雷軍寧 彭利靜 葉飛林 王妤婕 孫婷 鄒倩 張文強 徐杰

微小RNA（miRNA）和長鏈非編碼RNA（lncRNA）在各項生命活動中有重要的調(diào)控作用，包括心律失常、心肌肥大、心力衰竭、心房顫動等心血管疾病[1-3]。本研究觀察lncRNA 心臟肥大相關(guān)因子（CHRF）和微小RNA-23a（miR-23a）在急性心肌梗死合并室性心律失?；颊哐逯械谋磉_(dá)情況，為后期臨床心律失常的早期診斷提供新思路。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2019 年6 月至2021 年12 月空軍第九八六醫(yī)院心內(nèi)科108 例急性心肌梗死合并心律失?；颊邽樵囼灲M，其中男性49 例，女性59 例，年齡（50.12±16.48）歲，范圍27～76 歲。86 例健康體檢者為對照組，其中男性40 例，女性46 例，年齡（51.46±）歲，范圍25～75 歲。2 組年齡（t＝1.122，P＝0.421）、性別（χ2＝0.231，P＝0.631）差異無統(tǒng)計學(xué)意義。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合急性心肌梗死診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]，且經(jīng)72 h連續(xù)心電監(jiān)護檢查為心律失常；（2）年齡＞18 周歲；（3）紐約心臟病協(xié)會（NYHA）心功能分級為Ⅱ～Ⅲ級。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并惡性腫瘤、急性感染；（2）合并甲狀腺功能亢進(jìn)而導(dǎo)致心律失常；（3）自身免疫病、帕金森綜合征；（4）嚴(yán)重肝腎肺功能不全；（5）妊娠期或哺乳期婦女；（6）心肌梗死合并心力衰竭。

1.2 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測血清lncRNA CHRF和miR-23a表達(dá)情況

2 組均禁食12 h 后取清晨空腹靜脈血5 mL，2 500×g離心15 min 后留取血清。采用TRIzol 試劑盒（碧云天生物科技有限公司，中國）抽提血清總RNA，瓊脂糖凝膠或分光光度計檢測其濃度及純度，對純度合格的RNA 進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄；取1 μg RNA用miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit 試劑盒（南京諾唯贊生物科技股份有限公司，中國）和InRcute lncRNA（天根生物有限公司，中國）反轉(zhuǎn)錄為cDNA；使 用SYBR miRNA RT-PCR Kit（Takara，日本）和InRcute lncRNA 熒光定量檢測試劑盒（天根生物有限公司，中國）進(jìn)行PCR 檢測。RT-PCR擴增引物見表1。RT-PCR 擴增程序為：95 ℃預(yù)變性15 min，95 ℃ 30 s，60 ℃ 30 s，共40 個循環(huán)。參照2-△△Ct進(jìn)行相對定量分析，miRNA 內(nèi)參為GAPDH，lncRNA 內(nèi)參為U6。

表1 RT-PCR擴增引物

1.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測炎癥因子水平

酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測血清中腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、超敏C 反應(yīng)蛋白（hs-CRP）水平。hs-CRP 檢測試劑盒購自上海信裕生物科技有限公司，TNF-α、IL-1β 檢測試劑盒購自菲恩生物有限公司，檢測方法嚴(yán)格按照試劑盒說明操作。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

所有數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗后，采用SPSS 23.0和Origin 9.1 進(jìn)行分析。計量數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，2 組間比較采用獨立樣本t檢驗。采用受試者工作特征（ROC）曲線及二元logistic 回歸分析評估m(xù)iR-23a、lncRNA CHRF 對于心律失常的診斷價值。符合正態(tài)分布的IL-1β 與miR-23a、lncRNA CHRF 的相關(guān)性采用Pearson 相關(guān)性分析，不符合正態(tài)分布的hs-CRP 和TNF-α 與miR-23a、lncRNA CHRF 的相關(guān)性采用Spearman雙變量相關(guān)性分析。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組血清中l(wèi)ncRNA CHRF和miR-23a的表達(dá)

對照組和試驗組miR-23a 的相對表達(dá)水平分別為0.84±0.12、1.49±0.24；lncRNA CHRF 的相對表達(dá)水平分別為1.03±0.23、1.78±0.35。2 組間lncRNA CHRF 和miR-23a 表達(dá)水平的差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t＝-7.445，-7.162，P＜0.05）。

2.2 ROC曲線評估lncRNA CHRF和miR-23a對試驗組的診斷價值

miR-23a 對試驗組診斷的ROC 曲線下面積（AUC）為0.762，敏感度和特異性分別為62.0%、87.2 %，95%CI ：0.695～0.829。lncRNA CHRF 的AUC 為0.816，敏感度和特異性分別為76.9%、74.4%，95%CI：0.756～0.876。兩者聯(lián)合分析后AUC 為0.843，敏感度和特異性為75.9%、80.2%，95% CI：0.788～0.897。見圖1。

圖1 lncRNA CHRF和miR-23a對急性心肌梗死合并心律失常診斷的ROC曲線

2.3 試驗組血清miR-23a、lncRNA CHRF與炎癥因子相關(guān)性

試驗組血清miR-23a、lncRNA CHRF 與炎癥因子的相關(guān)性分析結(jié)果顯示，miR-23a、lncRNA CHRF 與IL-1β、TNF-α、hs-CRP 均呈顯著正相關(guān)。見表2。

表2 試驗組血清miR-23a、lncRNA CHRF與炎癥因子的相關(guān)性分析結(jié)果

3 討論

研究發(fā)現(xiàn)miRNA 可通過調(diào)控細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞自噬或炎癥因子分泌，在癌癥、心肌肥厚、心力衰竭等多種疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用[5-7]。易感因素通過影響鈉、鉀、鈣等離子通道功能，引發(fā)心肌細(xì)胞跨膜離子通道電流紊亂，導(dǎo)致心律失常[8]。miRNA 參與心肌梗死及室性心律失常的發(fā)病過程[9]，儲時春等[10]發(fā)現(xiàn)外周血miR-590 的表達(dá)情況和心肌梗死后急性期室性心律失常呈顯著正相關(guān)。Wang 等[11]發(fā)現(xiàn)miR-23a 過表達(dá)導(dǎo)致培養(yǎng)心肌細(xì)胞中的縫隙連接受損和間隙連接蛋白43 下調(diào)，心臟傳導(dǎo)阻滯，可引起絕經(jīng)后大鼠心律失常。本研究發(fā)現(xiàn)，與健康體檢者相比，急性心肌梗死合并室性心律失?；颊適iR-23a 顯著上調(diào)，且miR-23a 對于急性心肌梗死合并心律失常的診斷有一定價值。

lncRNA 可作為心血管疾病的關(guān)鍵檢測器和調(diào)節(jié)器[12]。Yao 等[13]發(fā)現(xiàn)長鏈非編碼RNA 心肌梗死相關(guān)轉(zhuǎn)錄本（lncRNA MIAT）可作為miR-133a-3p的靶點，調(diào)節(jié)心房顫動及其誘導(dǎo)的心肌纖維化。LncRNA CHRF 可作為miR-489 的內(nèi)源性“海綿”，抑制肥大心肌細(xì)胞miR-489 的活性和功能，進(jìn)而調(diào)節(jié)下游靶點MyD88 在肥厚心肌中表達(dá)[14]。本研究發(fā)現(xiàn)，lncRNA CHRF 在心律失常的患者中表達(dá)增加，且參與心律失常的發(fā)生，與miR-23a 聯(lián)合分析后對急性心肌梗死合并室性心律失常的診斷有一定意義。

心律失常多伴有各種心血管基礎(chǔ)病變，所以炎癥因子的表達(dá)情況往往能反映心肌損傷情況，其中最常見的炎癥因子有TNF-α、IL-1β、hs-CRP 等[15-16]。TNF-α、IL-1β 可以調(diào)控心肌細(xì)胞鈣離子通道開放，并影響心肌細(xì)胞動作電位的穩(wěn)定，從而引發(fā)心律失常[17-19]。hs-CRP 與動脈粥樣硬化引發(fā)的心律失常密切相關(guān)，是炎癥反應(yīng)中非特異性升高的急性期標(biāo)志物[18]。本研究發(fā)現(xiàn)，lncRNA CHRF、miR-23a與炎癥因子TNF-α、IL-1β、hs-CRP 均呈顯著正相關(guān)。這說明lncRNA CHRF 和miR-23a 在炎癥反應(yīng)相關(guān)的心律失常進(jìn)展中起重要作用。