李曉萍

（泉州市中醫(yī)院檢驗科，福建 泉州 362005）

沙眼衣原體、解脲脲原體是人類性傳播疾病的常見病原體。近年來，其感染率有逐步上升趨勢，造成了廣泛的泌尿生殖道感染。對于女性群體而言，感染沙眼衣原體、解脲脲原體不僅可引發(fā)非細(xì)菌性陰道炎、宮頸炎疾病，嚴(yán)重情況下還會導(dǎo)致女性不孕不育、先兆流產(chǎn)或自然流產(chǎn)等，嚴(yán)重影響女性的健康水平[1]?，F(xiàn)階段，沙眼衣原體、解脲脲原體所致的性疾病發(fā)病人群不斷增加，發(fā)病地區(qū)不斷擴(kuò)大，疾病危害日益嚴(yán)重，已成為十分突出的公共衛(wèi)生安全問題[2]。尤其是在城鎮(zhèn)化進(jìn)程不斷加速的背景下，各地區(qū)流動人口較多，沙眼衣原體、解脲脲原體感染的風(fēng)險也隨之增加[3]。為了更好了解本地區(qū)女性人群中沙眼衣原體、解脲脲原體的感染情況，我院泌尿生殖道感染門診2019年5月至2020年5月采用實時熒光定量PCR檢測2 699例分泌物標(biāo)本的沙眼衣原體DNA，檢測2 134例分泌物標(biāo)本的解脲脲原體DNA，現(xiàn)對檢測結(jié)果進(jìn)行回顧分析，以期為本地區(qū)女性生殖道感染疾病的臨床診治提供實驗室依據(jù)，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 納入2019年5月至2020年5月我院泌尿生殖道感染門診女性生殖道分泌物標(biāo)本作為研究對象，其中2 699例分泌物標(biāo)本以實時熒光定量PCR檢測沙眼衣原體DNA，2 134例分泌物標(biāo)本以實時熒光定量PCR檢測解脲脲原體DNA，年齡分布11～60歲，平均年齡（35.78±11.05）歲。所有患者知情同意并簽署知情同意書，本研究已獲得我院倫理委員會的批準(zhǔn)。

1.2 檢驗儀器與試劑 ①檢驗儀器：AFD9600實時熒光定量PCR儀，Min 1424高速離心機(jī)，TZL32干式恒溫器，MIX-2500迷你混合儀，冰箱，BIO-DL可調(diào)移液器。②檢驗試劑：沙眼衣原體熒光定量檢測試劑盒（達(dá)安基因），解脲脲原體熒光定量檢測試劑盒（達(dá)安基因）。③檢驗耗材：無菌棉拭子，無菌生理鹽水，一次性無菌手套，Tip頭，1.5 mL Eppendorf管。

1.3 方法 ①標(biāo)本采集與處理：采用實時熒光定量PCR檢測分泌物標(biāo)本沙眼衣原體DNA、解脲脲原體DNA。以無菌棉拭子常規(guī)采集女性生殖道分泌物，將采集到的分泌物標(biāo)本加入生理鹽水1 mL后震蕩混勻，置于1.5 mL離心管中。以離心機(jī)離心，12 000 r/min離心5 min。棄上清，沉淀加入1 mL生理鹽水混勻，12 000 r/min離心5 min，再重復(fù)洗滌1次。去上清，沉淀中加入50 uL DNA提取液充分混勻，將其100 ℃恒溫處理，時間為10 min；而后再次進(jìn)行離心，12 000 r/min離心2 min，備用。②PCR擴(kuò)增方法：嚴(yán)格按照沙眼衣原體熒光定量檢測試劑盒、解脲脲原體熒光定量檢測試劑盒進(jìn)行操作，取若干PCR反應(yīng)管，分別加入處理后的樣品上清液2 μL，離心數(shù)秒，具體參數(shù)為8 000 r/min，而后置入AFD9600擴(kuò)增儀樣品槽。具體循環(huán)條件如下：93 ℃，2 min；93 ℃，45 s；55 ℃，120 s；10個循環(huán)。93 ℃，45 s；55 ℃，120 s；30個循環(huán)。③檢驗結(jié)果判讀：陽性為增長曲線呈S形，Ct值低于27為陽性；陰性為增長曲線不呈S形，Ct值超過30提示標(biāo)本DNA含量低于檢測下線；試驗灰度區(qū)為Ct值在27～30之間表示為試驗灰度區(qū)，出現(xiàn)此類情況后重復(fù)進(jìn)行1次試驗，按照前2項標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判斷。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用描述性方法對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。計量資料采用（）表示，組間比較行t檢驗；計數(shù)資料采用[n（%）]表示，組間比較行χ2檢驗；P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 女性生殖道沙眼衣原體、解脲脲原體陽性率分析 2019年5月至2020年5月我院女性生殖道沙眼衣原體共檢測2 699例，女性生殖道解脲脲原體檢測共2 134例。見表1。

表1 女性生殖道沙眼衣原體、解脲脲原體陽性率情況

2.2 女性生殖道沙眼衣原體、解脲脲原體感染者年齡分布 186例女性生殖道沙眼衣原體感染者中病例數(shù)排名前3位的年齡段分別為21～30歲（85例）、31～40歲（82例）、41～50歲（14例）。見表2。917例女性生殖道解脲脲原體感染者中病例數(shù)排名前3位的年齡段分別為31～40歲（417例）、21～30歲（238例）、41～50歲（187例）；見表3。

表2 186例女性生殖道沙眼衣原體感染者年齡分布情況

表3 917例女性生殖道解脲脲原體感染者年齡分布情況

3 討 論

3.1 生殖道沙眼衣原體感染分析 沙眼衣原體感染與多種疾病存在關(guān)聯(lián)，近年來因生殖道沙眼衣原體感染的性傳播疾病呈逐步增加態(tài)勢而被廣泛關(guān)注。生殖道沙眼衣原體感染人群十分廣泛，疾病類型呈現(xiàn)多樣性和復(fù)雜性，不僅可以導(dǎo)致多種并發(fā)癥，還會產(chǎn)生較為嚴(yán)重的后遺癥[4]。在生物學(xué)特性方面，沙眼衣原體在細(xì)胞內(nèi)發(fā)育時候具有特征性的發(fā)育周期，其中小而致密的原體存在于細(xì)胞之外，有著較強(qiáng)的感染性，大而疏松的網(wǎng)狀體無感染性；但當(dāng)小而致密的原體感染宿主細(xì)胞后可在其中形成包涵體并進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為網(wǎng)狀體，進(jìn)而利用宿主細(xì)胞營養(yǎng)不斷繁殖直至成熟后從包涵體中釋放出來，隨著被感染細(xì)胞的死亡和破裂而溢出細(xì)胞，進(jìn)一步感染其他細(xì)胞[5-6]。沙眼衣原體是衣原體屬中與人類關(guān)系最為密切的種株之一，可從泌尿道感染并進(jìn)一步侵襲生殖道上皮，故在泌尿生殖道感染門診中，沙眼衣原體DNA檢測是較為常見的檢驗項目之一。

在流行病學(xué)方面，泌尿生殖道感染是沙眼衣原體感染的主要類型，感染沙眼衣原體除了引發(fā)泌尿生殖道疾病外，還可以誘發(fā)Reiter綜合征、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎等較為嚴(yán)重的并發(fā)癥，且泌尿生殖道沙眼衣原體感染還大大增加了人類免疫缺陷病毒的感染風(fēng)險，也是女性群體宮頸癌發(fā)生率增加的重要危險因素之一[7]。沙眼衣原體感染多發(fā)于性活動活躍的人群之中，近年來逐年呈現(xiàn)年輕化趨勢，因生殖道沙眼衣原體感染所導(dǎo)致的疾病頻發(fā)給社會經(jīng)濟(jì)帶來了嚴(yán)重負(fù)擔(dān)[8]。國外臨床研究表明，女性生殖道沙眼衣原體感染多見于性活躍女性群體，且年齡＜25歲、低收入水平、不使用安全套者生殖道沙眼衣原體感染率較高[9]。在進(jìn)入21世紀(jì)以來，我國因沙眼衣原體感染導(dǎo)致的泌尿生殖道疾病也呈現(xiàn)上升趨勢，嚴(yán)重影響公共健康?，F(xiàn)階段我國泌尿生殖道沙眼衣原體感染已位居性傳播疾病的第3位，成為危害國民公共健康的一大隱患。國內(nèi)臨床研究結(jié)果顯示，女性生殖道沙眼衣原體感染的易感年齡在22～44歲，導(dǎo)致女性生殖道沙眼衣原體感染的主要危險因素為受教育水平、收入水平、性生活是否采取保護(hù)措施、是否有配偶或固定性伴侶等[10-12]。但這一研究結(jié)果并不能準(zhǔn)確反映女性生殖道沙眼衣原體感染的實際情況，很多生殖道沙眼衣原體感染的女性群體因無明顯臨床癥狀不會主動到醫(yī)院就醫(yī)或篩查，故很大一部分感染者無法納入統(tǒng)計。

3.2 生殖道解脲脲原體感染分析 解脲脲原體也被稱為溶脲脲原體。20世紀(jì)50年代首次在非淋菌性尿道炎患者尿道中分離出解脲脲原體。解脲脲原體的體積很小，無細(xì)胞壁，介于細(xì)菌與病毒之間，是現(xiàn)階段無生命培養(yǎng)基中能夠生長繁殖的最小微生物，且具有較強(qiáng)的溫度改變能力與抵御干燥環(huán)境的能力。臨床普遍認(rèn)為，解脲脲原體是非淋病性泌尿生殖系統(tǒng)炎癥的主要病原體，女性生殖道解脲脲原體感染后可引發(fā)多種疾病，如非淋病性尿道炎、非特異性尿道炎、生殖道感染等。對于妊娠期間的女性而言，生殖道解脲脲原體感染還會引發(fā)胎膜早破、早產(chǎn)兒呼吸窘迫綜合征等圍生期疾病[13-14]。近年來，生殖系統(tǒng)感染性疾病發(fā)病率逐年遞增，國內(nèi)外學(xué)者對于生殖道解脲脲原體感染的具體致病機(jī)制目前尚未明確。目前得到廣泛認(rèn)可的觀點主要有2種：一種是認(rèn)為解脲脲原體有著多種酶活性，可引起細(xì)胞間質(zhì)的壞死和纖毛損傷，進(jìn)而產(chǎn)生大量的分泌物，臨床上表現(xiàn)為尿頻、尿急、尿痛、白帶增多等，一些患者尿液中甚至可以發(fā)現(xiàn)大量黏膜上皮細(xì)胞脫落[15]；另一種觀點則更加傾向于免疫損傷，解脲脲原體吸附在宿主細(xì)胞上之后，會與宿主細(xì)胞膜產(chǎn)生一定的作用，并開始爭奪宿主細(xì)胞的營養(yǎng)進(jìn)而導(dǎo)致宿主細(xì)胞染色體異常，影響宿主細(xì)胞蛋白質(zhì)與DNA的合成，在這一過程中解脲脲原體代謝所產(chǎn)生的產(chǎn)物還會引起宿主細(xì)胞損傷、病變甚至是死亡。盡管目前在大量正常健康人群泌尿生殖道中也會有解脲脲原體較高檢出率的相關(guān)報道，但更多學(xué)者還是傾向于解脲脲原體具有一定的致病性，但這些說法還有待進(jìn)一步證實[16]。不同地區(qū)、不同人群、不同年齡生殖道解脲脲原體感染情況仍然不是很明確，因此基于解脲脲原體DNA檢驗研究女性生殖道解脲脲原體感染具有重要的臨床指導(dǎo)意義。

3.3 生殖道沙眼衣原體、解脲脲原體的檢驗 沙眼衣原體、解脲脲原體感染泌尿生殖道后感染者多無顯著臨床癥狀或呈現(xiàn)出亞臨床癥狀，缺乏較為特異性的臨床表現(xiàn)，導(dǎo)致很多感染者無法及時就醫(yī)。感染者能夠保持?jǐn)y帶病原體狀態(tài)較長時間，并成為生殖道沙眼衣原體、解脲脲原體感染的潛在傳染源[17]。如感染者免疫力下降或病原體感染時間較長會引發(fā)炎癥狀態(tài)，并出現(xiàn)嚴(yán)重的晚期并發(fā)癥。故早期、及時的篩查生殖道沙眼衣原體、解脲脲原體感染情況對于泌尿生殖道疾病防治具有重要意義?，F(xiàn)階段生殖道沙眼衣原體、解脲脲原體檢驗的方法主要有細(xì)胞培養(yǎng)法、直接涂片法、免疫學(xué)方法、分子生物學(xué)方法等。其中細(xì)胞培養(yǎng)法的技術(shù)較為成熟，但耗材價格較高、培養(yǎng)周期較長、靈敏度較低，并且在培養(yǎng)過程中可能存在其他細(xì)菌、真菌等微生物的污染，因影響因素眾多且對環(huán)境與操作技術(shù)等要求較高，不適用于生殖道沙眼衣原體的大規(guī)模篩查，故限制了這一方法的臨床應(yīng)用。直接涂片法具有費用低廉、操作簡便等優(yōu)勢，但陽性率較低，不適用于生殖道沙眼衣原體、解脲脲原體的檢查[18]。膠體金法在生殖道沙眼衣原體、解脲脲原體檢驗中應(yīng)用較多，具有廉價、簡便快捷等優(yōu)勢，但靈敏度較低，不適用于非典型生殖道沙眼衣原體、解脲脲原體的檢驗。直接熒光抗體法也可以用于生殖道沙眼衣原體、解脲脲原體的檢驗，但熒光法需要較為昂貴的熒光顯微鏡設(shè)備且對檢驗人員的操作標(biāo)準(zhǔn)與技術(shù)要求較高，不適用于大批量標(biāo)本的篩查，對于低危人群、無癥狀人群的篩查價值有限[19]。PCR檢測具有檢驗周期短、操作簡便、靈敏度高等優(yōu)勢，在女性生殖道沙眼衣原體、解脲脲原體檢驗中，可采用尿液標(biāo)本、宮頸拭子、陰道拭子、尿道拭子等多種樣本，且PCR試劑盒檢測基因位點能夠滿足大量目標(biāo)人群的快速檢測，隨著PCR操作技術(shù)的不斷發(fā)展和日趨成熟，進(jìn)行PCR檢驗可有效避免污染因素并能廣泛開展，適用于普通人群及重點人群的生殖道沙眼衣原體、解脲脲原體感染篩查[20]。

本組研究中采用實時熒光定量PCR檢測2 699例分泌物標(biāo)本的沙眼衣原體DNA，檢測2 134例分泌物標(biāo)本的解脲脲原體DNA。其中沙眼衣原體陽性186例，陽性率為6.89%；解脲脲原體陽性917例，陽性率為42.97%。上述研究結(jié)果提示，解脲脲原體的陽性檢出率更高，表明其可能是女性生殖道感染防治的重要病原體，因解脲脲原體為女性生殖道正常居住的微生物，與其他微生物共生，在感染后感染者可能無明顯臨床癥狀，機(jī)體免疫力下降時或出現(xiàn)黏膜受損時解脲脲原體可大量繁殖而致病。在年齡分布方面，本研究中女性生殖道沙眼衣原體感染者中病例數(shù)排名前3位的年齡段分別為21～30歲、31～40歲、41～50歲；女性生殖道解脲脲原體感染者中病例數(shù)排名前3位的年齡段分別為31～40歲、21～30歲、41～50歲。由此提示，21～50歲是女性生殖道沙眼衣原體、解脲脲原體感染的高發(fā)群體，針對這一年齡范圍的女性人群應(yīng)加強(qiáng)性健康知識教育，并重視易感人群的早期篩查檢驗。

綜上所述，鑒于生殖道沙眼衣原體、解脲脲原體感染的隱匿性與危害性，臨床迫切需要將生殖道沙眼衣原體、解脲脲原體檢查作為一項常規(guī)檢驗項目更多應(yīng)用于就醫(yī)人群及體檢人群，以減少沙眼衣原體、解脲脲原體感染所帶來的危害。因目前女性生殖道沙眼支原體、解脲脲原體的臨床篩查工作有待健全，針對的人群范圍較為有限，未來應(yīng)增加臨床檢驗篩查的覆蓋面積，針對重點人群、高危人群重點篩查，以實現(xiàn)生殖道沙眼衣原體、解脲脲原體感染的早期診斷與有效防治，最終達(dá)到減少或抑制生殖道沙眼衣原體、解脲脲原體感染流行的目的。