余司華 蔡縣成 呂年德 何輝 劉芳菲 徐申 王茜

【摘要】? 目的? ? 了解上饒市獻血人群戊型肝炎病毒（HEV）感染情況及分布特征。方法? ? 留取上饒市中心血站2021年2月—2022年4月46 837例無償獻血者的血液樣本，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測HEV-IgM抗體，HEV-IgM陽性樣本進行逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）檢測HEV-RNA；采用整群抽樣方法，從46 837例獻血者中抽出8 449例留取樣本進行HEV-IgG抗體檢測。結(jié)果? ? 本地區(qū)獻血人群HEV-IgM和IgG陽性率分別為0.25%（117/46 837）、20.52%（1 734/8 449），檢出HEV-RNA陽性1例，HEV-RNA總體陽性率為0.002%（1/46 837）。HEV-IgM陽性率在不同性別、血型、學歷和獻血次數(shù)間差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），隨著年齡增長，陽性率顯著升高（P<0.05）。HEV-IgG陽性率在不同性別和血型間差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；隨著年齡增長，獻血次數(shù)的累積以及學歷下降，陽性率均顯著升高（P<0.05）。HEV-IgM陽性結(jié)果S/CO值大部分在1.00～3.00區(qū)間（87.18%）；HEV-IgG陽性結(jié)果S/CO值分布跨度較大，以6.01～53.00區(qū)間（47.58%）為主。結(jié)論? ? 上饒市獻血人群HEV感染率較低，但HEV經(jīng)輸血傳播仍有一定風險，本次研究為血液篩查策略提供了數(shù)據(jù)支持。

【關(guān)鍵詞】? 獻血人群；戊型肝炎病毒；IgM；IgG

Investigation on hepatitis E virus infection among blood donors in Shangrao city

Yu Sihua，Cai Xiancheng，Lv Niande，et al. The Center Blood Station of Shangrao City，Shangrao，Jiangxi? 334000

【Abstract】? Objective? ? To understand the infection and distribution characteristics of hepatitis E virus（HEV）among blood donors in Shangrao City. Methods? ? The blood samples of 46，837 unpaid blood donors from February 2021 to April 2022 were collected.Enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）was used to detect HEV-IgM antibodies，and HEV-IgM positive samples were subjected to reverse transcription polymerase chain analysis.Reaction（RT-PCR）was used to detect HEV RNA；using cluster sampling method，8449 samples were drawn from 46837 blood donors for HEV-IgG antibody detection. Results? ? The positive rates of HEV-IgM and IgG among blood donors in this area were 0.25%（117/46837）and 20.52%（1734/8449），respectively.One case was positive for HEV RNA，and the overall positive rate for HEV RNA was 0.002%（1/46837）.There was no significant difference in the positive rate of HEV-IgM among different genders，blood types，educational backgrounds and blood donation times（P>0.05）.The positive rate increased significantly with age（P<0.05）.There was no significant difference in the positive rate of HEV-IgG among different genders and blood types（P>0.05）；with the increase of age，the accumulation of blood donation times and the decrease of educational background，the positive rate increased significantly（P<0.05）.Most of the S/CO values of HEV-IgM positive results were in the range of 1.00 to 3.00 （87.18%）；the distribution of S/CO values of HEV-IgG positive results was large，mainly in the range of 6.01 to 53.00（47.58%）.Conclusion? ? The infection rate of HEV among blood donors in Shangrao City is low，but there is still a certain risk of HEV transmission through blood transfusion.This study provides data support for the blood screening strategy.

【Key Words】? Blood donors；Hepatitis E virus；IgM；IgG

中圖分類號：R446.11? ? ? ? 文獻標識碼：A? ? ? ? 文章編號：1672-1721（2023）13-0119-04

DOI：10.19435/j.1672-1721.2023.13.037

戊型肝炎是由戊型肝炎病毒（hepatitis E virus，HEV）感染引起的以肝臟實質(zhì)細胞壞死為主的病毒性肝炎，主要發(fā)生于亞洲、南美洲、非洲等發(fā)展中國家，我國也是戊肝高流行區(qū)之一，自1982年印度出現(xiàn)水源污染導致急性肝炎暴發(fā)而被發(fā)現(xiàn)，至今已報道暴發(fā)流行不少于20次，最大一次流行是發(fā)生于1986—1988年新疆南部，近12萬例感染者，死亡700多人。大部分戊肝感染者臨床癥狀不明顯，根據(jù)目前的獻血者健康檢查標準，獻血前征詢及體檢難以甄別，孕婦、器官移植患者和免疫缺陷等患者都是主要的輸血對象，且感染HEV會出現(xiàn)較嚴重情況，例如妊娠晚期孕婦輸注HEV感染的血液會導致感染HEV，易發(fā)展為重癥肝炎，從而導致肝功能衰竭，易發(fā)生母嬰死亡，并且病毒可經(jīng)垂直傳播感染后代[1]，HEV經(jīng)輸血傳播風險的研究與評估是有必要的。本次調(diào)查通過對上饒市獻血人群HEV抗體篩查及核酸檢測，了解HEV感染情況及分布特點，為保障輸血安全研究提供依據(jù)。

1? ? 資料與方法

1.1? ? 標本來源? ? 研究對象為上饒市中心血站2021年2月—2022年4月無償獻血者46 837例，男26 221例，女20 616例，男女比例1∶0.79，年齡18～60歲；留取靜脈血5 mL，乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）抗凝，3 000 r/min離心15 min后，2～8 ℃保存過夜，第二天進行血站常規(guī)項目和戊型肝炎病毒檢測，所有樣本均進行HEV-IgM抗體篩查，其中抽樣8 449份進行HEV-IgG抗體篩查。

1.2? ? 試劑與儀器? ? HEV-IgM篩查試劑由英科新創(chuàng)（廈門）科技股份有限公司提供，批號為2020127123、2021047107、2021087116、2021117120；HEV-IgG篩查試劑由北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司提供，批號為EG20201105B、EG20210201B；戊型肝炎病毒核酸檢測試劑盒由湖南圣湘提供，批號為KY202100。儀器為瑞士HAMILTON STAR全自動加樣系統(tǒng)、FAME/2 420全自動酶免處理系統(tǒng)和上海宏石SLAN熒光定量PCR儀。

1.3? ? 方法? ? 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）對樣本進行HEV-IgM及HEV-IgG抗體篩查，對HEV-IgM抗體篩查陽性樣本進行RT-PCR檢測HEV- RNA。

1.4? ? 檢測判讀

1.4.1? ? HEV抗體檢測判讀? ? 嚴格按照試劑說明書要求編寫操作規(guī)程，設(shè)定判讀規(guī)則：陰性對照A值≤0.1（若有1孔陰性對照孔A值大于0.1，應舍棄；若2孔或2孔以上陰性對照孔A值大于0.1，應重復試驗），樣本A值≥臨界值（CUTOFF）為HEV-IgM或IgG抗體陽性，樣本A值<臨界值（CUTOFF）為HEV-IgM或IgG抗體陰性。

1.4.2? ? HEV-RNA檢測判讀? ? 樣本Ct值≤38，報告為HEV-RNA陽性，樣本Ct值>38或無Ct值的樣本，報告為HEV-RNA陰性；內(nèi)標Ct值>40或無顯示，則該樣本的檢測結(jié)果無效，應查找并排除原因，并對此樣本進行重復試驗。

1.5? ? 統(tǒng)計學方法? ? 使用SPSS20.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)處理，計數(shù)資料以百分比表示，采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2? ? 結(jié)果

2.1? ? 46 837份樣本HEV-IgM篩查結(jié)果顯示117份HEV-IgM陽性，陽性率0.25%，在不同性別、血型、學歷和獻血次數(shù)間差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），隨著年齡增長，陽性率明顯升高（P<0.05），見表1。

2.2? ? 8 449份樣本HEV-IgG篩查結(jié)果顯示1 734份HEV-IgG陽性，陽性率20.52%，在不同性別和血型間差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），隨著年齡增長、獻血次數(shù)的累積以及學歷下降，陽性率均明顯升高（P<0.05），見表2。

2.3? ? ?117份HEV-IgM陽性結(jié)果S/CO值（樣本A值/CUTOFF）分布顯示，102份在1.00～3.00區(qū)間，占比87.18%；11份在3.01～6.00區(qū)間，占比9.40%；4份在6.01～9.00區(qū)間，占比3.42%。1 734份HEV-IgG陽性結(jié)果S/CO值有469份在1.00～3.00區(qū)間，占比27.05%；440份在3.01～6.00區(qū)間，占比25.37%；825份在6.01～53.00區(qū)間，占比47.58%，見表3。

2.4? ? 117份HEV-IgM陽性樣本經(jīng)戊型肝炎病毒核酸檢測，檢出HEV-RNA陽性1份，總體陽性率為0.002%（1/46 837），為合并HEV-IgG陽性，圖1、圖2。

3? ? 討論

近些年HEV經(jīng)血液傳播的研究越來越受重視，血液安全備受關(guān)注。在日本（北海道地區(qū)）、英國和一些歐洲國家等已經(jīng)或即將開始對部分或者全部無償獻血者血液樣本進行HEV篩查[2]，2014年英國報道了18例患者由于輸注了HEV-RNA陽性的血液制品感染 HEV[3]，國內(nèi)陸續(xù)有多個地區(qū)對無償獻血人群HEV抗體及核酸檢測進行研究報道。本次調(diào)查結(jié)果顯示，上饒市獻血人群HEV-IgM/IgG陽性率為0.25%/20.52%，均低于湖州1.5%/41.7%[4]、溫州0.92%/33.28%[5]、深圳1.24%/22.15%[6]、重慶1.67%/49.19%[7]等地區(qū)；HEV-RNA總體陽性率為0.002%，在全國處于較低水平，上饒市獻血人群引起戊型肝炎病毒血癥相對較少，與本地區(qū)大力推行環(huán)衛(wèi)工作有關(guān)。2016年，上饒市委、市政府提出“鞏固省級衛(wèi)生城市、爭創(chuàng)國家衛(wèi)生城市”目標，大力開展城鄉(xiāng)環(huán)境衛(wèi)生整潔行動，上饒市于2021年1月正式被評為“國家衛(wèi)生城市”，很大程度上改善了全市的環(huán)境衛(wèi)生狀況。

酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）是目前臨床上常用的傳染性疾病指標檢測方法，對于ELISA試驗結(jié)果，樣本的S/CO值在一定程度上能反映出被測對象血液中抗體水平。本次研究發(fā)現(xiàn)，HEV-IgM陽性S/CO值范圍比較小，在1.00～9.00范圍，而IgG在1.00～53.00范圍，機體感染HEV后，HEV-IgM出現(xiàn)早，消失也快，在發(fā)病1～2個月其滴度開始明顯下降，一般在發(fā)病5個月則轉(zhuǎn)為陰性，是戊肝現(xiàn)/近期感染的一個重要指標；而HEV-IgG則在IgM之后出現(xiàn)，4周后達到峰值，1年內(nèi)維持高水平，后期也可檢出，是戊肝慢性或既往感染的指標。絕大部分IgM抗體水平較低，S/CO值在1.00～3.00之間（占87.18%），符合IgM抗體出現(xiàn)早、滴度下降快的特點；極少數(shù)S/CO值在6.01～9.00之間（占3.42%）；IgG在各區(qū)間都有一定比例，且在9.01～53.00區(qū)間占多數(shù)（30.16）%，所以IgM在機體內(nèi)大部分為低水平，而IgG在機體內(nèi)持續(xù)時間長，水平跨度大。

HEV-RNA檢測是診斷HEV感染的金標準，熒光定量RT-PCR法采用磁珠法提取血清樣本中戊型肝炎病毒RNA，利用針對病毒開放讀碼框3（ORF 3）基因特異性RNA核酸保守區(qū)設(shè)計的一對特異性引物、一條特異熒光探針，配以PCR反應液，在熒光定量PCR儀上，應用實時熒光定量PCR檢測技術(shù)，通過熒光信號的變化實現(xiàn)戊型肝炎病毒核酸的檢測。血液中檢出HEV-RNA說明血液存在HEV感染，HEV-RNA檢測指標在慢性感染患者中通常有重要意義。

為了解HEV感染率在人群中分布特征，對HEV-IgM/IgG陽性率分別進行性別、年齡、血型、學歷和獻血次數(shù)分析發(fā)現(xiàn)，本地區(qū)獻血人群中HEV-IgM陽性率在不同性別、血型、學歷和獻血次數(shù)間無顯著性差異（P>0.05）；IgG陽性率在不同性別及血型間無顯著性差異（P>0.05），性別和血型都不是HEV-IgM及IgG陽性率的影響因素。隨著年齡增長，IgM和IgG陽性率均呈現(xiàn)上升趨勢，與有關(guān)報道戊型肝炎在中老年中發(fā)病率較高[8]相符；不同學歷間隨著學歷升高，IgG陽性率呈現(xiàn)下降趨勢變化（P<0.05），與年齡增長人體免疫力下降和本地區(qū)主要為農(nóng)業(yè)人口，通過糞-口途徑傳播概率較大有關(guān)；多次獻血者比初次獻血者陽性率高，與獻血者多次獻血，重復累積檢測有關(guān)。本次調(diào)查研究未對HEV核酸陽性獻血者進行基因序列分析，后期將繼續(xù)進行HEV分子生物學方面的研究，以獲得本地區(qū)HEV基因型分布特征相關(guān)數(shù)據(jù)。

HEV主要通過糞-口途徑傳播，食用未煮熟的豬肉、海產(chǎn)品或飲用被污染的水均易感染。隨著人民生活水平的提高，農(nóng)村糞便無害化處理，公共衛(wèi)生條件的改善，本地區(qū)人群感染率處于較低水平。因HEV感染無特異性抗病毒治療藥物，一般以預防為主，除了注射戊肝疫苗、改善環(huán)境衛(wèi)生條件，還可通過HEV抗體和核酸相結(jié)合的檢測模式進行血液篩查，以降低HEV經(jīng)血液傳播的風險。

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（收稿日期：2023-02-16）