朱成光，武子敬，晏 晨

(1.貴州中醫(yī)藥大學(xué)，貴陽 550025；2.通化師范學(xué)院,通化 134002)

多穗金粟蘭(Chloranthus multistachys S.J.Pei)為金粟蘭科金粟蘭屬的多年本草植物，主產(chǎn)于我國(guó)貴州、湖南、四川等地[1,2]。民間又叫作四塊瓦，全草入藥，性味苦辛，微溫，有小毒；具有舒筋活絡(luò)、祛風(fēng)止痛、清熱解毒、消腫的功效[3]；可用于治療風(fēng)寒咳嗽、瘀血腫痛、毒蛇咬傷、瘧疾、瘡癰、跌打骨折、腰腿痛、疔腫、皮膚瘙癢等病癥[1,2]?，F(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)表明，金粟蘭屬植物多具有抗炎、抗菌、抗腫瘤、抗?jié)儭㈡?zhèn)痛，抗血小板聚集等活性[4-5]。本課題組成員已經(jīng)完成對(duì)多穗金粟蘭部分化學(xué)成分的分離，本文從體外抗氧化活性和抗炎消腫的角度對(duì)多穗金粟蘭進(jìn)行研究。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與材料

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（型號(hào)：0SB-2110，廠家：上海愛郎儀器有限公司）；予華牌循環(huán)水真空泵（型號(hào)：SHZ-DIII，廠家：鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司）；超聲波清洗器（型號(hào)：SK5200H，廠家：上海科導(dǎo)超聲儀器有限責(zé)任公司）；智能數(shù)顯恒溫水浴鍋（型號(hào)：HH-S4，廠家：鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司）；足趾容積測(cè)量?jī)x（型號(hào)：PV-200，廠家：成都泰盟科技有限公司）；全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀（ReadMax 1200型）。DPPH、ABTS、Trolox（安徽酷爾生物工程有限公司）；化學(xué)實(shí)驗(yàn)所用試劑均為分析純。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

由長(zhǎng)春高新醫(yī)學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中心提供的雌性小鼠(合格證號(hào)：SCXK(遼)2015-0001)，體重20～22g。在恒溫(22±2)℃的條件下；相對(duì)濕度(65±4)%。小鼠自由進(jìn)食和飲水。

1.3 樣品制備

稱取多穗金粟蘭200g，加入75%乙醇熱回流提取，提取1h，連續(xù)提取2次，合并提取液，回收溶劑，待濃縮液無醇味，用乙酸乙酯進(jìn)行萃取，萃取2次。對(duì)乙酸乙酯層進(jìn)行濃縮，回收溶劑。萃取后的水層也進(jìn)行濃縮。

1.4 抗氧化實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 DPPH自由基清除能力測(cè)定[6]

精確配制0.1mmol·L-1的DPPH乙醇溶液，于0～4℃避光保存，備用。分別取待測(cè)樣品溶液2mL與DPPH溶液2mL均勻混合，在37℃恒溫黑暗中反應(yīng)30min，于517 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值，空白組以甲醇取代DPPH，對(duì)照以甲醇取代樣品，以Trolox為陽性對(duì)照，每組平行測(cè)定3次。

DPPH自由基清除率(%)=(1—(Ai—Aj)/Ac)×100

式中：Ai為樣品組吸光度；Aj為空白組吸光度；Ac為對(duì)照組吸光度。

1.4.2 ABTS自由基清除能力測(cè)定[7]

將7.0mmoL·L-1的ABTS溶液與2.45 mmoL·L-1過硫酸鉀溶液等體積混合，室溫避光靜置12～16 h，即得ABTS自由基母液。用10 mmoL·L-1（pH7.4）磷酸緩沖溶液將ABTS自由基母液稀釋。分別取待測(cè)樣品溶液0.1 mL與3.9 mL ABTS自由基溶液中，振蕩30s后室溫靜置10 min，于波長(zhǎng)734 nm處測(cè)量吸光度值，空白組以甲醇取代DPPH，對(duì)照以甲醇取代樣品，以Trolox為陽性對(duì)照，每組平行測(cè)定3次。

ABTS自由基清除率(%)=(1—(Ai—Aj)/Ac)×100

式中：Ai為樣品組吸光度；Aj為空白組吸光度；Ac為對(duì)照組吸光度。

1.5 抗炎實(shí)驗(yàn)方法

1.5.1 分組及給藥

將小鼠隨機(jī)分為5組，每組7只，分別設(shè)多穗金粟蘭乙酸乙酯萃取物高劑量組、劑量組、低劑量組、空白對(duì)照組（灌胃生理鹽水）和陽性對(duì)照組（0.5%氫化可的松注射液)，多穗金粟蘭乙酸乙酯萃取物高、中、低劑量組分別按0.4、0.2、0.1g·kg-1·d-1給藥，各組均連續(xù)給藥7天，灌胃量為0.1mL·10g-1。

1.5.2 抗炎實(shí)驗(yàn)[8,9]

連續(xù)給小鼠灌藥7d，第7d末次給藥前，先用足趾容積測(cè)量?jī)x測(cè)每只小鼠右后足的原始足趾容積，然后對(duì)小鼠用1%角叉菜膠對(duì)右后足進(jìn)行致炎，給藥30min、60min后，分別測(cè)量致炎的足容積，并計(jì)算腫脹度。

腫脹度(%)=（致炎后的足趾容積－致炎前的足趾容積）/致炎前的足趾容積100%

1.5.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以×±s表示，應(yīng)用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄整理見表2。各組間比較采用One-way ANOVA分析，以P＜0.05為數(shù)據(jù)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＜0.01為差異極顯著。

表2 多穗金粟蘭乙酸乙酯萃取的抗炎能力（n=7）

2 結(jié)果

2.1 多穗金粟蘭乙酸乙酯萃取物的抗氧化能力

多穗金粟蘭乙酸乙酯萃取物表現(xiàn)出一定的DPPH自由基和ABTS自由基清除能力，且與質(zhì)量濃度成正相關(guān)，結(jié)果見表1。

表1 多穗金粟蘭樣品對(duì)自由基的清除能力IC50（μg·mL-1）

2.2 多穗金粟蘭乙酸乙酯萃取物的抗炎能力

3 討論

本實(shí)驗(yàn)首次對(duì)多穗金粟蘭乙酸乙酯萃取物進(jìn)行抗炎活性和抗氧化活性研究，在對(duì)多穗金粟蘭乙酸乙酯層和水層進(jìn)行抗氧化實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，多穗金粟蘭乙酸乙酯層對(duì)DPPH自由基的清除能力要強(qiáng)于水層；而對(duì)ABTS自由基的清除能力與水層的清除能力相當(dāng)。在對(duì)多穗金粟蘭乙酸乙酯層的抗炎實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，在給藥30min后，高中低三個(gè)不同給劑量組中，實(shí)驗(yàn)小鼠足趾腫脹程度與空白組無明顯差異；而給藥60min，高劑量組小鼠足趾腫脹度與空白組有顯著性差異，中低劑量組小鼠足趾腫脹度與空白組無顯著性差異。說明高劑量組對(duì)小鼠后足致炎腫脹有一定的抗炎消腫作用。

課題組后續(xù)還將繼續(xù)對(duì)多穗金粟蘭乙酸乙酯層的化學(xué)成分進(jìn)行分離純化，并進(jìn)行體內(nèi)抗氧化研究，進(jìn)一步探討多穗金粟蘭乙酸乙酯層抗氧化的物質(zhì)基礎(chǔ)及其作用機(jī)制。