肖建才，閆濱濱，萬修福，鄒隆瓊，吳統(tǒng)選，劉 爽，康傳志，呂朝耕，王 升，張 燕*，楊 健*

基于指紋圖譜和UPLC-MS/MS定量測定對不同產地陳皮的質量評價研究

肖建才1，閆濱濱1，萬修福1，鄒隆瓊2，吳統(tǒng)選3，劉 爽3，康傳志1，呂朝耕1，王 升1，張 燕1*，楊 健1*

1. 中國中醫(yī)科學院 中藥資源中心 道地藥材國家重點實驗室培育基地，北京 100700 2. 重慶三峽云海藥業(yè)股份有限公司，重慶 404500 3. 天圣制藥集團股份有限公司，重慶 401120

采用HPLC指紋圖譜與化學計量學相結合、UPLC-MS/MS測定多黃酮成分含量的方法，測定不同產地陳皮質量，為其鑒別和質量控制提供依據。采用HPLC-DAD指紋圖譜檢測并結合“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)（2012A版）”建立6個產區(qū)，49個不同批次陳皮藥材（S1～S49）指紋圖譜，并進行相似度評價和共有峰確認，結合聚類分析（hierarchical clustering analysis，HCA）、主成分分析（principal component analysis，PCA）、正交偏最小二乘法-判別分析（orthogonal partial least-squares discrimination analysis，OPLS-DA）等化學計量學綜合分析。采用UPLC-MS/MS法建立了8個黃酮類成分柚皮素、柚皮苷、木犀草苷、川陳皮素、橙皮素、橙皮苷、橘皮素和蕓香柚皮苷的含量測定方法對60批7個產地陳皮藥材進行評價。建立了49批不同產地陳皮藥材的指紋圖譜，相似度為0.864～0.999，共標定了11個共有峰，HCA分析49批陳皮明顯分為4類；PCA得到5個主成分的累積方差貢獻率為92.748%；OPLS-DA表明8、7、10和11號峰可能是影響陳皮藥材質量的差異標志物；含量測定結果表明不同產地陳皮中黃酮類含量存在顯著差異，廣東新會以川陳皮素和橘皮素為主要標志成分，四川荷花池以木犀草苷為差異性成分，江西樟樹以柚皮素和柚皮苷為差異性成分，廣西玉林則以橙皮素、橙皮苷和蕓香柚皮苷為主，重慶云陽以川陳皮素和橙皮苷為主。建立了穩(wěn)定性強的不同產地陳皮HPLC指紋圖譜和8個黃酮類UPLC-MS/MS定量測定方法，結合化學計量學可用于陳皮藥材綜合評價和質量控制。

陳皮；指紋圖譜；UPLC-MS/MS；柚皮素；柚皮苷；木犀草苷；川陳皮素；橙皮素；橙皮苷；橘皮素；蕓香柚皮苷；化學計量學；含量測定；質量評價

陳皮為蕓香科柑橘屬小喬木植物橘Blanco及其栽培變種的干燥成熟果皮[1]。藥材分為“陳皮”和“廣陳皮”，作為藥用可以追溯至東漢時期的《神農本草經》[2]，藥材主要分布在廣東、廣西、江西、四川等地。該藥具有保肝、抗呼吸系統(tǒng)疾病、抗氧化、抗炎、強心等藥理活性作用，現代研究表明其主要含有黃酮類、揮發(fā)油、生物堿、檸檬苦素類等化學成分[3-6]。

陳皮質量研究目前主要側重于陳皮HPLC指紋圖譜或建立“一測多評”的黃酮含量方法[7-9]，但對于不同產地多批次陳皮藥材的HPLC圖譜及UPLC-MS/MS法對陳皮黃酮多成分含量測定的綜合評價尚無清晰的報道。本研究建立了不同產地陳皮的HPLC指紋圖譜并進行聚類分析（hierarchical clustering analysis，HCA）、主成分分析（principal component analysis，PCA）、正交偏最小二乘判別分析（orthogonal partial least-squares discrimination analysis，OPLS-DA）等化學計量學分析；課題組依據前期的代謝組數據分析工作，篩選出8種對評價陳皮質量相關性較高的黃酮類成分，包括黃酮和甲基黃酮類，并進行了質譜參數優(yōu)化和含量測定工作。本研究前期共收集了49份陳皮樣品，建立了6個主產區(qū)的指紋圖譜評價體系，之后受到了國醫(yī)大師金世元的啟示，補充了重慶產區(qū)的11份陳皮樣品進行含量測定，但受實驗條件限制未對重慶產區(qū)的樣品進行指紋圖譜測定。本實驗綜合分析各產區(qū)陳皮藥材的成分差異或相似原因，明確其產地差異及成分特征，為陳皮藥材的質量評價研究提供一定的參考依據。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Agilent 1260型高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；Acquity UPLCTMI-Class型超高效液相色譜系統(tǒng)（美國Waters公司）；API-6500型四級桿-線性離子阱質譜儀（美國ABSCIEX公司，配有離子噴霧接口）；Waters Symmetry C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；New Classic MS-S型電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；SB800DTD型超聲波清洗機（寧波新芝生物科技有限公司）。

1.2 材料

對照品柚皮素（批號B21596-2019）、柚皮苷（批號B21594-2019）、木犀草苷（批號B20887-2018）、川陳皮素（批號B20199-2019）、橙皮素（批號B20184-2019）、橙皮苷（批號B20182-2019）、橘皮素（批號B20646-2019）和蕓香柚皮苷（批號B21634-2019），均購自上海源葉生物科技有限公司，質量分數均大于98%；甲醇（色譜級，Sigma公司）；其余試劑均為分析純。

1.3 藥材

共收集儲藏時間為3年的陳皮藥材60批，產區(qū)來自廣西（7批）、四川（12批）、安徽（8批）、江西（6批）、河北（7批）、廣東（9批）和重慶（11批）等地。所有藥材經中國中醫(yī)科學院中藥資源中心張燕研究員鑒定為蕓香科植物橘Blanco及其栽培變種的干燥成熟果皮。具體信息見表1。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Waters Symmetry C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為乙腈（A），水（0.1%乙酸）（B）；梯度洗脫：0～20 min，20%～40% A；20～35 min，40%～70% A；35～55 min，70%～100% A；55～60 min，100% A；檢測波長280 nm，體積流量1 mL/min，柱溫25 ℃，進樣體積10 μL。

2.2 供試品溶液的制備

取陳皮粉末（過二號篩）約1.0 g，精密稱定。置具塞三角瓶中，精密加入70%甲醇30 mL，稱定質量，超聲處理45 min，放置室溫，用70%甲醇補足減失的質量、搖勻，0.45mm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，備用。

2.3 指紋圖譜的建立及分析

2.3.1 精密度試驗 精密稱取陳皮藥材粉末（S1）約1 g（過二號篩），按“2.2”項下方法制備供試品，按“2.1”項下色譜條件測定，連續(xù)進樣6次，記錄色譜圖，選取其中6個峰為目標，計算得到6個共有峰的相對保留時間的RSD均小于0.10%，相對峰面積的RSD均小于1.08%，表明儀器精密度良好。

2.3.2 重復性試驗 精密稱取同一陳皮藥材粉末（S1）約1 g（過二號篩），按“2.2”項下方法平行制備6份供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件測定，選取其中6個峰為目標，計算得到6個共有峰的相對保留時間的RSD均小于0.10%，相對峰面積的RSD均小于1.60%，表明方法重復性良好。

2.3.3 穩(wěn)定性試驗 取同一陳皮藥材供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件測定，分別在0、5、10、15、20、24 h連續(xù)進樣6次分析，選取其中6個峰為目標，計算得到6個共有峰的相對保留時間的RSD均小于0.49%，相對峰面積的RSD均小于1.70%，表明供試品溶液在24 h內穩(wěn)定性良好。

2.3.4 指紋圖譜建立及相似度評價 精密稱取49批陳皮（S1～S49）粉末各1.0 g，按照“2.2”項下方法制備供試品溶液，然后分別按照“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖。將49批陳皮樣品的HPLC圖譜導入《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)（2012.1版）》中，以S1號樣品的色譜圖為參照譜圖，時間窗寬度為0.5 min中位數法生成對照圖譜（R），經多點校正后進行色譜峰匹配生成樣品疊加指紋圖譜（圖1）；然后以對照指紋圖譜為參照，以平均數法進行相似度計算。結果，49批陳皮樣品中共標定了11個共有峰，占各批次樣品總峰面積的73.47%～92.42%；各樣品圖譜與對照指紋圖譜的相似度為0.864～0.999，說明49批陳皮樣品具有很高的相似性，相似度評價結果見表2。

圖1 49批陳皮藥材樣品的HPLC疊加指紋圖譜和對照指紋圖譜（R）

表2 49批陳皮藥材樣品HPLC指紋圖譜相似度評價結果

2.4 化學計量學分析

為了進一步闡明不同產區(qū)的陳皮藥材化學成分的差異，采用HCA、PCA、OPLS-DA對6個產區(qū)的陳皮進行分析。

2.4.1 HCA 系統(tǒng)聚類分析是一種非監(jiān)督模式的分析方法，采用Hiplot Pro軟件對49批樣品中11個共有峰的標準化峰面積聚類分析，樣品被分為4類：第1類為S8、S12～S18、S38、S49；第2類為S3、S5、S19、S41～S48、S38；第3類為S1～S2、S4、S7、S9、S35～S37、S39～S40；其余為第4類（圖2）。HCA結果表明不同產區(qū)陳皮藥材的質量存在一定地域差異性，可能受地理位置接近的影響，部分產地陳皮樣品聚類結果存在相互交叉，如廣東新會和廣西玉林、安徽亳州和江西樟樹等大部分陳皮藥材具有一定的相似性。

2.4.2 PCA 進一步研究6個經銷產區(qū)或道地產區(qū)陳皮化學成分之間的差異，將49批樣品中11個共有峰的峰面積導入SPSS.24軟件進行PCA，計算相關矩陣的特征值及其方差貢獻率。以特征值＞1為基準，得到陳皮藥材指紋圖譜共有峰特征值（表3），5個主成分的累積方差貢獻率達到92.748%，說明5個主成分在反映6個產區(qū)陳皮樣品共有成分關系中起到主導作用。其中第1～5個主成分貢獻率分別為42.582%、21.788%、12.545%、9.824%和6.009%。由主成分矩陣（表4）可知各個共有峰對5個主成分不同的獨立方差貢獻率，第1主成分主要代表了峰5、10、11；第2主成分主要代表了峰1、2、7、9；第3主成分主要代表峰6；第4主成分主要代表了峰3；第5主成分主要代表了峰4、8。

圖2 49批陳皮藥材指紋圖譜共有峰HCA圖

2.4.3 OPLS-DA 在PCA的基礎上利用OPLS-DA有利于對不同產區(qū)的49份陳皮樣品強化組間差異分析，篩選出對組間差異貢獻率較大的成分。采用SIMCA-P14.0進行數據分析，將11個共有峰的峰面積設為變量，以49份陳皮樣品Z-score標準化處理后的數據為觀測值，根據樣品的不同產區(qū)設置組別，進行OPLS-DA分析，在建立的模型中，累計解釋能力參數2和2分別為0.981和0.503，預測能力參數（2）為0.251，提示本實驗所建立的OPLS-DA模型的穩(wěn)定性較好，預測能力欠佳，2?2＞0.3，該模型并不理想。由OPLS-DA得分圖3可知，廣東新會、河北安國、廣西玉林和四川荷花池等產地組間差異較明顯，少部分樣品與其他產地出現交集；江西樟樹與安徽亳州組間出現明顯交叉，這可能與兩省地理環(huán)境接近或樣品組內差異較大，導致組間差異不明顯有關，分析結果與HCA一致。此外，VIP是篩選差異化合物的重要指標之一，選取VIP值＞1的化合物作為差異性標志物，在0.95的置信區(qū)間內，OPLS-DA分析提取的變量VIP圖見圖4。按VIP大小順序依次為8號峰＞7號峰＞10號峰＞11號峰，這些成分是區(qū)分6個產區(qū)陳皮差異的主要標志性物質，值得在今后的研究中加以關注，剩余色譜峰的VIP值均小于1，對于分類貢獻不高。以上結果分析表明，HPLC指紋圖譜可作為評價不同產地陳皮質量研究的主要參考依據之一。

表3 49批陳皮藥材樣品主成分特征值及貢獻率

表4 49批陳皮藥材樣品共有峰成分矩陣

圖3 49批陳皮藥材OPLS-DA得分圖

圖4 49批陳皮藥材11個共有峰VIP值

2.5 UPLC-MS/MS法黃酮類含量測定

2.5.1 色譜條件 Acquity UPLC BEH C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.8 μm），以0.1%甲酸-水（A）-0.1%甲酸-乙腈（B）為流動相，梯度洗脫（0～1.0 min，5%～25% B；1.0～3.5 min，25%～40% B；3.5～4.5 min，40%～60% B），體積流量0.6 mL/min，柱溫40 ℃，進樣體積1 μL。

2.5.2 質譜條件 離子源：Turbo V，電離模式：ESI-，氣簾氣（CUR）體積流量：30 L/min，噴霧電壓（IS）：5500 V；霧化氣（GS1）體積流量：55 L/min；加熱輔助氣（GS2）體積流量55 L/min；采集方式：多反應監(jiān)測模式（MRM）；離子化溫度（TEMP）：550 ℃。優(yōu)化的條件參數見表5。

表5 陳皮樣品中8個黃酮類成分的質譜參數

2.5.3 供試品溶液制備 取過篩陳皮樣品粉末約0.2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，稱定質量，超聲處理（功率：300 W；頻率：40 kHz）45 min放至室溫，再稱定質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻，12 000 r/min離心10 min，上清液經0.22 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液，備用。精密量取上述供試品溶液1 mL至10 mL量瓶中，以甲醇定容，搖勻，過0.22 μm微孔濾膜，即得川陳皮素和橙皮苷供試品溶液。

2.5.4 對照品溶液制備 分別精密稱取黃酮類化合物對照品適量，加甲醇制備成質量濃度為1.000 mg/mL的單一成分對照品溶液，精密量取各成分對照品溶液適量配制成3組混合對照品溶液，其中I組包括柚皮苷（0.025 mg/mL）、橙皮素（0.002 0 mg/mL）、橙皮苷（0.050 mg/mL）、橘皮素（0.025 mg/mL）和蕓香柚皮苷（0.030 mg/mL），II組包括木犀草苷（0.000 20 mg/mL）和川陳皮素（0.010 mg/mL），III組包括柚皮素（0.001 0 mg/mL）。

2.5.5 線性關系考察 精密量取適量的混標溶液，稀釋成多個不同濃度的混合對照品溶液，按“2.5.1”和“2.5.2”項下條件進樣測定。以對照品溶液中目標化合物濃度為橫坐標（），所測得的峰面積為縱坐標（），計算線性回歸方程，結果見表6。

2.5.6 精密度試驗 選擇“2.5.4”項下中間濃度的混合對照品溶液，按“2.5.1”和“2.5.2”項下條件進樣檢測，重復進樣7次，得到混合對照品中各成分的峰面積，計算得到各成分（柚皮素、柚皮苷、木犀草苷、川陳皮素、橙皮素、橙皮苷、橘皮素、蕓香柚皮苷）峰面積的RSD值分別為2.77%、0.79%、2.41%、1.98%、2.65%、1.53%、1.71%、1.85%，表明儀器精密度良好。

2.5.7 重復性試驗 精密稱取同一批次陳皮樣品粉末0.2 g，平行7份，按照“2.5.3”項下操作制備供試品溶液，按照“2.5.1”和“2.5.2”項下條件進樣檢測，得到各成分的峰面積，計算得到各成分（柚皮素、柚皮苷、木犀草苷、川陳皮素、橙皮素、橙皮苷、橘皮素、蕓香柚皮苷）峰面積的RSD值分別為2.89%、2.33%、4.01%、1.93%、2.11%、1.89%、2.63%、2.95%，表明該方法重復性良好。

表6 陳皮樣品中8種黃酮類成分的線性關系考察結果

2.5.8 穩(wěn)定性試驗 取同一批次供試品溶液，按“2.5.1”和“2.5.2”項下條件，分別在0、2、4、6、8、12、18、24 h進樣檢測，得到各成分的峰面積，計算得到各成分（柚皮素、柚皮苷、木犀草苷、川陳皮素、橙皮素、橙皮苷、橘皮素、蕓香柚皮苷）在不同檢測時間下峰面積的RSD值為1.39%、1.86%、2.19%、0.93%、2.22%、0.83%、1.46%、2.53%，表明陳皮樣品供試品溶液中這8種黃酮類成分在24 h內穩(wěn)定性良好。

2.5.9 加樣回收率試驗 精密稱取適量已知目標成分含量的同一批次陳皮樣品粉末，按“2.5.3”項下制備供試品溶液，并精密加入適量對照品溶液，按“2.5.1”和“2.5.2”項下條件進樣檢測，得到各成分的峰面積，計算得到各黃酮類成分（柚皮素、柚皮苷、木犀草苷、川陳皮素、橙皮素、橙皮苷、橘皮素、蕓香柚皮苷）的平均加樣回收率分別為96.7%、99.2%、97.7%、101.0%、97.6%、100.6%、101.5%、98.9%，其對應的RSD值分別為4.65%、3.04%、4.78%、3.91%、4.54%、1.64%、3.76%、4.12%。

2.5.10 樣品含量測定 取60批陳皮樣品粉末（過2號篩）約1.0 g，精密稱定，分別按“2.5.3”項下方法制備樣品溶液，按“2.5.1”項下色譜條件進樣測定，計算8種黃酮類成分的質量分數，結果見表7，可見不同產地陳皮黃酮類化學成分含量存在顯著差異。通過含量測定結果箱線圖分析（圖5），可有根據推測不同產地陳皮中代表性化學成分。柚皮素和柚皮苷在江西樟樹（S33）收集的陳皮樣品質量分數最高，分別達到95.62、2 444.23 μg/g，四川荷花池（S14）則為最低；四川荷花池以木犀草苷質量分數顯著高于其他產區(qū)，最高值和平均值分別高達19.98 μg/g（S15）和8.328 μg/g；川陳皮素和橘皮素在廣東新會（S44）收集的陳皮樣品含量最高，分別達到10 384.44 μg/g和1 182.59 μg/g，安徽亳州（S21）則為最低；廣西玉林則以橙皮素、橙皮苷和蕓香柚皮苷為主，平均質量分數均顯著高于其他產區(qū)；橙皮苷在安徽亳州收集的陳皮樣品僅次于廣西玉林，但橙皮素含量顯著低于其他產區(qū)；蕓香橙皮苷在江西樟樹收集的樣品僅次于廣西玉林；重慶云陽則以川陳皮素和橘皮素為主，平均含量位于產區(qū)前列。

結果分析表明，柚皮素和柚皮苷可作為區(qū)分江西產地與其他產地陳皮的差異性成分；木犀草苷可作為區(qū)分四川產地與其他產地陳皮的差異性成分；橙皮素、橙皮苷和蕓香柚皮苷可作為區(qū)分廣西產地與其他產地陳皮的差異性成分；享有盛譽的重慶“橘紅”藥材可以“川陳皮素和橙皮苷”作為差異性成分；素有“廣陳皮”之稱的廣東新會產地陳皮則以川陳皮素和橘皮素作為區(qū)分其他產地陳皮的差異性成分。江西樟樹和安徽亳州地理位置接近，木犀草苷、川陳皮素和橙皮素的含量都整體偏低，而河北安國僅以蕓香柚皮苷含量較高。根據母核有無甲基的不同將8類黃酮類成分可以分成黃酮類和甲基黃酮類2大類并進行數據統(tǒng)計，根據《中國藥典》2020年版規(guī)定的“川陳皮素、橙皮苷和橘皮素”3類化學成分進行平均統(tǒng)計，統(tǒng)計結果見圖6。結果表明，陳皮中甲基黃酮類的含量占黃酮總含量的絕大部分，黃酮類含量普遍偏低，其中江西樟樹最高，達到656.59 μg/g；值得一提的是，重慶云陽的陳皮藥材的“甲基黃酮類、3個黃酮類以及總黃酮”平均含量均位于所有產區(qū)之首，分別高達11 040.04、18 239.70、6 955.96 μg/g，相比“廣陳皮”還要略勝一籌。

表7 陳皮樣品中8個黃酮類成分的含量測定（n＝3）

續(xù)表7

編號質量分數/(μg·g?1) 柚皮素柚皮苷木犀草苷川陳皮素橙皮素橙皮苷橘皮素蕓香柚皮苷 S44 5.99512.162.9010 384.4436.2445 712.821 182.59 598.11 S45 8.44655.231.86 9 771.7545.4646 880.961 110.00 693.61 S46 3.46402.962.3810 064.1640.3340 683.721 049.55 453.24 S47 8.49406.491.94 8 328.0363.0844 613.60 922.20 496.27 S48 5.47576.192.66 8 990.0942.9241 606.061 047.29 626.28 S4910.141 927.070.77 8 157.7415.5842 572.35 357.931 608.88 S50 0.21514.190.53 8 195.7517.0650 183.56 896.36 485.72 S51 1.05501.490.78 8 342.85 8.8047 874.63 903.48 492.12 S52 0.80276.093.14 8 429.8811.8743 044.98 890.68 248.27 S53 0.22171.281.42 8 906.2011.6542 710.59 899.20 182.19 S54 2.32135.200.89 9 337.46 9.4646 010.60 934.44 128.56 S55 0.27481.811.45 9 145.1816.0145 311.49 978.26 438.09 S56 2.62310.820.86 8 370.1215.5248 596.98 910.90 301.62 S57 0.21637.611.01 8 907.3014.0851 941.74 896.06 594.49 S58 1.17412.743.84 7 954.0818.0548 236.10 857.60 431.17 S59 0.01364.391.36 9 906.2314.7149 514.82 956.60 407.19 S60 1.88877.131.27 8 500.62 8.6932 327.39 702.07 798.52

3 討論

本研究選擇廣西玉林、四川荷花池、安徽亳州、江西樟樹、河北安國和廣東新會6個陳皮經銷產區(qū)或道地產區(qū)的49批樣品，以HPLC-DVD指紋圖譜質量控制模式定性；結果表明49批陳皮藥材指紋圖譜的相似度在0.864～0.999，確定了11個共有峰，通過HCA、PCA和OPLS-DA等化學計量法分析表明49批陳皮樣品明顯分為4類，安徽亳州與江西樟樹地理位置十分接近，二者之間明顯聚類一支，5個主成分累計方差貢獻率為92.748%，OPLS-DA結果顯示廣東新會、河北安國、廣西玉林和四川荷花池等產地組間差異較明顯，但少部分樣品與其他產地出現交集，與HCA結果一致；通過VIP值排序發(fā)現共有峰8、7、11、10這些成分可作為區(qū)分和鑒別不同產區(qū)陳皮藥材質量的主要標志性成分，但這些差異成分未做指認，本課題組后續(xù)將會繼續(xù)深入研究，以期為評價不同產地陳皮藥材質量提供更為全面的參考依據。后期，經國醫(yī)大師金世元教授指導，加上重慶云陽產區(qū)（S50～S60）的陳皮進行定量測定，采用UPLC-MS/MS測定方法對60批樣品、7個產區(qū)的8種黃酮類成分含量定量，結合化學計量學方法全面評價不同產地陳皮的質量和尋求顯著性差異成分。8種黃酮類含量測定結果得到，不同產地化學成分含量存在顯著差異，這種差異產生的主要原因可能是由于南北氣候和地理風貌的迥異，陳皮中次生代謝物的積累長期受到了土壤微生物、光合作用、關鍵酶基因等因子的調控，不同產地陳皮黃酮類成分的主要合成途徑發(fā)生了改變，種質資源有所區(qū)別。同時，不同產地陳皮的原植物栽培模式、加工和采收方式對黃酮類成分的積累也會構成影響。

圖6 60批陳皮黃酮類平均含量統(tǒng)計對比圖

對此做出了進一步討論，重慶產區(qū)的陳皮原植物是大紅袍紅橘，為橘皮去掉里面的白瓤后的部位，稱橘皮橘紅。近年來，針對“大紅袍（川蕓皮）”的質量評價有學者做出了研究[10]，金世元國醫(yī)大師在著作[11]中對其也是頗有贊賞，認為重慶地處亞熱帶，四季分明，日照充足，極其適合紅橘生長，且歷史悠久，從古至今頗有聲望，為道地藥材。因此，在后續(xù)的研究中值得對紅橘進一步細化研究。

本研究所建立的不同產地陳皮HPLC指紋圖譜及UPLC-MS/MS黃酮類含量測定方法準確、可靠。結合指紋圖譜和黃酮類成分的定量研究，可以為區(qū)分不同產地陳皮質量標志物和控制陳皮質量提供參考。此外，陳皮質量素有“陳久者良”之民間評價[12]，儲存年限長短對陳皮內在化合物的含量積累起到了至關重要的作用，這也直接關乎陳皮的質量評價[13]，本課題組后續(xù)將進一步對不同產地的不同儲存年限陳皮的指紋圖譜和代謝物動態(tài)變化進行深入探討以建立更為全面的質量評價體系。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Study on quality evaluation offrom different origins by fingerprint and UPLC-MS/MS flavonoid content determination

XIAO Jian-cai1, YAN Bin-bin1, WAN Xiu-fu1, ZOU Long-qiong2, WU Tong-xuan3, LIU Shuang3, KANG Chuan-zhi1, LYU Chao-geng1, WANG Sheng1, ZHANG Yan1, YANG Jian1

1. State Key Laboratory and Breeding Base of Dao-di Herbs, Institute of Chinese Materia Medica, China Academy of Chinese Material Sciences, Beijing 100700, China 2. Sanxia Yunhai Pharmaceutical Group Co., Ltd., Chongqing 404500, China 3. Tiansheng Pharmaceutical Group Co., Ltd., Chongqing 401120, China

To determine the quality offrom different production areas by combining HPLC fingerprinting with chemometrics and UPLC-MS/MS to provide a basis for its identification and quality control.The fingerprints of 49 batches offrom six production areas (S1—S49) were established using HPLC-DAD fingerprinting combined with the “Similarity Evaluation System for Chromatographic Fingerprinting in Chinese Medicine (2012A version)”, and similarity evaluation and common peaks were confirmed. Hierarchical clustering analysis (HCA), principal component analysis (PCA) and orthogonal partial least-squares-discrimination analysis (OPLS-DA). discrimination analysis (OPLS-DA) and other chemometric syntheses. A UPLC-MS/MS method was developed for the determination of eight flavonoid components “naringenin, naringin, luteoloside, nobiletin, hesperitin, hesperidin, tangeretin, narirutin” in 60 batches offrom seven origins.The fingerprint profiles of 49 batches offrom different origins were established with similarities of 0.864—0.999. Eleven common peaks were identified, HCA analysis of 49 batches ofwas divided into four categories; PCA obtained a cumulative variance contribution of 92.748% for the five principal components; OPLA-DA indicated that peak 8, peak 7, peak 10 and peak 11 might be the differential markers affecting the quality of; and the results of content determination showed that there were significant differences in flavonoid contents infrom different origins, with nobiletin and tangeretin as the main marker components in Xinhui, Guangdong, luteoloside as the differential component in Hehuachi, Sichuan, naringenin and naringin as the differential in Zhangshu, Jiangxi, and metabolites, and Guangxi Yulin was dominated by hesperitin, hesperidin and narirutin, and Chongqing Yunyang was dominated by nobiletin and hesperidin;Stable HPLC fingerprints offrom different origins and quantitative determination of eight flavonoids by UPLC-MS/MS were established, which can be used for a comprehensive evaluation and quality control ofherbs in combination with chemometrics.

Blanco; fingerprint; UPLC-MS/MS; naringenin; naringin; luteoloside; nobiletin; hesperitin; hesperidin; tangeretin; narirutin; chemometrics; content determination; quality evaluation

R286.2

A

0253 - 2670(2023)10 - 3302 - 10

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.10.027

2022-10-06

國家自然科學基金資助項目（81874337）；國家自然科學基金資助項目（81891014）；國家重點研發(fā)計劃項目（2017YFC1700701）；中國中醫(yī)科學院重點領域（ZZ10-027）

肖建才，男，碩士研究生，研究方向為中藥資源與栽培。E-mail: xjc1770557949@163.com

楊 健，男，博士，副研究員，研究方向為中藥資源評價與開發(fā)利用。E-mail: yangchem2012@163.com

張 燕，女，博士，研究員，研究方向為中藥資源與栽培。E-mail: zhangyan8669@126.com

[責任編輯 時圣明]