蔡科威，朱圣輝，梁敬姣，楊鵬

（寧波舜宇儀器有限公司，浙江 寧波 315400 ）

在現(xiàn)代臨床檢驗(yàn)過程中，血常規(guī)檢驗(yàn)是疾病篩選的重要手段之一。目前醫(yī)院中對(duì)于血常規(guī)的檢驗(yàn)主要是通過血球儀結(jié)合形態(tài)學(xué)鏡檢的方式進(jìn)行［1］，血球儀簡(jiǎn)單快捷，在常規(guī)檢查中具有明顯優(yōu)勢(shì)。但由于無法直觀看到細(xì)胞，導(dǎo)致在一些異常細(xì)胞檢查中往往作用有限。形態(tài)學(xué)鏡檢一直是第一金標(biāo)準(zhǔn)［2］，但是其效率低下，一些落后地區(qū)甚至不鏡檢和沒能力鏡檢。現(xiàn)在越來越多血液形態(tài)學(xué)分析設(shè)備和血球儀聯(lián)合應(yīng)用，兩者互補(bǔ)，減少人力同時(shí)，增加了診斷準(zhǔn)確率［3-4］。

血常規(guī)白細(xì)胞檢查中對(duì)于異常細(xì)胞檢查不容忽視，異型淋巴作為外周血鏡檢時(shí)異常細(xì)胞的一種，其異常的出現(xiàn)主要由病毒感染導(dǎo)致，是一種形態(tài)變化的非典型性淋巴細(xì)胞。其在外周血中檢出往往提示有單核細(xì)胞增多癥［5］，淋巴細(xì)胞增值性疾病，病毒感染等，尤其在小兒多見［6］。但由于血球儀方法學(xué)的局限性［7］，血球儀并不能完全提示異型淋巴細(xì)胞的存在。加上異型淋巴的三種表現(xiàn)型形態(tài)學(xué)上與其他細(xì)胞較相近，導(dǎo)致實(shí)際工作中的檢驗(yàn)難度相比其他常見白細(xì)胞類型較大。本文對(duì)比血液形態(tài)學(xué)分析系統(tǒng)和血球儀掃描結(jié)果，以人工鏡檢為檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)，探討血液形態(tài)學(xué)分析系統(tǒng)在對(duì)異型淋巴的檢出上的應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 測(cè)試對(duì)象與人員

選取2022 年6 月至9 月寧波市第一醫(yī)院收治疑似存在病毒感染的患者96 例，男54 例，女42例。年齡5 個(gè)月至75 歲。由兩名具有血液形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)的檢驗(yàn)師進(jìn)行檢測(cè)分析。

1.2 儀器與試劑

中國(guó)寧波舜宇儀器有限公司生產(chǎn)血液形態(tài)學(xué)分析系統(tǒng)AMS-200；中國(guó)寧波舜宇儀器有限公司生產(chǎn)RX50 光學(xué)顯微鏡；日本希森美康血球儀XN-9000。

寧波舜宇儀器有限公司生產(chǎn)顯微鏡專用鏡油，中國(guó)珠海貝索生物技術(shù)有限公司瑞氏吉姆薩染色液。

1.3 方法

1.3.1 樣本準(zhǔn)備和人工鏡檢 對(duì)96 例測(cè)試對(duì)象抽取靜脈血，用EDTA 抗凝。對(duì)每例樣本推制成厚薄均勻的血涂片2 張，晾干后用瑞氏吉姆薩染液進(jìn)行染色。待干燥后分別由兩名檢驗(yàn)師計(jì)數(shù)100個(gè)白細(xì)胞中的異型淋巴所占比例，形態(tài)學(xué)判斷按照全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程［8］進(jìn)行，結(jié)果統(tǒng)計(jì)平均數(shù)。國(guó)際陽性鏡檢標(biāo)準(zhǔn)中提出［9］，正常人可能存在少量反應(yīng)性淋巴，需以數(shù)量≥5%為異型淋巴檢測(cè)陽性。

1.3.2 血球儀組 血球儀通過半導(dǎo)體激光流式細(xì)胞技術(shù)以及鞘液電阻抗法對(duì)血液中的血細(xì)胞進(jìn)行綜合分析［10］，并輸出相關(guān)白細(xì)胞分類和白細(xì)胞散點(diǎn)圖等有關(guān)信息。結(jié)果以設(shè)備檢測(cè)提示異型淋巴異常為檢測(cè)陽性。

1.3.3 血液形態(tài)學(xué)分析系統(tǒng)組 血液形態(tài)學(xué)分析系統(tǒng)總體由三部分組成。第一部分為上料模塊用于標(biāo)本的放置與運(yùn)輸，最多同時(shí)可以放置200 例標(biāo)本；第二部分為掃描拍照模塊，標(biāo)本運(yùn)輸至此模塊后將會(huì)在高倍鏡下完成對(duì)焦、掃描、細(xì)胞圖像分割以及數(shù)字化圖像儲(chǔ)存；第三部分為軟件分析及閱片模塊，基于神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)重參數(shù)化技術(shù)，將訓(xùn)練階段的多分支網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)換為單路結(jié)構(gòu)，在保持多分支網(wǎng)絡(luò)高性能優(yōu)勢(shì)的同時(shí)，加快分析速度最終在電腦顯示器上顯示最終分類完畢的100個(gè)白細(xì)胞，操作者對(duì)異型淋巴細(xì)胞的分類結(jié)果進(jìn)行審核和修改工作。以找到5 個(gè)及以上異型淋巴為檢測(cè)陽性。

1.3.4 對(duì)比指標(biāo) 對(duì)比血液形態(tài)學(xué)分析系統(tǒng)和血球儀在異型淋巴細(xì)胞上的陽性檢出率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，兩組配對(duì)比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以百分率（%）表示，比較用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

在96 例樣本中人工鏡檢確認(rèn)異型淋巴陽性標(biāo)本數(shù)量為53 例，在陽性標(biāo)本檢測(cè)中血液形態(tài)學(xué)分析系統(tǒng)組診斷陽性數(shù)量50 例，血球儀組診斷陽性數(shù)量41 例，見表1。人工鏡檢與血液形態(tài)學(xué)分析系統(tǒng)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.083＞0.05），而人工鏡檢與血球儀比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表1 各組別異型淋巴的檢出情況（例）

表2 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異比較結(jié)果

3 討論

從異型淋巴和其他細(xì)胞的圖像對(duì)比中不難發(fā)現(xiàn)，異型淋巴在其外觀和大小上與其他細(xì)胞差距不大，部分表現(xiàn)極其相似，這使得血球儀在分析該部分?jǐn)?shù)據(jù)時(shí)可能造成錯(cuò)誤判斷。而形態(tài)學(xué)的分析作為判斷的標(biāo)準(zhǔn)，該檢查方式一直是最為普遍接受的方式。形態(tài)學(xué)結(jié)合圖像分析的方式從最早的簡(jiǎn)單圖像搜索加上少數(shù)細(xì)胞分類［11］到現(xiàn)在利用神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)技術(shù)進(jìn)行幾十種細(xì)胞識(shí)別，其在判斷的準(zhǔn)確性上一直有較好的表現(xiàn)。但針對(duì)于異型淋巴此類在形態(tài)學(xué)分析上存在一定判斷難度的細(xì)胞類別，其準(zhǔn)確性上需要進(jìn)一步的探究。

異型淋巴細(xì)胞根據(jù)其形態(tài)學(xué)上的差異主要分三種類型，即漿細(xì)胞型，單核型以及幼稚型。異型淋巴是特殊類型白細(xì)胞，常規(guī)檢驗(yàn)中操作者先通過血球儀的分類計(jì)數(shù)和散點(diǎn)圖的提示來懷疑是否存在異型淋巴，最終通過顯微鏡下實(shí)際觀察和計(jì)數(shù)完成確認(rèn)工作。陳夢(mèng)蕊［12］和王曉鷗等［13］對(duì)市面上的一些血球儀的異型淋巴檢查情況進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)血球儀不能完全檢查出異型淋巴數(shù)量異常的患者，在異型淋巴數(shù)目＜10%，且白細(xì)胞散點(diǎn)圖提示不明顯的情況下，可能存在漏檢風(fēng)險(xiǎn)。這是因?yàn)樯Ⅻc(diǎn)圖的表現(xiàn)方式并不能直觀的體現(xiàn)該類細(xì)胞是否有檢出，加上本身數(shù)量如果較少更是增加了檢出難度。此外異型淋巴無論大小還是外觀與其他類別細(xì)胞存在較多相似之處（見圖1），即使進(jìn)行了鏡檢，一些缺少經(jīng)驗(yàn)的醫(yī)生并不能很敏銳的進(jìn)行準(zhǔn)確判斷。

圖1 相似細(xì)胞舉例

血液形態(tài)學(xué)分析系統(tǒng)從形態(tài)學(xué)出發(fā)，通過模擬人工鏡檢的方式并對(duì)結(jié)果進(jìn)行數(shù)字化集成和表現(xiàn)，很好地彌補(bǔ)了血球儀無法直觀觀察到細(xì)胞外觀的痛點(diǎn)，給了判斷者更加直觀和準(zhǔn)確合理的判別方式。

本次研究發(fā)現(xiàn)，在異型淋巴的陽性檢出率上，血液形態(tài)學(xué)分析系統(tǒng)的檢出率為94.3%（50/53），而血球儀的陽性檢出率為77.4%（41/53），血液形態(tài)學(xué)分析要優(yōu)于血球儀。在設(shè)備原理上血液形態(tài)分析系統(tǒng)也模擬了人工鏡檢的方式，結(jié)果表現(xiàn)也更加直觀和準(zhǔn)確，適用于外周血檢查中輔助檢查異型淋巴。