管詠梅，雷方方，王舒慧，朱衛(wèi)豐，陳麗華，吳 璇，陳穎翀

雷公藤甲素經(jīng)皮給藥制劑的研究與篩選

管詠梅，雷方方，王舒慧，朱衛(wèi)豐，陳麗華，吳 璇*，陳穎翀*

江西中醫(yī)藥大學(xué) 現(xiàn)代中藥制劑教育部重點實驗室，江西 南昌 330004

為降低雷公藤甲素經(jīng)皮給藥刺激性、提高經(jīng)皮滲透性，篩選雷公藤甲素經(jīng)皮給藥載體，為雷公藤甲素經(jīng)皮給藥新型給藥系統(tǒng)的開發(fā)奠定基礎(chǔ)。制備雷公藤甲素立方液晶、醇質(zhì)體、膠束、凝膠等制劑，采用動態(tài)透析釋藥法考察雷公藤甲素不同劑型的體外釋藥特性；采用改良的Franz擴散池法考察雷公藤甲素不同劑型體外經(jīng)皮滲透性能；通過皮膚刺激性實驗評價雷公藤甲素不同劑型皮膚刺激性減毒效果。雷公藤甲素立方液晶、醇質(zhì)體、膠束、凝膠8 h累積釋放度分別為（51.40±1.19）%、（100.67±1.37）%、（89.25±4.27）%、（42.61±4.27）%，24 h累積滲透量分別為（0.46±0.02）、（0.48±0.04）、（0.44±0.03）、（0.27±0.02）mg/cm2。皮膚刺激性結(jié)果表明，雷公藤甲素立方液晶、醇質(zhì)體、膠束均呈輕度刺激性，而凝膠為中等刺激性。雷公藤甲素不同劑型有著不同特性，相較醇質(zhì)體、膠束、凝膠而言，雷公藤甲素立方液晶有良好的緩控釋作用和經(jīng)皮滲透效果，同時能顯著降低雷公藤甲素的皮膚刺激性，是雷公藤甲素經(jīng)皮給藥最佳劑型。

雷公藤甲素；立方液晶；醇質(zhì)體；膠束；凝膠；體外釋放；經(jīng)皮滲透性；皮膚刺激性

雷公藤甲素（triptolide，TP）是從雷公藤Hook. f.中提取的一種天然環(huán)氧二萜內(nèi)酯類化合物，具有抗炎、抗腫瘤、免疫抑制等多種藥理活性[1-3]，在治療類風濕性關(guān)節(jié)炎、胰腺炎、乳腺癌、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等疾病中具有獨特優(yōu)勢[4-5]，但因其水溶性差、生物利用度低、半衰期短、治療窗口窄、長期服用具有嚴重的全身毒性等缺點[6-9]，限制了其臨床應(yīng)用。

經(jīng)皮給藥不僅能避免肝臟首過效應(yīng)以及胃腸道不良反應(yīng)，同時具有無痛、易操作、安全性高、患者依從性高等優(yōu)點。透皮給藥的療效取決于藥物透過皮膚的角質(zhì)層屏障的能力[3]，課題組前期對雷公藤經(jīng)皮給藥進行了系統(tǒng)研究，研究結(jié)果表明，雷公藤經(jīng)皮給藥能顯著降低其的不良反應(yīng)，且治療類風濕性關(guān)節(jié)炎效果確切[10-11]，但TP水溶性差、生物利用度低，且經(jīng)皮給藥具有皮膚刺激性。近年來新劑型因具有增加難溶性藥物溶解度、提高生物利用度、促進吸收、靶向作用、緩控釋作用等優(yōu)點而受到廣泛關(guān)注[12-13]，而醇質(zhì)體、立方液晶、膠束等新型給藥系統(tǒng)均具有緩控釋、靶向等作用，且皮膚刺激性小、生物利用度高[14-15]。

因此，本實驗擬制備雷公藤甲素立方液晶（lipid cubic liquid crystalline nanoparticles，LCNPs）（TP@LCNPs）、醇脂體（ethosomes，ES）（TP@ES）、膠束（micelles，MS）（TP@MS）及凝膠（gel，GL）（TP@GL）等給藥載體，采用體外釋放實驗、體外經(jīng)皮滲透性實驗、皮膚刺激性實驗對制劑進行評價，以期篩選出TP經(jīng)皮給藥毒性低、生物利用度高、且具有長效作用的劑型，為雷公藤甲素新型給藥系統(tǒng)的開發(fā)奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

BSA224S型電子天平，賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司；ZNCL-BS1型智能磁力攪拌器，鞏義市玉華儀器有限責任公司；TGL-20MC型高速冷凍離心機，湖南湘鑫儀器儀表有限公司；JY92-IIN型超聲波細胞粉碎機，寧波新芝生物科技有限公司；EYEL4型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海愛朗儀器有限公司；SHB-III型循環(huán)水式多用真空泵，鄭州長城科貿(mào)有限公司；KQ-500E型超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；TT-6D Franz型擴散池，天津正通科技有限公司；Zetasizer Nano-S型納米粒度儀及分析軟件，英國Malvern公司；ECLIPSE Ci-S型正置顯微鏡，日本Nikon公司；Agilent 1260 HPLC系統(tǒng)化學(xué)工作站，美國Agilent公司；色譜柱：Ace Excel 5 C18柱（250 mm×4.8 mm，5.0 μm），廣州菲羅門科學(xué)儀器有限公司。

1.2 材料

TP對照品，批號21070204，質(zhì)量分數(shù)99.11%，成都普菲德生物技術(shù)有限公司；單油甘油酸酯，批號ECN203-827-7，東京化成工業(yè)株式會社；泊洛沙姆407，批號GND32821B，巴斯夫股份有限公司；大豆卵磷脂，批號SY-SO-200801，艾偉拓醫(yī)藥科技有限公司；卡波姆940，批號C12058025，上海麥克林生化科技有限公司；泊洛沙姆P123，批號MKCL5494，西格瑪奧德里奇（上海）貿(mào)易有限公司；氨基甲酸乙酯，批號RH396520，上海易恩化學(xué)技術(shù)有限公司；丙二醇，批號RH167722，上海易恩化學(xué)技術(shù)有限公司；丙三醇，批號2109072，西隴科學(xué)股份有限公司；多聚甲醛組織固定液，批號21321635，Biosharp公司；乙醇，批號2201259，體積分數(shù)95%，西隴科學(xué)有限公司；甲醇，批號DW1BH121802，色譜純，弗頓公司；其余試劑均為分析純。

1.3 動物

健康SPF級SD大鼠，雄性27只，雌性15只，購自江西中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心，許可證號SCXK（贛）2018-0003，體質(zhì)量（200±20）g。所有動物實驗遵循江西中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗倫理委員會有關(guān)實驗動物管理和使用的規(guī)定，符合3R原則。

2 方法與結(jié)果

2.1 TP含量測定方法

2.1.1 色譜條件 色譜柱為Ace Excel 5 C18柱（250 mm×4.8 mm，5.0 μm）；UV檢測器、Agilent 1260 HPLC系統(tǒng)化學(xué)工作站，美國Agilent公司；流動相為甲醇-水（50∶50）；檢測波長218 nm；體積流量0.8 mL/min；柱溫35 ℃；進樣量20 μL。

2.1.2 對照品溶液及供試品溶液的制備

（1）對照品溶液的制備：精密稱取10 mg TP對照品于50 mL量瓶中，使用60%甲醇溶液溶解后，使用流動相進行定容，取1 mL過0.22 μm濾膜于進樣瓶，即制得200 μg/mL對照品溶液。

（2）空白LCNPs溶液的制備：取0.5 mL空白LCNPs于50 mL量瓶中，用60%甲醇溶液溶解后，使用流動相進行定容，取1 mL過0.22 μm濾膜于進樣瓶，即得。

（3）TP@LCNPs供試品溶液的制備：取0.5 mL TP@LCNPs于50 mL量瓶中，用60%甲醇溶液溶解后，使用流動相進行定容，取1 mL過0.22 μm濾膜于進樣瓶，即得。

（4）TP@ES供試品溶液的制備：取0.5 mL TP@ES于50 mL量瓶中，用60%甲醇溶液溶解后，使用流動相進行定容，取1 mL過0.22 μm濾膜于進樣瓶，即得。

（5）TP@MS供試品溶液的制備：取0.5 mL TP@MS于50 mL量瓶中，用60%甲醇溶液溶解后，使用流動相進行定容，取1 mL過0.22 μm濾膜于進樣瓶，即得。

（6）TP@GL供試品溶液的制備：取0.5 g TP@GL于50 mL量瓶中，用60%甲醇溶液溶解后，使用流動相進行定容，取1 mL過0.22 μm濾膜于進樣瓶，即得。

2.1.3 專屬性考察 分別取空白LCNPs溶液、TP對照品溶液、TP不同劑型供試品溶液，按照“2.1.1”項色譜條件下進行分析，記錄色譜圖，如圖1所示。

2.1.4 線性關(guān)系考察 取“2.1.2”項下對照品溶液，并以此溶液作為母液，采用甲醇溶液將其分別稀釋為2、10、20、40、80、100、160、200 μg/mL溶液，按照“2.1.1”項色譜條件下進行分析，每個樣品進樣3次，記錄其峰面積。以質(zhì)量濃度為橫坐標（），峰面積為縱坐標（），對結(jié)果進行線性回歸。計算所得線性方程為＝45.751＋26.357，2＝1.000 0，RSD均小于2%，結(jié)果表明TP在2～200 μg/mL呈良好的線性關(guān)系。

2.1.5 精密度試驗 分別取TP低、中、高質(zhì)量濃度（2、80、200 μg/mL）的對照品溶液，按照“2.1.1”項色譜條件下進行分析，每個樣品重復(fù)進樣6次，記錄對應(yīng)的峰面積。結(jié)果表明，日內(nèi)精密度分別為0.18%、0.22%、0.22%，日間精密度分別為0.74%、0.68%、0.51%，表明儀器精密度良好。

2.1.6 加樣回收率試驗 分別取6份1 mL已知質(zhì)量濃度的TP@LCNPs供試品溶液，分別與1 mL的TP對照品溶液（200 μg/mL）混合均勻，按照“2.1.1”項色譜條件下進行分析，每個樣品重復(fù)進樣3次，記錄對應(yīng)的峰面積，計算得其平均加樣回收率為103.17%，RSD值為0.59%，表明該方法的準確性良好，適用于TP的含量測定。

2.1.7 重復(fù)性試驗 平行制備6份TP@LCNPs供試品溶液，按照“2.1.1”項色譜條件下進行分析，每個樣品重復(fù)進樣3次，記錄對應(yīng)的峰面積。計算TP質(zhì)量濃度的RSD為0.32%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.1.8 穩(wěn)定性試驗 精密量取同一份TP@LCNPs供試品溶液，分別在0、2、4、8、12、24 h按照“2.1.1”項色譜條件下進行分析，記錄對應(yīng)的峰面積。計算得RSD值為0.42%，表明供試品溶液穩(wěn)定性良好。

圖1 空白LCNPs溶液(A)、TP對照品溶液(B)、TP@ LCNPs (C)、TP@ES (D)、TP@MS (E)、TP@GL (F)的HPLC圖

2.2 TP不同制劑的制備

2.2.1 TP@LCNPs的制備 精密稱取72 mg單油酸甘油酯和8 mg TP溶于適量乙醇，加熱攪拌溶解，作為A相，精密稱量8 mg泊洛沙姆407溶于適量超純水中，加熱攪拌溶解，作為B相。將B相緩慢滴加于A相中，以300 r/min轉(zhuǎn)速于45 ℃下磁力攪拌、再超聲，即得。

2.2.2 TP@ES的制備 精密稱取138 mg大豆卵磷脂、27.6 mg膽固醇及2.3 mL丙二醇，超聲溶解，加入用5.4 mL乙醇溶解完全的16 mg TP溶液，以500 r/min轉(zhuǎn)速于30 ℃下磁力攪拌混合溶解得醇相，吸取于注射器中；另取適量超純水于燒杯中，磁力攪拌（35 ℃，600 r/min），同時將注射器中醇相緩慢滴加于水相，繼續(xù)水合30 min，再冰浴超聲5 min，即得[16]。

2.2.3 TP@MS的制備 精密稱取124 mg泊洛沙姆407、216 mg泊洛沙姆P123、12 mg TP，加入適量無水乙醇加熱溶解，50 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，得干燥透明的藥膜，加入適量超純水，50 ℃水浴條件下，300 r/min攪拌水合1 h后將所得混懸液，過0.22 μm微孔濾膜，即得[17]。

2.2.4 TP@GL的制備 精密稱取0.4 g卡波姆940于碾缽中，加入適量甘油潤濕并碾磨均勻，加入適量的雙蒸水碾磨，溶脹6 h后加入20 mg TP碾磨均勻即得[18]。

2.3 TP不同制劑包封率、粒徑及電位的測量

2.3.1 粒徑和ζ電位的測定 將TP樣品用雙蒸水稀釋10倍，采用馬爾文納米粒度儀測量粒徑和電位，平行測定3次，記錄粒徑、ζ電位及PDI，具體結(jié)果見表1。

表1 TP透皮制劑包封率、粒徑及ζ電位測定結(jié)果(, n = 3)

“/”代表無法測量

“/” represents unmeasurable

2.3.2 包封率的測定

（1）TP@LCNPs和TP@ES包封率的測定：取0.5 mL TP@LCNPs或TP@ES于50 mL量瓶中，加入60%甲醇溶液，流動相定容至50 mL，取1 mL樣品過0.22 μm微孔濾膜于進樣瓶中等待進樣。再取0.5 mL TP@LCNPs或TP@ES樣品于超濾離心管（截留相對分子質(zhì)量10 000）中，以12 000 r/min離心（離心半徑6.2 cm）15 min，取離心液于進樣瓶中等待進樣。按照“2.1.1”項色譜條件下進行分析，通過公式計算樣品包封率，具體結(jié)果見表1。

包封率＝Lip/tot

Lip為藥物在TP@LCNPs或TP@ES中的量，tot為游離藥物和藥物在TP@LCNPs或TP@ES中的總量

（2）TP@MS包封率的測定：取TP@MS樣品0.5 mL于50 mL量瓶中，加入60%甲醇溶液，流動相定容至50 mL，取1 mL樣品過0.22 μm微孔濾膜按照“2.1.1”項色譜條件下進行分析，測定TP含量，計算制劑中總藥量a。再取過0.22 μm微孔濾膜的TP@MS樣品0.5 mL于50 mL量瓶中，加入60%甲醇溶液，流動相定容至50 mL，取1 mL樣品過0.22 μm微孔濾膜，按照“2.1.1”項色譜條件下進行分析，測定TP含量，計算包載藥物含量b。通過公式計算樣品包封率，具體結(jié)果見表1。

包封率＝b/a

由上述結(jié)果可知，與LCNPs、ES、GL相比，MS的載藥量更低，10～100 nm的粒徑限制了其疏水核中包載的藥量，因此，膠束不利于大量包載藥物。ES與其他制劑相比，表現(xiàn)出更低的包封效率和更小的粒徑，這可能是因為ES體系中高濃度的乙醇使囊泡的流動性過大，導(dǎo)致藥物泄露，包封率降低。與其他制劑相比，GL的粒徑過大，更難以穿透皮膚屏障，限制了其在經(jīng)皮給藥中的應(yīng)用。LCNPs在具有較高的載藥量與包封率的同時，電位也更小，其穩(wěn)定性也更好。

2.4 體外釋放度實驗

2.4.1 TP透皮制劑樣品含藥量測定 分別精密量取TP@LCNPs、TP@ES、TP@MS樣品0.5 mL和0.5 g TP@GL于50 mL量瓶中，加入60%甲醇溶液，流動相定容至50 mL。取1 mL樣品過0.22 μm微孔濾膜于進樣瓶中等待進樣。按照“2.1.1”項色譜條件下進行分析，測量樣品含藥量。

2.4.2 體外釋放度測定 取煮沸10 min并清洗干凈的透析袋（截留相對分子質(zhì)量8000～14 000），分別加入4 mL TP@LCNPs、TP@ES、TP@MS和4 g TP@GL，每組樣品平行實驗3次。將裝有樣品的透析袋同時放入200 mL的20%乙醇生理鹽水的釋放介質(zhì)中，溫度維持37 ℃，以200 r/min磁力攪拌，并在0.083、0.167、0.25、0.5、1、2、3、4、6、8 h時取樣1 mL過0.22 μm微孔濾膜于進樣瓶中，同時補足相應(yīng)體積的釋放介質(zhì)。按照“2.1.1”項色譜條件，測定每個時間點下的樣品中的TP質(zhì)量濃度，通過公式計算累積釋放率，并采用零級動力學(xué)、一級動力學(xué)、Higuchi方程對釋放曲線進行擬合，并計算相關(guān)系數(shù)。結(jié)果見圖2和表2、3。

累積釋放率＝取樣時間點質(zhì)量濃度/樣品初始質(zhì)量濃度

由上述結(jié)果可知，TP@LCNPs、TP@ES、TP@ MS、TP@GL8 h累積釋放率分別為（51.40±1.19）%、（100.67±1.37）%、（89.25±4.27）%、（42.61±4.27）%，通過對TP透皮制劑累積釋放率曲線進行方程擬合，發(fā)現(xiàn)以上4種劑型釋放曲線都符合Higuchi方程，相關(guān)系數(shù)2接近1，擬合較好。然而，TP@ES在8 h累積釋放率己經(jīng)達到（100.67±1.37）%，在8 h內(nèi)已釋放完全，說明緩釋效果不明顯；TP@MS釋放為（89.25±4.27）%，與TP@ES組無顯著性差異，說明緩釋效果也不明顯；而TP@LCNPs和TP@GL的累積釋放率為（51.40±1.19）%和（42.61±4.27）%，顯著小于TP@ES組的累積釋放率（＜0.05），說明TP@LCNPs和TP@GL在8 h內(nèi)具有明顯的緩控釋效果。

圖2 TP透皮制劑體外釋放曲線

表2 TP透皮制劑體外釋放結(jié)果(, n = 3)

表3 TP透皮制劑體外釋放曲線方程擬合(, n = 3)

2.5 體外經(jīng)皮滲透性實驗

2.5.1 大鼠皮膚處理 取健康雄性SD大鼠12只，用25%氨基甲酸乙酯麻醉，剔除大鼠腹毛，剝離出大鼠腹部皮膚，并小心清除皮下組織和脂肪，用生理鹽水洗凈、錫箔紙包被貯存于?20 ℃冰柜中，待用[16,19]。

2.5.2 體外透皮性實驗 從冰柜中取出大鼠皮膚，在室溫下自然解凍半小時，用生理鹽水洗凈，將角質(zhì)層面朝上平鋪固定于改良Franz擴散池上，加入超聲脫氣的20%乙醇生理鹽水，使大鼠皮膚完全接觸到接收液。將接收池置于（37.0±0.2）℃、350 r/min條件下平衡30 min。分別加入2 mL的TP@ES、TP@LCNPs、TP@MS和2 g TP@GL于平衡后的接收池，每組平行實驗3次。將溫度維持37 ℃，以200 r/min磁力攪拌，并在0.5、1、2、3、4、6、8、10、12、24 h時取樣1 mL過0.22 μm微孔濾膜于進樣瓶中，同時補足相應(yīng)體積的釋放介質(zhì)。

按照“2.1.1”項色譜條件，測定每個時間點下樣品中TP的質(zhì)量濃度。按照公式計算單位面積累積滲透量（Q），通過公式計算單位面積累積滲透率（F），并采用零級動力學(xué)、一級動力學(xué)、Higuchi方程對釋放曲線進行擬合，并計算相關(guān)系數(shù)，結(jié)果如圖3和表4、5所示。

F＝Q/載藥量

Q表示時間內(nèi)單位面積累積滲透量，V為每次取樣體積，C為第個時間點測得質(zhì)量濃度，為接收池體積，為有效透皮面積

圖3 TP透皮制劑累積釋放量-時間曲線

表4 TP透皮制劑滲透速率(, n = 3)

與TP@GL比較：*＜0.05

*＜0.05TP@GL

由上述結(jié)果可知，TP@LCNPs、TP@ES、TP@ MS、TP@GL 24 h累積滲透量（24）分別為（0.46±0.02）、（0.48±0.04）、（0.44±0.03）、（0.27±0.017）mg/cm2；累積滲透速率分別為0.018 0、0.020 0、0.017 6、0.015 4 mg/(cm2?h)，且TP@LCNPs、TP@ES和TP@MS的24和F均顯著大于TP@GL（＜0.05）。同時對累積釋放量-時間曲線進行方程擬合，發(fā)現(xiàn)以上劑型釋放曲線都符合Higuchi方程，表明TP@LCNPs、TP@ES、TP@MS和TP@GL均具有緩釋作用。另外，根據(jù)24 h累積透過量結(jié)果可知，TP@LCNPs、TP@ES和TP@MS經(jīng)皮滲透性能均顯著強于TP@GL（＜0.05）。

表5 TP透皮制劑累積透過量-時間擬合方程(, n = 3)

2.6 皮膚刺激性實驗

2.6.1 動物分組 將健康的SD大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，隨機分成TP@GL組、TP@LCNPs組、TP@MS組、TP@ES組和生理鹽水對照組，每組6只，雌雄各半。

2.6.2 實驗方法 實驗前24 h將大鼠背部的毛去除，剃毛面積為3 cm×3 cm，不得損傷皮膚。每組的給藥劑量為0.4 mg/kg，連續(xù)給藥7 d，每次給藥6 h后用溫水清洗給藥部位，1 h后觀察給藥部位是否出現(xiàn)紅斑、水腫，并對給藥后的皮膚進行評分并根據(jù)積分平均值判定皮膚刺激性強度[20-21]。末次給藥觀察后，麻醉大鼠，取5 mm×5 mm大小的皮膚組織于4%多聚甲醛組織固定液中固定，制成HE染色切片，用正置微鏡觀察[22-23]，結(jié)果見圖4與表6。

皮膚刺激性評分標準：無紅斑、輕度紅斑、中度紅斑、重度紅斑和水腫性紅斑分別計0、1、2、3、4分；無水腫、輕度水腫、中度水腫、重度水腫、嚴重水腫分別計0、1、2、3、4分。刺激分值＝(紅斑積分＋水腫積分)/動物只數(shù)。刺激分值＜0.50為無刺激性，0.50～2.99分為輕度刺激性，3.00～5.99分為中度刺激性，6.00～8.00分為強度刺激性。

由7 d刺激性感官評分結(jié)果可知，TP@LCNPs、TP@ES、TP@MS有輕度刺激性，TP@GL則具有中度刺激性。對TP@LCNPs、TP@ES、TP@MS和TP@GL的刺激性評分結(jié)果進行單因素方差分析，發(fā)現(xiàn)TP@LCNPs、TP@ES、TP@MS與TP@GL組之間具有顯著性差異（＜0.05），由此可知LCNPs、ES、MS等新型制劑都能降低TP的經(jīng)皮刺激性，而GL則沒有減輕TP毒副作用的效果。

圖4 TP透皮制劑HE染色切片圖

表6 TP透皮制劑皮膚刺激性評分(, n = 6)

HE染色切片鏡檢可見，TP@LCNPs組大鼠皮膚角質(zhì)層變薄，表皮完整，皮膚附屬器完整，無炎癥細胞浸潤。TP@ES組大鼠皮膚組織表皮完整，真皮層有少量炎癥細胞浸潤，皮膚附屬器未見明顯減少。TP@MS組大鼠皮膚鱗狀上皮增厚，表面痂皮附著，皮膚附屬器破壞減少，上皮下膠原大量增生，有少量炎細胞浸潤。TP@GL組大鼠上皮壞死、脫落，皮膚附屬器破壞減少，表皮與真皮交界處局灶出血、水腫，伴膠原增生，真皮層和平滑肌之間有淋巴細胞浸潤。

綜上所述，HE染色切片結(jié)果與刺激性評分結(jié)果一致，TP@LCNPs、TP@ES、TP@MS均能減輕TP的皮膚毒性。

3 討論

由體外釋放度實驗結(jié)果可知，在8 h內(nèi)，TP@ LCNPs、TP@ES、TP@MS、TP@GL均具有緩控釋效果，釋放度曲線符合Higuchi方程，相關(guān)性良好，TP@LCNPs和TP@GL的累積釋放度顯著小于TP@ES和TP@MS（＜0.05），說明TP@LCNPs和TP@GL的緩控釋效果優(yōu)于TP@ES和TP@MS。

體外透皮實驗結(jié)果與體外釋放度實驗一致，TP@LCNPs、TP@ES、TP@MS、TP@GL4種劑型均具有緩控釋效果，但TP@LCNPs、TP@ES、TP@ MS的24 h累積透過量顯著高于TP@GL的24 h累積透過量（＜0.05），表明TP@LCNPs、TP@ES和TP@MS經(jīng)皮滲透性能顯著強于TP@GL。筆者認為，LCNPs較強的緩釋效果與促滲作用可能與其結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)密切相關(guān)，研究表明，LCNPs包載難溶性藥物時，會降低其脂質(zhì)雙分子層的流動性，使其固態(tài)性質(zhì)更顯著，從而導(dǎo)致藥物釋放更緩慢[24]。

此外，LCNPs可利用完整的包載作用及通過擾亂角質(zhì)層結(jié)構(gòu)的有序性使得藥物透過皮膚屏障，達到良好的促滲效果[25]。而GL因其較差的流動性和較大的粒徑，使藥物難以從載體中迅速釋放出來且難以透過皮膚屏障，故表現(xiàn)為較強的緩釋作用和較差的滲透效果。因此，ES和MS更適用于需要藥物迅速發(fā)揮療效的臨床應(yīng)用，而LCNPs和GL則適用于局部給藥或者緩控釋給藥，以達到長效緩釋的作用效果。

7 d皮膚刺激性實驗感官評分結(jié)果與HE染色切片鏡檢結(jié)果均證明LCNPs、ES、MS能顯著減輕TP的皮膚刺激性（＜0.05），而GL則不具有降低TP經(jīng)皮刺激性的效果。綜上所述，TP@LCNPs在有著良好的緩控釋作用和經(jīng)皮滲透效果的同時能顯著降低雷公藤甲素的皮膚刺激性故本實驗最終選定TP@LCNPs為TP經(jīng)皮給藥的最佳劑型。

為了解決TP水溶性差、生物利用度低、經(jīng)皮給藥具有嚴重的皮膚刺激性等問題[6-9]，本實驗制備了TP@LCNPs、TP@ES、TP@MS、TP@GL 4種制劑，并采用體外釋放實驗、體外透皮實驗、皮膚刺激性實驗對其進行了綜合評估，確定了TP經(jīng)皮給藥系統(tǒng)的最佳設(shè)計劑型、最佳載藥效率、體外釋藥特性和經(jīng)皮毒性大小，為雷公藤甲素經(jīng)皮給藥的藥物制劑開發(fā)及臨床應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Screening of transdermal drug delivery preparations of triptolide

GUAN Yong-mei, LEI Fang-fang, WANG Shu-hui, ZHU Wei-feng, CHEN Li-hua, WU Xuan, CHEN Ying-chong

Key Laboratory of Modern Chinese Medicine Preparations, Ministry of Education, Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine, Nanchang 330004, China

In order to reduce the irritation and improve the transdermal permeability of triptolide, the transdermal drug delivery carrier of triptolide (TP) was screened to lay a foundation for the development of a new transdermal drug delivery system of triptolide.Triptolide lipid cubic liquid crystalline nanoparticles, ethosomes, micelles, gel and other preparations were prepared. Therelease characteristics of different formulations of triptolide were investigated by dynamic dialysis release method. The improved Franz diffusion cell method was used to investigate thepercutaneous permeability of different formulations of triptolide. The skin irritation attenuation effect of different dosage forms of triptolide was evaluated by skin irritation test.The cumulative release rates of triptolide lipid cubic liquid crystalline nanoparticles, ethosomes, micelles and gel at 8 h were (51.40 ± 1.19)%, (100.67 ± 1.37)%, (89.25 ± 4.27)% and (42.61 ± 4.27)%, respectively. The cumulative permeation amounts at 24 h were (0.46 ± 0.02), (0.48 ± 0.04), (0.44 ± 0.03) and (0.27 ± 0.02) mg/cm2, respectively. The results of skin irritation showed that triptolide lipid cubic liquid crystalline nanoparticles, ethosomes and micelles had mild irritation, while triptolide gel had moderate irritation.Different dosage forms of triptolide have different characteristics. Compared with ethosomes, micelles and gels, triptolide cubic liquid crystalline nanoparticles has good sustained and controlled release effect and percutaneous penetration effect, and can significantly reduce the skin irritation of triptolide. It is the best dosage form for transdermal administration of triptolide.

triptolide; cubic liquid crystal; ethosomes; micelles; gel;release; percutaneous permeability; skin irritation

R283.6

A

0253 - 2670(2023)10 - 3093 - 08

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.10.006

2022-11-16

國家自然科學(xué)基金資助項目（82060722）；江西省自然科學(xué)基金資助項目（20202BAB206081）；2021年度江西省研究生創(chuàng)新專項資金資助項目（YC2021-S504）

管詠梅（1979—），博士，教授，博士研究生導(dǎo)師，從事中藥新制劑與新技術(shù)研究。E-mail: guanym2008@163.com

吳 璇，女，講師，主要從事藥劑學(xué)及生物化學(xué)研究。E-mail: anita0725@163.com

陳穎翀，女，博士，副教授，碩士研究生導(dǎo)師，從事中藥新劑型與新技術(shù)研究。E-mail: yc_chen1020@163.com

[責任編輯 鄭禮勝]