李秋雨

（貴州檢測(cè)技術(shù)研究應(yīng)用中心，貴州貴陽 550014）

年輕人越來越喜歡燒烤食品，燒烤味道濃郁、種類繁多、物美價(jià)廉。在高溫加熱過程中，食品會(huì)產(chǎn)生丙烯酰胺，溫度越高，就會(huì)產(chǎn)生越多的致癌物質(zhì)[1]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明，丙烯酰胺對(duì)動(dòng)物有致癌作用，但對(duì)人體是否有害目前還沒有定論。燒烤食品在熏烤中各種脂肪、蛋白質(zhì)、糖類的降解及其產(chǎn)物之間發(fā)生了復(fù)雜的化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生了特殊的味道，形成一種比丙烯酰胺致癌性更強(qiáng)的物質(zhì)——苯并芘[2]?！妒称钒踩珖覙?biāo)準(zhǔn) 食品中苯并（a）芘的測(cè)定》（GB 5009.27—2016）中采用液相色譜法測(cè)定苯并（a）芘，燒烤食品成分復(fù)雜，苯并（a）芘的加標(biāo)回收率低，結(jié)果難以重現(xiàn)，因此本文創(chuàng)建了一種可有效快速檢測(cè)燒烤食品中苯并（a）芘含量的方法[3-5]。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

燒烤肉制品，市售；正己烷、二氯甲烷，分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；乙腈（色譜純），上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司；苯并芘標(biāo)準(zhǔn)品（100 mg·L-1），上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司；固相萃取儀，美國安捷倫科技有限公司；柱子（Bap分子印跡小柱，500 mg/6 mL），上海月旭科技公司；微孔濾膜（0.22 μm），上海月旭科技公司。

1.2 儀器與設(shè)備

SQP-Secura225D-1CN 型電子天平，賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司；SH250HP 型超聲機(jī)，上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司；Agilent 1260 Infinity II 高效液相色譜儀、B100250 型多管渦旋混合器，上海月旭科技公司；Auto EVA-30Plus 型平行濃縮儀，?？萍瘓F(tuán)股份有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

配 制1.0 μg·mL-1苯 并 芘 標(biāo) 準(zhǔn) 中 間 液，吸 取0.1 mL 的苯并芘標(biāo)準(zhǔn)品（100 mg·L-1），用乙腈定容至10 mL，避光保存，保存期1 個(gè)月。配制苯并芘標(biāo)準(zhǔn)工作液，分別吸取1.0 μg·mL-1的苯并芘標(biāo)準(zhǔn)中間 液0.005 mL、0.050 mL、0.100 mL、0.200 mL 和0.500 mL，用乙腈定容至10 mL，得到0.5 ng·mL-1、5.0 ng·mL-1、10.0 ng·mL-1、20.0 ng·mL-1和50.0 ng·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配[6]。

1.3.2 苯并（a）芘含量的測(cè)定

稱取1 g（精準(zhǔn)至0.001 g）已打碎均勻的燒烤食品于15 mL 離心管中，加入6 mL 正己烷，40 ℃下超聲提取15 min，待凈化。依次用5 mL 二氯甲烷、5 mL正己烷活化苯并芘專用小柱（BAP），加入待凈化液，再將2 mL 正己烷加入樣品中，渦旋1 min，將上清液加入BAP 柱子中，用5 mL 正己烷淋洗BAP 柱子，棄去所有廢液，然后加入6 mL 二氯甲烷洗脫，收集洗脫液到15 mL 試管中，將洗脫液在45 ℃氮?dú)庀碌抵两伞?zhǔn)確吸取1 mL 乙腈渦旋1 min，過0.22 μm微孔濾膜到進(jìn)樣瓶中待測(cè)[7-8]。

1.3.3 儀器條件和參數(shù)

色 譜 柱：C18（250 mm×4.6 mm，5 mm）； 柱溫：35 ℃；流動(dòng)相：乙腈加水=80+20；熒光檢測(cè)器：激發(fā)波長為384 nm，發(fā)射波長為406 nm；流速：1.0 mL·min-1；進(jìn)樣量：20 μL[6]。

1.3.4 回收率與精密度實(shí)驗(yàn)

用燒烤肉制品作為實(shí)驗(yàn)樣品，稱取樣品1 g，平行稱6 組，加入1.0 μg·mL-1的苯并(a)芘標(biāo)準(zhǔn)溶液10 μL、15 μL、20 μL，再加入5 mL 正己烷溶液，超聲15 min。分別用5 mL 二氯甲烷、5 mL 正己烷活化苯并芘專用小柱（BAP），倒入待凈化液，將2 mL 正己烷加入樣品中，渦旋1 min，投入BAP 柱子，棄去全部液體，用5 mL 正己烷溶液淋洗，加入6 mL 二氯甲烷洗脫，收集洗脫液，再抽干，45 ℃氮吹至近干。用1 mL 乙腈定容，過膜上機(jī)，根據(jù)上機(jī)結(jié)果計(jì)算樣品回收率和精密度[9-10]。

1.3.5 儀器重復(fù)性測(cè)試

取 濃 度 為5.00 ng·mL-1、10.00 ng·mL-1、20.00 ng·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)溶液分別進(jìn)樣測(cè)試6 次，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（Relative Standard Deviation，RSD）。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件分析

研究乙腈加水為95+5、85+15、80+20 時(shí)的分離效果，當(dāng)乙腈加水為80+20 時(shí)，苯并芘的峰和樣品基質(zhì)有很好的分離效果，且色譜峰峰形好，成正態(tài)分布，苯并芘的出峰時(shí)間為8.537 min。在不同流動(dòng)相的不同比例下，苯并芘的出峰色譜圖見圖1。

圖1 苯并芘的出峰色譜圖

2.2 樣品前處理方法分析

2.2.1 提取時(shí)間的選擇

選擇了超聲5 min、10 min、15 min 提取，按照1.3.2 對(duì)樣品進(jìn)行處理，通過加標(biāo)回收選擇提取時(shí)間，結(jié)果見表1。加標(biāo)回收率提取15 min ＞提取10 min＞提取5 min，因此選擇提取15 min。

表1 不同提取時(shí)間提取苯并芘的回收率

2.2.2 定容試劑的選擇

選擇乙腈、乙腈加水（80+20）、甲醇3 種定容試劑定容，按照1.3.2 對(duì)樣品進(jìn)行前處理，通過加標(biāo)回收這3 種定容試劑，結(jié)果見表2。加標(biāo)回收率乙腈＞乙腈+水（80+20）＞甲醇，因此選擇乙腈作為定容試劑。

表2 不同定容試劑中苯并芘的回收率

2.3 線性關(guān)系、檢出限及定量限

將配制好的苯并芘標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行色譜分析，根據(jù)預(yù)先設(shè)置好的色譜條件上機(jī)測(cè)定，得到不同濃度點(diǎn)下的色譜圖。根據(jù)圖2，得到苯并芘標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度X與峰面積Y之間的關(guān)系。結(jié)果顯示，苯并芘在10 min 內(nèi)就可以完成檢測(cè)，且在0.5 ～50.0 ng·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)濃度范圍內(nèi)存在良好的線性關(guān)系，線性方程為y=185 480x-8 160.65，相關(guān)系數(shù)為0.999 9，信噪比S/N=3、S/N=10，苯并芘的檢出限為0.2 μg·kg-1，定量限為0.5 μg·kg-1[11]。

圖2 各濃度點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)色譜圖

2.4 精密度實(shí)驗(yàn)

平行稱取6 組烤肉樣品，分別加標(biāo)5 ng·mL-1、10 ng·mL-1、20 ng·mL-1，經(jīng)前處理上機(jī)測(cè)定，烤肉的加標(biāo)回收率分別為81.53%、85.82%、89.02%，回收率的RSD 分別為0.82%、0.41%、0.59%[12]，見表3。

表3 苯并芘的回收率和精密度實(shí)驗(yàn)（n=6）

2.5 儀器重復(fù)性測(cè)定結(jié)果

配制濃度為5 ng·mL-1、10 ng·mL-1、20 ng·mL-1的苯并芘標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別重復(fù)進(jìn)樣6 次，計(jì)算其峰面積重復(fù)性RSD 為0.46%、0.35%、0.22%，見表4。

表4 儀器重復(fù)性測(cè)定（n=6）

2.6 樣品的測(cè)定結(jié)果

測(cè)得3 份烤肉樣品中苯并芘分別為0.116 0 μg·kg-1、0.225 1 μg·kg-1、0.194 8 μg·kg-1，均低于國家限量值。

3 結(jié)論

運(yùn)用高效液相色譜法測(cè)定燒烤食品中苯并芘的含量，流動(dòng)相比例為乙腈+水=80+20，樣品正己烷溶液提取15 min，該方法凈化效果好、溶劑消耗少，回收率高，能有效提高工作效率，節(jié)約成本。