季加威　李錚　尉捷　秦雯　傅欣彤

摘 要：標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)替代測(cè)定法是采用一種或多種中藥對(duì)照品來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)多個(gè)待測(cè)組分進(jìn)行分析的方法，是近年來(lái)中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)的新方法。本文就標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)替代測(cè)定法中一測(cè)多評(píng)法及雙標(biāo)多測(cè)法的近年研究進(jìn)展及其在中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)中的應(yīng)用進(jìn)行概述，為其在中藥色譜分析技術(shù)中的進(jìn)一步研究和應(yīng)用提供思路與參考。

關(guān)鍵詞：標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)替代測(cè)定法；一測(cè)多評(píng)法；雙標(biāo)多測(cè)法；中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)

中圖分類號(hào)：R917

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1673－4513（2023）－01－44－04

引言

隨著時(shí)代的進(jìn)步，中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)分析對(duì)于定量研究的趨勢(shì)已由以往的單指標(biāo)成分向多指標(biāo)成分轉(zhuǎn)變，評(píng)價(jià)模式逐漸向多個(gè)有效成分、整體控制的模式發(fā)展。由于中藥成分復(fù)雜多樣，僅通過(guò)單一成分的檢測(cè)，不能對(duì)中藥的質(zhì)量進(jìn)行全面控制與合理評(píng)價(jià)。中醫(yī)整體觀念認(rèn)為，中藥得以發(fā)揮其最佳藥效是由其所含多類化學(xué)成分之間的綜合作用形成的，因此，隨著分離與檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展，多指標(biāo)質(zhì)量控制研究漸于中藥分析領(lǐng)域廣泛開(kāi)展，目前學(xué)界也在中藥多指標(biāo)成分的含量測(cè)定方面取得積極的進(jìn)展；另外，為滿足多指標(biāo)成分深入研究工作的基礎(chǔ)供應(yīng)需求，使用傳統(tǒng)外標(biāo)法分析必將造成中藥實(shí)物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（對(duì)照品）的制備種類和數(shù)量激增，一定程度上影響了國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)的執(zhí)行。

近年來(lái)，更多的中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)研究采用了標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)替代測(cè)定法，本文將對(duì)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)替代測(cè)定法的原則及應(yīng)用進(jìn)行綜述。

一、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)替代測(cè)定法

（一）標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（對(duì)照品）是國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)中定性與定量不可或缺的實(shí)物對(duì)照，在分析中起到計(jì)量作用，具有準(zhǔn)確性、均勻性及穩(wěn)定性。

（二）標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)替代測(cè)定法

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)替代測(cè)定法為使用1個(gè)內(nèi)參物，實(shí)現(xiàn)對(duì)多待測(cè)成分完成同時(shí)測(cè)定的方法，其核心原則為在確保定性、定量準(zhǔn)確度和方法學(xué)耐用性的基礎(chǔ)上，降低標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的使用成本。

（三）標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)替代測(cè)定法的分類

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)替代測(cè)定法根據(jù)替代標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)使用的數(shù)量可分為一測(cè)多評(píng)法、雙標(biāo)多測(cè)法和多替代標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)法3類。多替代標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)法是指使用多個(gè)對(duì)照品進(jìn)行含量測(cè)定，由于互相之間的轉(zhuǎn)化問(wèn)題較為復(fù)雜，目前應(yīng)用較少，本文對(duì)該方法不做論述。

一測(cè)多評(píng)法（quantitative analysis of multi-components by single marker，QAMS）最早是由王智民等于2006年提出的，此方法根據(jù)中藥各成分間存在一定的函數(shù)關(guān)系，通過(guò)使用一種價(jià)廉易得的對(duì)照品為內(nèi)參物，使用相對(duì)校正因子法計(jì)算得出其它多個(gè)難以獲得的物質(zhì)成分含量。一測(cè)多評(píng)法的提出迅速引起了學(xué)界的廣泛關(guān)注，經(jīng)多年多例的驗(yàn)證成功案例支持，此方法漸漸成為符合中藥特點(diǎn)的新型質(zhì)量評(píng)價(jià)模式，為中藥整體質(zhì)量控制開(kāi)發(fā)了新思路。

一測(cè)多評(píng)法雖能有效減少對(duì)照品使用數(shù)量，但其有時(shí)在定性上存在誤差偏大的問(wèn)題，基于此，孫磊等提出了“雙標(biāo)多測(cè)法”（two reference sub-stances for determination of multiple components，TRSDMC），此方法使用2個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品，在定性上使用雙標(biāo)線性校正法，而在定量上使用相對(duì)校正因子法。方法通過(guò)使用3個(gè)不同品牌的高效液相色譜儀以及30根不同品牌的C18色譜柱，以大黃、重樓、補(bǔ)骨脂為成功使用案例，論證了該法確有可實(shí)施性，分析結(jié)果表明，與一測(cè)多評(píng)法（相對(duì)保留時(shí)間法）相比，雙標(biāo)線性校正法可顯著提高色譜峰在定性上的準(zhǔn)確度以及待測(cè)成分在多品牌色譜柱上的適用程度。

一測(cè)多評(píng)法與雙標(biāo)多測(cè)法均為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)替代測(cè)定法，但兩者在使用對(duì)照品數(shù)量上有差異，一測(cè)多評(píng)法使用1種對(duì)照品，以相對(duì)保留時(shí)間法定性、相對(duì)校正因子法定量；而雙標(biāo)多測(cè)法是在一測(cè)多評(píng)法定性的基礎(chǔ)上增加1種對(duì)照品，同時(shí)使用雙標(biāo)線性校正法更加精準(zhǔn)的定位色譜峰、提高多種色譜柱的適用程度，此方法允許色譜條件存在一定范圍內(nèi)的波動(dòng)。目前一測(cè)多評(píng)法的質(zhì)量控制模式已較為健全，而對(duì)于雙標(biāo)多測(cè)法的研究與應(yīng)用還有待繼續(xù)深入，兩者均為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)替代測(cè)定法的發(fā)展提供巨大助益。

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)替代測(cè)定法在使用上一般選擇替代制備困難、價(jià)格昂貴或穩(wěn)定性差的待測(cè)成分，該待測(cè)成分最好選擇為結(jié)構(gòu)母核相似，僅取代基不同的同類成分且數(shù)量不宜過(guò)多。應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)替代測(cè)定法需考察不少于15批不同來(lái)源的樣品，以確保方法具有適用性。

二、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)替代測(cè)定法在中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)中的應(yīng)用

（一）一測(cè)多評(píng)法在中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)中的應(yīng)用

相較于傳統(tǒng)外標(biāo)法，一測(cè)多評(píng)法（QAMS）在分析效率、經(jīng)濟(jì)、環(huán)境保護(hù)及操作要求上具有絕對(duì)的優(yōu)勢(shì)，吸引著越來(lái)越多的研究者們將QAMS投入到單味中藥飲片、配方顆粒、復(fù)方制劑的質(zhì)量控制研究當(dāng)中。2008年，應(yīng)用QAMS于中藥復(fù)方制劑（冠脈康膠囊）的定量研究中；2010年，《中國(guó)藥典》收錄了應(yīng)用QAMS進(jìn)行同時(shí)測(cè)定黃連中5個(gè)生物堿類成分含量的方法；2011年，中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所的研究人員等制訂了QAMS的技術(shù)指南，為QAMS的后續(xù)開(kāi)發(fā)研究提供了技術(shù)性指導(dǎo)意見(jiàn)；《中國(guó)藥典》2020年版重點(diǎn)引入了一測(cè)多評(píng)方法技術(shù)。一測(cè)多評(píng)法自提出以來(lái)已有相關(guān)研究千余篇，該方法已經(jīng)應(yīng)用于鐵皮石斛、防己、板藍(lán)根、柴胡等中藥飲片，活血丸、茵梔黃傳統(tǒng)湯劑、二至丸、健脾益腎顆粒等中成藥；淫羊藿、辛夷等中藥配方顆粒質(zhì)量評(píng)價(jià)研究。從中國(guó)知網(wǎng)收錄的中文學(xué)術(shù)論文數(shù)量來(lái)看，自2006年至2019年總體發(fā)表量呈上升趨勢(shì)，2019年后至今發(fā)表量趨于穩(wěn)定，可見(jiàn)QAMS在近些年受歡迎度以及影響力較高（圖1）。

研究發(fā)現(xiàn)，QAMS主要應(yīng)用于中藥復(fù)雜結(jié)構(gòu)中的同類成分（結(jié)構(gòu)母核相同）的分析評(píng)價(jià)，因其結(jié)構(gòu)相似，紫外吸收波長(zhǎng)亦相近，在波長(zhǎng)的選擇上使用最大吸收波長(zhǎng)即可。目前多數(shù)研究均針對(duì)有相似母核的化合物且該方法被廣泛接受，例如羅定強(qiáng)等采用QAMS測(cè)定腎康栓中的大黃蒽醌類成分；徐文武等利用一測(cè)多評(píng)法同時(shí)測(cè)定紅參中11種人參皂苷的含量等。對(duì)于不同類結(jié)構(gòu)成分的一測(cè)多評(píng)研究相對(duì)較少，但目前也有研究者把標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)替代測(cè)定法的應(yīng)用范圍拓展，研究結(jié)構(gòu)母核不同的多類（一般選擇二到三類）成分同時(shí)測(cè)定。通過(guò)查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)不同類結(jié)構(gòu)成分的一測(cè)多評(píng)研究多集中在苯丙素類、黃酮類、萜類化合物中，研究者為滿足不同結(jié)構(gòu)母核的成分需選用最大吸收波長(zhǎng)的要求，此類研究大多采用二極管陣列檢測(cè)器，通過(guò)不同時(shí)間段以不同波長(zhǎng)通道檢測(cè)各類成分的方法進(jìn)行研究。如張伯鋒等運(yùn)用一測(cè)多評(píng)法測(cè)定補(bǔ)心氣口服液中七種成分包含了三萜類、黃酮類、苯丙素類三類化學(xué)成分的含量；付洋等建立了同時(shí)測(cè)定蜘蛛香中包含苯丙素類、萜類兩類成分的一測(cè)多評(píng)方法；何兵等采用一測(cè)多評(píng)法測(cè)定款冬花中苯丙素類、黃酮類、倍半萜成分的含量。此外還有選取一個(gè)波長(zhǎng)進(jìn)行測(cè)定情況，如段麗等基于一測(cè)多評(píng)法測(cè)定補(bǔ)骨脂中包含苯丙素類、黃酮類兩類成分的含量；朱澤兵等采用一測(cè)多評(píng)法測(cè)定白鮮皮中包含生物堿類、萜類兩類成分的含量；張龍等基于一測(cè)多評(píng)法完成了淫羊藿中包括苯丙素類、黃酮類、生物堿三類成分含量的同時(shí)測(cè)定。在不同類型成分間開(kāi)展的研究已取得了積極的進(jìn)展，具體品種還需要試驗(yàn)研究和驗(yàn)證。

（二）雙標(biāo)多測(cè)法在中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)中的應(yīng)用

雙標(biāo)多測(cè)法自2013年孫磊等提出以來(lái)每年均有一定的品種應(yīng)用研究。目前對(duì)中藥飲片如西洋參、補(bǔ)骨脂、澤瀉、大黃、重樓等，對(duì)中成藥如柏子養(yǎng)心丸、乳塊消片、大黃制劑等進(jìn)行了研究。重慶市食品藥品檢驗(yàn)研究院建立的川黃芩雙標(biāo)多測(cè)方法已通過(guò)了專家審評(píng)，并被新版重慶市中藥材標(biāo)準(zhǔn)收入，但雙標(biāo)多測(cè)法還存在著一些問(wèn)題，如各藥材不同成分的穩(wěn)定性、不同品牌儀器、色譜柱的適用性等眾多混雜因素都可能對(duì)分析結(jié)果有影響，因而還需要根據(jù)具體研究情況具體分析，積累更多使用案例，不斷完善方法。

隨著中藥標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)替代測(cè)定法的發(fā)展，研究提供了一種將標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)數(shù)字化的新思路。這種思路建立在雙標(biāo)線性校正法研究的基礎(chǔ)上，將標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行數(shù)字信息化，在降低實(shí)物標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備和標(biāo)定負(fù)擔(dān)的同時(shí)還能提供更加系統(tǒng)化、規(guī)范化、全面化的交互信息，從而構(gòu)建智能化檢索、大數(shù)據(jù)記錄存儲(chǔ)與共享的新模式。目前中檢院中藥所已開(kāi)發(fā)了數(shù)字化標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的雛形——DRS Origin軟件，此軟件憑借互聯(lián)網(wǎng)大數(shù)據(jù)共享模式，根據(jù)具體品種及指標(biāo)成分直接給出最佳色譜柱以及分析方法，可以更好地應(yīng)用于以雙標(biāo)多測(cè)法為指導(dǎo)的雙標(biāo)線性校正法當(dāng)中，有助于提高保留時(shí)間預(yù)測(cè)的準(zhǔn)確性，為中藥定性分析以及包括特征圖譜特征峰定位方面提供科學(xué)參考。為解決對(duì)照品供需矛盾及操作要求繁瑣等問(wèn)題，一些研究單位已將數(shù)字化標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究工作應(yīng)用在國(guó)家藥品抽驗(yàn)、省級(jí)藥品抽驗(yàn)以及藥品標(biāo)準(zhǔn)研究工作中，并發(fā)表了多篇學(xué)術(shù)論文給予支持，發(fā)展前景光明。

三、結(jié)語(yǔ)

為減輕對(duì)照品供應(yīng)負(fù)擔(dān)、有效彌補(bǔ)單一成分在質(zhì)量控制方面的不足，深入研究標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)替代測(cè)定法并指導(dǎo)應(yīng)用于中藥質(zhì)量的綜合評(píng)價(jià)具有重要意義，該方法已廣泛應(yīng)用于中藥飲片（西洋參、柴胡等）、配方顆粒（淫羊藿、辛夷等）、中成藥（活血丸、柏子養(yǎng)心丸）的質(zhì)量控制研究當(dāng)中。

預(yù)計(jì)在后續(xù)的科研工作中，行業(yè)內(nèi)也會(huì)繼續(xù)對(duì)一測(cè)多評(píng)法和雙標(biāo)多測(cè)法開(kāi)展更多的研究，應(yīng)用于更多中藥品種的質(zhì)量分析與控制，中國(guó)藥典也會(huì)繼續(xù)擴(kuò)大收錄中藥的相關(guān)品種；同時(shí)，也會(huì)更多結(jié)合使用DRS Origin軟件，加快更新數(shù)據(jù)庫(kù)，提高數(shù)據(jù)規(guī)范化要求，并配合以雙標(biāo)線性校正法輔助應(yīng)用于中藥質(zhì)量控制研究及相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)修訂工作。行業(yè)工作者可以了解這些趨勢(shì)，更新思維模式，學(xué)習(xí)、總結(jié)、開(kāi)發(fā)、利用好相關(guān)技術(shù)手段，深入研究標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)替代測(cè)定法在中藥分析技術(shù)中的應(yīng)用，從而更好地解決中藥對(duì)照品供需矛盾，更全面的保證中藥質(zhì)量，更綜合的評(píng)價(jià)中藥質(zhì)量。

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Application and Development of Substitution Assay of Reference Materials

in Quality Evaluation of Traditional Chinese Medicines

JI Jiawei1， LI Zheng2， YU Jie1， QIN Wen1， FU Xintong2

（1.School of Biomedicine， Beijing City University， Beijing 100094， China;

2.Beijing Institute of Drug Control， Beijing 102206， China）

Abstract： ?The substitution assay of reference materials is a method of using one or more traditional Chinese medicines reference substances to realize the analysis of multiple components to be tested， which is a new method for quality evaluation of traditional Chinese medicines in recent years. This paper summarizes the recent research progress of the one-test-multi-evaluation method and the double-standard multi-measurement method in the alternative determination of reference materials and their application in the quality evaluation of traditional Chinese medicines， so as to provide ideas and references for their further research and application in traditional Chinese medicine chromatographic analysis technology.

Keywords：substitution assay of reference materials; one test and multiple evaluations; double standard multi-measurement method; quality evaluation of traditional Chinese medicines

（責(zé)任編輯：田榮榮）

收稿日期：2022年03月18日

作者簡(jiǎn)介：季加威（1988-），女，浙江溫州人，碩士，主要研究方向：中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)。

通訊作者：秦 雯（1977-），女，云南大理人，副教授，碩士，主要研究方向：中藥學(xué)人才培養(yǎng)，中藥化學(xué)、中藥質(zhì)量控制、評(píng)價(jià)與檢測(cè)。

基金項(xiàng)目：北京市中醫(yī)管理局北京中藥炮制技術(shù)特色研究（RHS-BJZC-J16005）。