藥材“形、色、氣、味”的外觀性狀和某些特征，以判斷藥材的真?zhèn)蝺?yōu)劣，此方法具有便捷快速的特點，在廣大的藥品流通領(lǐng)域如藥房、藥店及藥材市場等依然具有廣泛的應(yīng)用。隨著現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的發(fā)展以及檢測儀器的普及化，中藥品質(zhì)評價的手段也更為精準(zhǔn)可靠，目前應(yīng)用于中藥品質(zhì)評價的技術(shù)手段及實驗設(shè)備有分子鑒定技術(shù)、色譜法、光譜法、生物效應(yīng)鑒定技術(shù)等。其中，結(jié)合藥效發(fā)現(xiàn)主要活性成分，利用色譜技術(shù)對藥效成分進行定量是評價藥材品質(zhì)優(yōu)劣的重要方式。

1 中藥品質(zhì)理論與中藥品質(zhì)評價

1.1 中藥品質(zhì)理論

中藥主要來源于天然的植物、動物和礦物，這些藥物從種植、養(yǎng)殖到采集加工成藥材、飲片，影響其品質(zhì)的因素較多，主要包括產(chǎn)地環(huán)境生態(tài)、種質(zhì)和繁殖材料、栽培和養(yǎng)殖技術(shù)、采集年限與時期、藥用部位的選擇、產(chǎn)地加工方法、炮制工藝、重金屬、農(nóng)藥殘留量、化學(xué)有效成分或指標(biāo)性成分含量、包裝運輸與貯藏管理等。而且有些因素，例如有效成分含量、次生代謝物的積累，往往因藥材品種不同、產(chǎn)地與環(huán)境不同、生長年限不同、采收時期不同等，處于一種動態(tài)變化之中，這就更增加了影響藥材品質(zhì)因素的復(fù)雜性。所以，保證和提高中藥品質(zhì)，必須從源頭抓起，控制監(jiān)測其從種源、種植到成品的全過程。萬德光教授[2]在結(jié)合科研與教學(xué)實踐，運用與中藥相關(guān)的現(xiàn)代科技知識和成果對中藥品質(zhì)的理論進行了初步探討，較系統(tǒng)地提出了中藥品質(zhì)理論的8個論點：①中藥品質(zhì)的遺傳主導(dǎo)論，論述遺傳因素對中藥的“形態(tài)特質(zhì)”與“代謝特質(zhì)”形成起到的主導(dǎo)作用；②中藥品質(zhì)的環(huán)境飾變論，論述環(huán)境因素引起的生物體形態(tài)特征或生理特性的變化，并從而引起中藥品質(zhì)改變的問題；③中藥品質(zhì)的生物多樣性維持論，論述遺傳多樣性維持中藥品質(zhì)穩(wěn)定，物種多樣性維系充足藥用資源，以及生態(tài)多樣性孕育豐富藥用資源的問題；④中藥品質(zhì)的傳承論，論述中藥品種、品質(zhì)始終處于繼承與發(fā)展相互交織之中，包括遺傳品質(zhì)、環(huán)境品質(zhì)、形態(tài)品質(zhì)、加工品質(zhì)和效用品質(zhì)諸方面的傳承；⑤中藥品質(zhì)效用決定論，論述有關(guān)品種、產(chǎn)地、加工方法等的選擇作用；⑥中藥品質(zhì)的多元調(diào)控論，論述通過農(nóng)藝措施、采收、加工、炮制、用法等人工干預(yù)措施影響中藥品質(zhì)的過程；⑦中藥商品物流保質(zhì)論，論述中藥物流儲運技術(shù)和方法對中藥品質(zhì)的影響；⑧中藥辨?zhèn)握?，論述古今對中藥偽品的認(rèn)識和中藥去偽存真的問題。

1.2 中藥品質(zhì)評價方法

現(xiàn)代意義上的中藥品質(zhì)評價即中藥質(zhì)量控制與評價，其方法與體系非常復(fù)雜，涉及到中藥藥性理論、物質(zhì)基礎(chǔ)、作用機制等多方面研究。具體方法包括：中藥化學(xué)物質(zhì)組學(xué)在中藥質(zhì)量評價中的應(yīng)用，如涉及色譜、光譜和色譜光譜聯(lián)用的中藥指紋圖譜技術(shù)等；“組效關(guān)系”理論在中藥質(zhì)量評價中的應(yīng)用，如血清藥物化學(xué)等；運用“系統(tǒng)生物學(xué)”思維進行中藥質(zhì)量評價，如中藥基因組學(xué)、中藥蛋白質(zhì)組學(xué)、中藥代謝組學(xué)等；以及結(jié)合中藥生物活性對中藥質(zhì)量進行評價的研究等。

2 中藥品質(zhì)理論與中藥品質(zhì)評價方法在藏藥品質(zhì)評價中的應(yīng)用

藏藥是民族醫(yī)藥的重要組成部分，具有獨特的醫(yī)藥理論體系。藏藥據(jù)記載有3000多種，藏族常用藏藥成藥有800余種。目前，藏藥的國家標(biāo)準(zhǔn)有衛(wèi)生部頒布的藏藥國家標(biāo)準(zhǔn)《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)藏藥分冊》，藏藥部頒品種批準(zhǔn)文號200種，藏藥藥材136種。地方標(biāo)準(zhǔn)有6省藏藥標(biāo)準(zhǔn)等。雖然這些國家和地方的藏藥標(biāo)準(zhǔn)為藏藥的監(jiān)管做出了重要貢獻。但是，依然不能覆蓋大多數(shù)藏藥品種，并且在藏藥的檢驗過程中評價指標(biāo)不足，不能滿足安全監(jiān)管的目標(biāo)等諸多問題。常用藏藥材中絕大多數(shù)沒有嚴(yán)格的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，同時藏藥材還存在“同名異物”、“一名多物”等現(xiàn)象。因此，對藏藥品種和品質(zhì)進行規(guī)范化評價研究是解決目前問題的重要手段。目前圍繞藏藥品種混亂、質(zhì)控水平低下、效應(yīng)機制不明等關(guān)鍵科學(xué)問題，結(jié)合中藥品質(zhì)理論與中藥品質(zhì)評價方法，除傳統(tǒng)的指標(biāo)性成分含量測定以及指紋圖譜技術(shù)以外，學(xué)者整合應(yīng)用DNA條形碼鑒定、紅外光譜、1H-NMR代謝組學(xué)、網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)、質(zhì)量標(biāo)志物等新技術(shù)和新方法，研究并建立藏藥品質(zhì)評價技術(shù)，促進了藏醫(yī)藥科學(xué)研究和現(xiàn)代化發(fā)展。

2.1 DNA條形碼技術(shù)在藏藥品質(zhì)評價中的應(yīng)用

DNA條形碼（DNA barcoding）技術(shù)是以染色體組為基礎(chǔ)，用一段標(biāo)準(zhǔn)DNA序列作為標(biāo)記實現(xiàn)快速、準(zhǔn)確和自動化的物種鑒定方法，該方法是近幾年來迅速發(fā)展起來的一項全新的物種鑒定技術(shù)，為解決傳統(tǒng)分類學(xué)面臨的難題提供了新方法[3-5]。近年來，DNA barcoding鑒定方法也越來越多的應(yīng)用于中藥鑒定中，其鑒定具有三大優(yōu)勢：①技術(shù)的簡便性，易于實現(xiàn)，易于操作，易于構(gòu)建統(tǒng)一的DNA barcoding序列數(shù)據(jù)庫；②鑒定的準(zhǔn)確性，DNA barcoding序列可以實現(xiàn)門、綱、目、科、屬、種、變種等不同分類水平物種的鑒定，且具有獨一無二的可重復(fù)性；③使用的方便性，任何人可以利用DNA barcoding序列數(shù)據(jù)庫，方便地進行數(shù)據(jù)比對完成鑒定工作[6,7]。

黃思遠等[8]比較不同產(chǎn)地、不同海拔波棱瓜植物的ITS2、PsbA-trnH、rbcL、matK序列擴增效率和測序成功率；分析種內(nèi)和種間變異；通過Neighbor Joining(NJ)系統(tǒng)進化樹，評價各序列對不同產(chǎn)地與海拔波棱瓜藥材的辨別能力。研究結(jié)果表明，以ITS2序列作為DNA條形碼，可對波棱瓜進行高效鑒定，并理清不同波棱瓜之間的進化關(guān)系。任瑤瑤等[9]以ITS2序列為DNA條形碼建立了一種快速準(zhǔn)確鑒定臭蒿及其易混蒿屬藏藥植物的方法。通過ITS2目標(biāo)序列PCR擴增、測序，獲得序列信息；運用MEGA 6.0對不同ITS2序列進行對比，構(gòu)建NJ系統(tǒng)進化樹，并比較樣本ITS2序列間的二級結(jié)構(gòu)差異。結(jié)果顯以ITS2序列作為DNA條形碼，可對臭蒿及其近緣蒿屬藏藥植物進行準(zhǔn)確、快速的識別和鑒定，準(zhǔn)確地弄清物種之間的系統(tǒng)進化關(guān)系。尼瑪潘多等[10]對藏區(qū)常使用的洪連藥材進行DNA條形碼鑒定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)12批樣品來源于3個種。根據(jù)遺傳距離NJ樹分析，3種兔耳草明顯分為3支。任瑤瑤等[11]從青藏高原地區(qū)采集烏頭屬藏藥樣品50份，分別提取樣品DNA，對ITS2目標(biāo)序列進行PCR擴增、測序，構(gòu)建NJ系統(tǒng)進化樹，并比較樣本ITS2序列間的二級結(jié)構(gòu)差異。結(jié)果發(fā)現(xiàn)烏頭屬藏藥植物樣本種間最小距離大于種內(nèi)最大距離，NJ樹顯示各種烏頭屬植物種內(nèi)之間各單獨形成一個分支，ITS2序列二級結(jié)構(gòu)也有明顯差異，能夠?qū)躅^屬各種植物區(qū)分開。賀水蓮等[12]對4種綠絨蒿進行DNA提取、PCR擴增和測序，運用Sequencher軟件對所獲序列進行拼接，應(yīng)用Geneious軟件比對序列，計算Kimura 2-parameter(K2P)遺傳距離并構(gòu)建UPGMA系統(tǒng)聚類樹等方法進行鑒定分析，探索鑒定這4種綠絨蒿的新方法。結(jié)果表明條形碼4個片段都具有較高的遺傳多樣性，其中rbcL的多樣性較低，ITS的多樣性最好；綠絨蒿屬種間存在相當(dāng)高的遺傳分化；構(gòu)建綠絨蒿屬4個種的UPGMA系統(tǒng)分類樹顯示，4個種的分辨率很高，分種的支持率亦很高；4個條形碼片段都可以找到特異性鑒定位點，從而快速區(qū)分4個種；植物類通用條形碼rbcL、matK、trnH-psbA及ITS適用于鑒定中藥材綠絨蒿。黃聰琳等[13]對藏藥鐮形棘豆及其易混偽品進行分子鑒定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)鐮形棘豆物種種內(nèi)K2P遺傳距離為0，與其他混偽品的K2P遺傳距離分布于0.068～0.084，構(gòu)建的NJ樹表明ITS2序列能夠區(qū)分鐮形棘豆與其他易混偽品。

2.2 紅外光譜在藏藥品質(zhì)評價中的應(yīng)用

以多組分整體用藥的中醫(yī)和藏醫(yī)理論來說，對于其中單個或多個目標(biāo)成分的檢測和控制并不能全面的反映原藥材的質(zhì)量及提取工藝的穩(wěn)定性。而近年來被應(yīng)用于藥材分析研究的紅外光譜，具有快速、高效、樣品用量少、操作簡單、宏觀整體特征性強等特點，在系統(tǒng)控制監(jiān)測方面逐漸顯示出其優(yōu)勢。

楊紅霞等[14]利用紅外光譜三級鑒定方法對藏藥川西獐牙菜及其不同溶液提取物進行分析研究。結(jié)果顯示，龍膽苦苷紅外光譜中1611 cm-1和1075 cm-1處的兩個主要特征峰強度的變化趨勢，和川西獐牙菜不同溶劑提取物中龍膽苦苷含量變化趨勢一致；提取溶劑極性相近時，提取物的紅外光譜圖相似；隨著提取溶液極性的逐漸降低，提取物的紅外譜圖中2853、1733、1464、1277和1161 cm-1等處吸收峰強度逐漸增強，提取物中酯類化合物含量逐漸增加，萜類化合物的提取率逐漸增加；紅外光譜圖極為相近的不同濃度乙醇提取物在二維紅外光譜圖中有很明顯的差異。龍膽苦苷特征峰強度的變化趨勢和不同提取物中龍膽苦苷含量變化趨勢的一致性說明紅外光譜分析結(jié)果能體現(xiàn)分析對象中所含有成分的含量變化；川西獐牙菜原藥材，水提物和不同濃度乙醇提取物譜圖的相似性和相似度的變化規(guī)律，說明傳統(tǒng)用藥水煎液和低濃度醇提物的科學(xué)性。李朵等[15]以粉末狀五脈綠絨蒿花、葉及全草為研究對象，采集其中紅外光譜圖，結(jié)合化學(xué)計量學(xué)方法建立部位判別模型。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不同部位各吸收峰處吸光度值之間差異極顯著，可據(jù)此建立部位判別模型。模型判別效果良好，可實現(xiàn)五脈綠絨蒿不同部位的快速有效識別。楊紅霞等[16]利用HPLC和紅外光譜分析技術(shù)分析藏藥材印度獐牙菜不同溶劑提取物的指標(biāo)成分變化，同時采用CCl4致小鼠肝損傷模型進行水提物和75%乙醇提取物保肝活性藥效學(xué)研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同溶劑提取物的紅外光譜之間及其所含目標(biāo)成分的特征峰強度之間存在明顯的差異。提取率較高的水提物和75%乙醇提取物均具有明顯的保肝活性，且在0.5～2.0 g/kg的給藥劑量范圍內(nèi)，印度獐牙菜75%乙醇提取物保肝活性呈明顯的量效關(guān)系。

2.3 1H-NMR代謝組學(xué)在藏藥品質(zhì)評價中的應(yīng)用

1H-NMR代謝組學(xué)應(yīng)用于中藥質(zhì)量控制的優(yōu)勢在于能較全面的檢測藥材的整體化學(xué)成分，測定快速準(zhǔn)確，專屬性強等。

蘇永文等[17]運用1H-NMR代謝組學(xué)方法，建立藏藥沙棘的氫核磁共振指紋圖譜，明確不同基原之間的整體代謝物差異。利用核磁共振儀測定不同基原的沙棘藥材，結(jié)果顯示L-白雀木醇、蘋果酸和部分未鑒定的糖類成分是引起3個品種分類的差異代謝物。該研究鑒定出25個代謝產(chǎn)物，包括黃酮類、三萜類、氨基酸類、糖類、脂肪酸類等成分。劉悅等[18]采用1H-NMR代謝組學(xué)方法獲得中國沙棘、江孜沙棘和西藏沙棘藥材的代謝物指紋譜圖。并應(yīng)用ITS2和psbA-trnH序列對3種沙棘進行DNA條形碼鑒定。結(jié)果表明DNA條形碼結(jié)合1H-NMR代謝組學(xué)可以發(fā)掘3種沙棘種間的遺傳和化學(xué)特征的差異性，并對3種沙棘進行準(zhǔn)確鑒定。基于DNA條形碼和1H-NMR代謝組學(xué)建立的多基原藏藥沙棘二維鑒定方法準(zhǔn)確可靠，能為藏藥鑒定和質(zhì)量評價提供一種新思路。

2.4 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)在藏藥品質(zhì)評價中的應(yīng)用

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)（network pharmacology，NP）是一門分析生物系統(tǒng)網(wǎng)絡(luò)并選取特定信號節(jié)點進行多靶標(biāo)藥物分子設(shè)計的新學(xué)科，可用于預(yù)測推斷小分子與基因、蛋白質(zhì)、代謝物等靶標(biāo)和網(wǎng)絡(luò)的相關(guān)性，構(gòu)建“藥物-基因-靶標(biāo)-疾病”作用網(wǎng)絡(luò)，全面系統(tǒng)表征藥物對疾病的干預(yù)和影響，具有整體性、動態(tài)性和系統(tǒng)性的特點，符合中藥（民族藥）防病治病的思想，給中藥現(xiàn)代研究提供了新的策略和方法。近年來網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)也被用于藏藥品質(zhì)評價中[19]。

高小敏等[20]應(yīng)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法對藏藥麻花秦艽防治細胞因子風(fēng)暴的主要活性成分及可能作用機制進行預(yù)測分析。方法是通過中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫分析平臺（TCMSP）及人類基因（GeneCards）數(shù)據(jù)庫收集麻花秦艽的活性化合物和與細胞因子風(fēng)暴相關(guān)靶點；應(yīng)用Cytoscape 3.6.1軟件構(gòu)建麻花秦艽活性成分-細胞因子風(fēng)暴靶點調(diào)控網(wǎng)絡(luò)圖；構(gòu)建蛋白-蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)圖篩選核心靶點，利用DAVID在線數(shù)據(jù)庫對核心蛋白進行基因本體論（gene ontology，GO）功能富集分析和京都基因與基因組百科全書（Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG）通路富集分析。結(jié)果篩選得到麻花秦艽與防治細胞因子風(fēng)暴相關(guān)的14個活性化合物和31個有效靶點。GO分析發(fā)現(xiàn)麻花秦艽在抗細胞因子風(fēng)暴時主要涉及調(diào)控細胞凋亡、基因表達、細胞因子活性、一氧化氮生物合成過程的正調(diào)控、生長因子活性、免疫應(yīng)答等過程。KEGG通路分析發(fā)現(xiàn)其主要涉及細胞因子風(fēng)暴相關(guān)通路T細胞受體信號通路、酪氨酸激酶JAK和轉(zhuǎn)錄因子STAT（Janus kinase-signal transducer and activator of transcription，Jak-STAT）信號通路、低氧誘導(dǎo)因子1（hypoxia-inducible factor 1，HIF-1）信號通路、腫瘤壞死因子信號通路、Toll樣受體信號通路、磷酸化磷酯酰肌醇3激酶（phosphatidylinositide 3-kinases，PI3K）-Akt信號通路等核心靶點通路。范芳芳等[21]利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法對大花紅景天抗氧化應(yīng)激的物質(zhì)基礎(chǔ)及分子作用機制進行研究。從紅景天中篩選出與氧化應(yīng)激相關(guān)化合物133個，構(gòu)建出“成分-靶點-通路-功能”網(wǎng)絡(luò)圖。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，大花紅景天通過紅景天苷、沒食子酸乙酯、兒茶素等主要成分干預(yù)細胞凋亡相關(guān)過程，如細胞死亡、一氧化氮代謝過程、氧化應(yīng)激應(yīng)答、線粒體機制、氧化還原過程及氧化還原相關(guān)酶的活性等生物學(xué)過程發(fā)揮H9c2心肌細胞免受氧化應(yīng)激損傷的保護作用。

2.5 中藥質(zhì)量標(biāo)志物概念在藏藥品質(zhì)評價中的應(yīng)用

為提升我國中藥產(chǎn)品質(zhì)量和質(zhì)量控制水平，劉昌孝院士針對中藥生物屬性、制造過程及配伍理論等自身特點，于2016年提出中藥質(zhì)量標(biāo)志物的新概念[22]。明確了質(zhì)量標(biāo)志物的基本條件：①存在于中藥材和中藥產(chǎn)品中固有的次生代謝物，或加工制備過程中形成的化學(xué)物質(zhì)；②來源某藥材（飲片）特有的而不是來源于其他藥材的化學(xué)物質(zhì)；③有明確的化學(xué)結(jié)構(gòu)和生物活性；④可以進行定性鑒別和定量測定的物質(zhì)；⑤按中醫(yī)配伍組成的方劑“君”藥首選原則，兼顧“臣”、“佐”、“使”藥的代表性物質(zhì)。中藥質(zhì)量標(biāo)志物概念的提出，針對中藥生物屬性、制造過程及配伍理論等中醫(yī)藥體系的自身特點，整合多學(xué)科知識，提出核心質(zhì)量概念，以此統(tǒng)領(lǐng)中藥質(zhì)量研究，進一步密切中藥有效性-物質(zhì)基礎(chǔ)-質(zhì)量控制標(biāo)志性成分的關(guān)聯(lián)度；所建立的思維模式和研究方法著眼于全過程的物質(zhì)基礎(chǔ)的特有、差異、動態(tài)變化和質(zhì)量的傳遞性、溯源性，有利于建立中藥全程質(zhì)量控制及質(zhì)量溯源體系，實現(xiàn)了中藥質(zhì)量控制理論、思路和方法的質(zhì)的飛躍[23]。（中藥質(zhì)量標(biāo)志物的概念-核心理論與研究方法）因此，中藥質(zhì)量標(biāo)志物研究方法也被用于藏藥品質(zhì)評價中。張芡[24]通過UPLC-Q-TOF-MS對藏藥苞葉大黃進行化學(xué)成分分析。結(jié)果從苞葉大黃中共鑒定了45個化學(xué)成分，包括鞣質(zhì)類及蒽醌類，初步揭示藏藥苞葉大黃的化學(xué)成分，并預(yù)測了苞葉大黃的質(zhì)量標(biāo)志物。隨后，以預(yù)測的質(zhì)量標(biāo)志物為基礎(chǔ)，依照2015年版《中國藥典》（四部）的檢測方法，對16批苞葉大黃藥材進行性狀、鑒別、檢查、浸出物及含量測定研究。

3 討論與展望

藏藥作為地區(qū)特色，在維護當(dāng)?shù)厝嗣窠】狄约暗貐^(qū)文化的傳承方面都起到了重要的作用，已經(jīng)深深融入到當(dāng)?shù)厝嗣裆钪?。隨著我國經(jīng)濟和科學(xué)技術(shù)的持續(xù)發(fā)展，對傳統(tǒng)民族藥也越來越重視，各種先進的技術(shù)和研究思路越來越多的被應(yīng)用于藏藥品質(zhì)評價研究之中，一方面為藏藥質(zhì)量控制提供了新的方法和思路，如更能體現(xiàn)藥物作用的整體性作用，可以盡可能的兼顧化學(xué)成分和藥效等，另一方面，在實際應(yīng)用發(fā)展中也面臨著一定的局限性和亟待解決的問題。如目前對藏藥的品質(zhì)評價是以化學(xué)成分為基礎(chǔ)的，因此藥材化學(xué)成分以及藥效成分的發(fā)現(xiàn)就顯得尤為重要。相比于中藥中的大宗藥材，大多數(shù)藏藥的化學(xué)成分和活性成分研究基礎(chǔ)相對薄弱，極大地限制了藏藥品質(zhì)評價以及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制訂的效率。此外，藏藥的道地性和規(guī)范化種植方面還需要大量工作，以從源頭上對藥材質(zhì)量進行保障。再者，藏藥基層流通領(lǐng)域?qū)τ诓厮幍钠焚|(zhì)評價有大量需求，如何開展更加經(jīng)濟、高效的藥材質(zhì)量控制方法也需要進一步的投入。綜上所述，隨著藏藥化學(xué)成分、系統(tǒng)生物學(xué)、整合組學(xué)研究的不斷深入，以及各醫(yī)療單位、高校和科研院所的持續(xù)投入，藏藥使用的科學(xué)性和規(guī)范性必將不斷加強。