陳芳　房新宇

安賽蜜、糖精鈉是甜味劑，苯甲酸、山梨酸是防腐劑，都被廣泛用于食品中，但這些物質(zhì)過量攝入會對人體造成一定傷害。黃酒因香氣濃郁、甘甜美味、風(fēng)味醇厚而被人們喜歡，在黃酒生產(chǎn)過程中根據(jù)需要可以適量添加焦糖色素，但嚴(yán)禁添加安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸用于增加甜味和防腐。本文對利用超高效液相色譜法（UPLC）同時測定黃酒中安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸的方法進(jìn)行了探索。實驗結(jié)果顯示，此方法簡單快速、準(zhǔn)確可靠、靈敏度高，可用于同時測定黃酒中安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸。

一、試驗準(zhǔn)備

1.儀器與試劑。Waters超高效液相色譜儀（Waters ACQUITY UPLC）系統(tǒng)，配有二極管整列檢測器、自動進(jìn)樣器、色譜工作站、Waters ACQUITY BEH shield RP18色譜柱（2.1X100mm，1.7μm）。

分析天平，感量為0.001g和0.0001g；渦旋振蕩器；離心機(jī)，轉(zhuǎn)速>8000r/min；恒溫水浴鍋；超聲波清洗器；真空抽濾器；勻漿機(jī)。

甲醇（色譜純，Merk）；乙酸銨（分析純）；亞鐵氰化鉀；乙酸鋅；安賽蜜（GBW（E）082620，1000μg/mL，北京壇墨質(zhì)檢科技有限公司）；糖精鈉（GBW（E）100008，1.00mg/mL，中國計量科學(xué)研究院）；苯甲酸（GBW（E）100006，1.00mg/mL，中國計量科學(xué)研究院）；山梨酸（GBW（E）100007，1.00mg/mL，中國計量科學(xué)研究院）。

2.試劑配制。亞鐵氰化鉀溶液（92g/L）：稱取106g亞鐵氰化鉀，加入適量水溶解，用水定容至1000mL。乙酸鋅溶液（183g/L）：稱取220g乙酸鋅溶于少量水中，加入30mL冰乙酸，用水定容至1000mL。0.02mol/L乙酸銨溶液：1.54g乙酸銨，用水定容至1000mL，0.22μm過濾。標(biāo)準(zhǔn)系列溶液配置：量取適量標(biāo)準(zhǔn)溶液，用水稀釋配置成所需濃度混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，構(gòu)成濃度分別為1.0、5.0、10.0、25.0、50.0mg/L的標(biāo)準(zhǔn)使用液。

3.樣品處理。準(zhǔn)確稱取約2g（精確到0.001g）試樣于50mL具塞離心管中，加水約25mL，渦旋混勻，于50℃水浴超聲20min，冷卻至室溫后加亞鐵氰化鉀溶液2mL和乙酸鋅溶液2mL，混勻，8000r/min離心5min。將水相轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中，殘渣中加水20mL，渦旋混勻后超聲5min，8000r/min離心5min。將水相轉(zhuǎn)移到同一50mL容量瓶中，并加水定容至刻度，混勻。取適量上清液過0.22μm濾膜，待液相色譜測定。

4.液相色譜條件。色譜柱：Waters ACQUITY UPLC BEH shield RP18色譜柱（2.1X100mm，1.7μm）；流動相：0.02mol/L的乙酸銨一甲醇（96：4）；檢測波長：230nm；光譜掃描范圍：210nm-400nm；柱溫：40℃；流速：0.3mL/min；進(jìn)樣量：10μL。

二、結(jié)果與分析

1.檢測波長的確定。本實驗對4種食品添加劑在210-400nm進(jìn)行全波長掃描，所得光譜圖見圖1，安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸的最大吸收波長見表1。為兼顧各組分的靈敏度，本文選擇的實驗波長為230nm，在此波長下各組分均有較好的靈敏度。

2.流動相及流速的選擇。把乙酸銨和甲醇水溶液作為流動相的比例分別設(shè)置為90：10和96：4和98：2，當(dāng)甲醇：乙酸銨水溶液為96：4時，出峰時間較短，且分離效果理想。如果甲醇比例更低，安賽蜜和苯甲酸將出現(xiàn)重疊，分離效果差，因此二者的比例選擇為96：4。

把甲醇和乙酸銨水溶液的比例設(shè)置為96：4，當(dāng)流速為0.6mL/min時，雖然安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸能夠很快分離，但是安賽蜜和苯甲酸的峰型不好，且保留時間太接近，分離不完全。將時間流速改為0.3mL/min時，不僅能完全分離且分離效果理想，故選擇流速為0.3mL/min。在甲醇：乙酸銨水溶液為96：4、流速為0.3mL/min時，分離效果較好，5min內(nèi)便可使4種組分完全分離，色譜圖見圖2。

3.線性范圍及檢出限。按所選擇的色譜條件進(jìn)樣不同質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液10μL，獲得不同質(zhì)量濃度下各組分的峰面積，以質(zhì)量濃度和峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。取標(biāo)品逐級稀釋進(jìn)樣10μL，按色譜儀最低響應(yīng)值S（S=3N，N為儀器噪音水平）所對應(yīng)的濃度為檢出限。各組分的線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)及檢出限見表2。從表2可以看出各組分在線性范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

4.回收率及精密度實驗。配制一混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，連續(xù)進(jìn)樣10次，做精密度實驗。再準(zhǔn)確稱取黃酒樣品2.00g，按線性范圍加入一定量的混合標(biāo)準(zhǔn)品，按選定的條件進(jìn)行分析，平行測定10次，結(jié)果如表3所示。結(jié)果顯示，被測樣品加標(biāo)回收率在96.83%-105.68%，RSD小于1.93%，測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

5.樣品的檢測分析。使用優(yōu)化后的色譜條件，對市售黃酒進(jìn)行檢測，樣品色譜圖見圖3。經(jīng)過對30件黃酒樣品的檢測，檢測結(jié)果匯總見表4。由圖3和表4可知，黃酒樣品基質(zhì)復(fù)雜，雜峰較多，且檢測出微量苯甲酸，由于規(guī)定不得添加，故建議使用加入法和質(zhì)譜法判別是否存在假陽性。

三、結(jié)論

本研究建立了超高效液相色譜法（UPLC）同時測定黃酒中安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸的分析方法。此方法簡單快速、準(zhǔn)確可靠、靈敏度高，可為黃酒中安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸的同時測定提供參考。

作者簡介：陳芳（1993-），女，漢族，安徽桐城人，技師，大學(xué)本科，研究方向為食品理化檢驗。