姜瑞婕 ，張心怡 ，夏茂華，趙素芬，王運(yùn)盛，普天春，張成林，范開(kāi)

（1.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，北京，100193；2.北京動(dòng)物園，北京，100044）

大熊貓（Ailuropoda melanoleuca）是陸地哺乳動(dòng)物中最瀕危的物種之一，在世界范圍內(nèi)具有重要的學(xué)術(shù)研究?jī)r(jià)值［1?2］。由于圈養(yǎng)動(dòng)物管理和獸醫(yī)技術(shù)的進(jìn)步，許多注射麻醉劑組合已被用于固定大熊貓，其中美托咪定-替來(lái)他明-唑拉西泮（medetomidinetiletamine-zolazepam，MTZ）較常用，已有使用MTZ 對(duì)野外大熊貓麻醉的相關(guān)報(bào)道［3］，但關(guān)于大熊貓血液方面各基礎(chǔ)數(shù)據(jù)的研究有限，特別是有關(guān)大熊貓?jiān)诼樽砼c非麻醉狀態(tài)下血液流變值的測(cè)定，以及麻醉前后血液流變值的比較分析更是鮮有報(bào)道。因此，全面系統(tǒng)地測(cè)定和分析大熊貓?jiān)诜锹樽砼c麻醉狀態(tài)下的血液基礎(chǔ)數(shù)值，有重要的理論參考價(jià)值和科研價(jià)值。許多國(guó)內(nèi)外獸醫(yī)工作者開(kāi)始把血液流變學(xué)應(yīng)用在獸醫(yī)臨床上，特別是在外科手術(shù)與麻醉的研究中［4?9］。有研究表明，麻醉使動(dòng)物血液流變學(xué)發(fā)生一定程度的變化，吸入麻醉劑或使用非揮發(fā)性麻醉劑的全身麻醉會(huì)導(dǎo)致動(dòng)物微循環(huán)發(fā)生顯著變化［8］，血液流變學(xué)很大程度上影響外科手術(shù)和術(shù)后階段，血液流變學(xué)紊亂可能直接誘發(fā)并發(fā)癥［10?12］。

本試驗(yàn)全面系統(tǒng)地檢測(cè)了舍飼大熊貓4 項(xiàng)血常規(guī)指標(biāo)、10 項(xiàng)血液生化指標(biāo)和22 項(xiàng)血液流變值，對(duì)所測(cè)數(shù)值進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，明確大熊貓?jiān)诜锹樽砼c麻醉狀態(tài)下各項(xiàng)指標(biāo)間的差異，試驗(yàn)結(jié)果將為研究珍稀物種大熊貓?zhí)峁┍匾摹⑤^全面的參考數(shù)據(jù)，為舍飼大熊貓的合理飼養(yǎng)和醫(yī)療提供參考。

1 材料與方法

1.1 基本情況

表1 大熊貓基本信息Tab.1 Basic information of giant pandas

1.2 麻醉藥品及劑量

將舒泰50 注射液，即替來(lái)他明-唑拉西泮（tiletamine-zolazepam，TZ；2 mg/kg，5 mg/mL；法國(guó)維克有限公司）和鹽酸右美托嘧啶注射液，即右美托咪定（dexmedetomidine，dexM；8 μg/kg，0.5 mg/mL；碩騰生物制藥有限公司）注射至大熊貓?bào)y部外側(cè)部位。

1.3 血液采樣

麻醉前對(duì)大熊貓進(jìn)行非麻醉體檢，4只大熊貓經(jīng)正向訓(xùn)練均可在不麻醉固定的情況下配合采集血液。采集大熊貓前肢頭靜脈的血液樣本，血量為 5 mL，置于EDTA 抗凝管中保存，在30 min 內(nèi)完成全血細(xì)胞計(jì)數(shù)、血清生化和血液流變學(xué)指標(biāo)檢測(cè)。

1 周后，對(duì)4 只大熊貓注射麻醉藥物，在進(jìn)入外科麻醉期后立即采血。采集大熊貓前肢頭靜脈的血液樣本，血量為5 mL，置于EDTA 抗凝管中保存，在30 min內(nèi)完成血液相關(guān)檢測(cè)。

1.4 血樣處理

血液常規(guī)檢測(cè)包括4 項(xiàng)內(nèi)容，即紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血紅蛋白和紅細(xì)胞壓積。血細(xì)胞計(jì)數(shù)采用人工鏡檢的方式，由檢驗(yàn)科人員在血細(xì)胞計(jì)數(shù)板上完成計(jì)數(shù)。血紅蛋白數(shù)據(jù)由血紅蛋白儀測(cè)定，在5 mL 稀釋好的文齊氏液中加入20 μL 全血，搖勻后放置 5 min 后測(cè)定。紅細(xì)胞壓積使用溫氏法測(cè)定，離心機(jī)轉(zhuǎn)速為12 000 r/min，時(shí)間為5 min，使用比數(shù)板讀數(shù)。

血液生化指標(biāo)檢測(cè)包括10 項(xiàng)內(nèi)容，即總蛋白、白蛋白、球蛋白、總膽紅素、血糖、肌酐、尿素氮、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、堿性磷酸酶和淀粉酶。用日本FUJIFILM全自動(dòng)生化分析儀和對(duì)應(yīng)檢測(cè)試劑板測(cè)定。

血液流變學(xué)指標(biāo)檢測(cè)包括22 項(xiàng)內(nèi)容，即全血低、中、高切黏度，還原低、中、高切黏度，相對(duì)低、中、高切黏度，血漿黏度，紅細(xì)胞聚集、變形、剛性指數(shù)，血沉，血沉方程K值，紅細(xì)胞電泳時(shí)間，卡松黏度，卡松屈服應(yīng)力，纖維蛋白原以及流阻低、中、高切。以上指標(biāo)使用HT-100A 型血流變黏度測(cè)試儀（淄博恒拓分析儀器有限公司）檢測(cè)，全血黏度切變率為3、30、200 s-1，血漿黏度在抗凝血離心分離后測(cè)定。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

應(yīng)用SPSS 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)算大熊貓血液指標(biāo)和血液流變值指標(biāo)的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差，經(jīng)ANOVA檢驗(yàn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（α=0.05），使用配對(duì)t檢驗(yàn)分析顯著差異。

1.6 道德規(guī)范

根據(jù)官方指南和規(guī)則進(jìn)行本試驗(yàn)，并獲得了北京動(dòng)物園的知情同意以收集相關(guān)數(shù)據(jù)。

2 結(jié)果

2.1 麻醉監(jiān)測(cè)

通過(guò)對(duì)大熊貓可視黏膜顏色、毛細(xì)血管再充盈時(shí)間、呼吸頻率、心率和體溫的監(jiān)測(cè)，發(fā)現(xiàn)注射麻醉劑5 min 后大熊貓行為活動(dòng)明顯減緩，呼吸頻率升高，心率降低。在5～10 min 大熊貓平穩(wěn)進(jìn)入外科麻醉期，可視黏膜顏色逐漸恢復(fù)粉紅色，肢體肌肉張力和眼瞼反射消失，舌頭可自由拉出，呼吸頻率降低，心率維持在77～81次/min。麻醉固定持續(xù)時(shí)間為1 h 左右，期間大熊貓無(wú)嘔吐或失禁等不良反應(yīng)，過(guò)程較為平穩(wěn)。對(duì)麻醉過(guò)程中大熊貓的基礎(chǔ)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果如表2所示。

表2 大熊貓麻醉過(guò)程中的基礎(chǔ)體征Tab.2 Basic signs of giant panda during anesthesia

2.2 血細(xì)胞和生化指標(biāo)

使用右美托咪定-替來(lái)他明-唑拉西泮（dexmedetomidine-tiletamine-zolazepam，dexMTZ）對(duì)大熊貓麻醉后，4 項(xiàng)血常規(guī)指標(biāo)均上升，但無(wú)顯著差異；10 項(xiàng)血液生化指標(biāo)中，TP、GLB、Cr、BUN、ALT、ALP 和AMY 較麻醉前有所上升，ALB、TBIL 和GLU有所下降，但無(wú)論升降，變化均無(wú)顯著性差異，且在正常范圍內(nèi)（表3）。dexMTZ麻醉方案不會(huì)對(duì)大熊貓的血細(xì)胞和生化指標(biāo)造成顯著影響。

表3 麻醉前后血常規(guī)和生化指標(biāo)差異Tab.3 Changes in blood routine and biochemical index before and after anesthesia

2.3 血液黏度和紅細(xì)胞流變學(xué)

麻醉后的大熊貓全血黏度低、中、高切，血沉方程K值，紅細(xì)胞電泳時(shí)間，卡松黏度，卡松屈服應(yīng)力，纖維蛋白原，流阻低、中、高切11 項(xiàng)指標(biāo)與麻醉前相比，呈現(xiàn)顯著上升趨勢(shì)（p<0.05，表4）。舍飼大熊貓麻醉后的血液黏度較麻醉前顯著升高。

表4 麻醉前后血液流變學(xué)指標(biāo)變化Tab.4 Changes in hemorheology indexes before and after anesthesia

3 分析與討論

試驗(yàn)期間選擇的麻醉劑量（dexM，8 μg/kg；TZ，2 mg/kg）能使大熊貓的麻醉固定時(shí)間持續(xù)1 h 左右，無(wú)嘔吐或失禁等不良反應(yīng)，整個(gè)麻醉過(guò)程較為平穩(wěn)。舍飼大熊貓麻醉后的血常規(guī)和生化指標(biāo)較麻醉前無(wú)顯著差異，說(shuō)明dexMTZ 麻醉組合不會(huì)對(duì)大熊貓的肝、腎等器官產(chǎn)生明顯損害，但從血液流變學(xué)檢測(cè)數(shù)據(jù)看，大熊貓麻醉后的全血黏度、血流阻力、纖維蛋白原和血沉方程K值、紅細(xì)胞電泳時(shí)間、卡松黏度和卡松屈服應(yīng)力較麻醉前顯著升高，即血液黏度較麻醉前有明顯升高，提示大熊貓?jiān)诼樽砗蟠嬖谘h(huán)障礙的風(fēng)險(xiǎn)。

全身麻醉可誘導(dǎo)內(nèi)分泌、免疫和代謝反應(yīng)［15］。除去特別藥物的影響，出現(xiàn)上述結(jié)果可能是由于所有麻醉方式幾乎都會(huì)影響機(jī)體肌肉的松弛程度和間歇正壓呼吸，同時(shí)會(huì)改變小動(dòng)脈和小靜脈的直徑以及對(duì)應(yīng)激的反應(yīng)［14］（即兒茶酚胺刺激或出血），再加上動(dòng)脈壓和心排血量的下降，導(dǎo)致一般麻醉都會(huì)對(duì)機(jī)體微循環(huán)產(chǎn)生影響。因此，結(jié)合本試驗(yàn)數(shù)據(jù)，推測(cè)在紅細(xì)胞壓積沒(méi)有降低的情況下，麻醉后的血黏度上升可能與微循環(huán)血液分配不均及纖溶系統(tǒng)的激活有關(guān)。同時(shí)，纖維蛋白原升高的黏度和聚集增加，有較高形成血栓的風(fēng)險(xiǎn)，提示麻醉有發(fā)生微循環(huán)障礙及動(dòng)靜脈血栓形成的可能［10］。今后，應(yīng)進(jìn)一步研究麻醉大熊貓的通氣和氧合作用，并在手術(shù)開(kāi)始前干預(yù)改善大熊貓的血液流變學(xué)，以提高大熊貓麻醉的安全性。