蒲發(fā)曉 任婷遠(yuǎn) 王雁 姜烜星

非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）是常見(jiàn)的肺癌類型之一，我國(guó)NSCLC 發(fā)病率居高不下，大部分患者確診時(shí)處于中晚期，5年存活率相對(duì)較低。C-erbB-2基因是一種原癌基因，C-erbB-2基因所編碼的蛋白具有酪氨酸激酶活性，能夠促進(jìn)細(xì)胞增殖、分化、轉(zhuǎn)移，其在乳腺癌、食管癌、口腔癌等多種惡性腫瘤中高表達(dá)，并與患者不良預(yù)后相關(guān)［1］。C-MYC基因是一種核蛋白類癌基因，可促進(jìn)細(xì)胞分裂和無(wú)限增殖，抑制細(xì)胞凋亡，其在肝癌、胰腺癌、骨肉瘤中異常表達(dá)［2］。目前對(duì)于C-erbB-2和C-MYC基因在NSCLC 中的表達(dá)情況有初步研究，NSCLC 可能存在C-erbB-2和C-MYC 高表達(dá)［3］，但C-erbB-2 和C-MYC 高表達(dá)是否影響患者預(yù)后尚不明確。本研究將探討C-erbB-2和C-MYC基因在NSCLC 中的表達(dá)情況，分析C-erbB-2 和C-MYC 陽(yáng)性表達(dá)與NSCLC 患者臨床病理特征、預(yù)后的關(guān)系，報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2016 年1 月至2018 年3 月河西學(xué)院附屬?gòu)堃慈嗣襻t(yī)院收治的89 例NSCLC 患者，所有患者均行肺癌根治術(shù)，術(shù)中切除癌組織以及距病灶3 cm 的癌旁組織做病理診斷。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合NSCLC 的診斷標(biāo)準(zhǔn)［4］；②滿足肺癌根治術(shù)指征［4］；③病例資料及隨訪記錄完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①生存期＜3 個(gè)月；②合并其他惡性腫瘤；③遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者。男63 例，女26 例；年齡43～72 歲，平均年齡（64.37±4.05）歲。病理類型［4］：鱗癌64 例，腺癌25例。原發(fā)腫瘤-淋巴結(jié)-遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移（tumor node metastasis，TNM）分期［4］：Ⅰ期21 例，Ⅱ期32 例，Ⅲ期36 例。分化程度［4］：高分化20 例，中分化30 例，低分化39 例。伴隨區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移35 例，有吸煙史48 例。所有患者或家屬已簽署知情同意書。本研究獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

取所有NSCLC 患者肺癌根治術(shù)中切除的癌組織以及距病灶3 cm 的癌旁組織，分別在中性福爾馬林中浸泡固定24 h，經(jīng)脫水、透明后浸蠟，制作3～4 mm 石蠟切片。采用免疫組化技術(shù)檢測(cè)NSCLC 癌組織以及癌旁組織C-erbB-2 及C-MYC表達(dá)情況。由病理科醫(yī)師在光學(xué)顯微鏡下觀察，采用Bresalier 半定量法評(píng)分［5］：①染色深淺度評(píng)分：不顯色=0 分，淺黃色=1 分，棕黃色=2 分，棕褐色=3 分；②陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)評(píng)分：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜5%=0分，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)5～25%=1 分，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)26%～50%=2 分，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)51%～75%=3 分，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≥76%=4 分。染色深淺度與陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)的評(píng)分乘積0 分為陰性，≥1 分為陽(yáng)性。C-erbB-2 免疫組化染色采用鼠抗人C-erbB-2 單克隆抗體。C-MYC免疫組化染色采用兔抗人C-MYC 多克隆抗體，所有試劑盒均購(gòu)自上海酶聯(lián)生物科技有限公司。

1.3 資料收集與隨訪

收集患者臨床資料，包括性別、年齡、吸煙史、病理類型、TNM 分期、分化程度、是否有區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。根據(jù)NSCLC 癌組織標(biāo)本C-erbB-2 及C-MYC 表達(dá)情況，分為C-erbB-2 陽(yáng)性組與C-erbB-2陰性組、C-MYC 陽(yáng)性組與C-MYC 陰性組。比較各組之間的臨床特征。對(duì)所有患者進(jìn)行為期5 年的隨訪，追蹤患者生存時(shí)間和生存狀態(tài)，比較各組之間的總生存期和5 年生存率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)分析軟件分析數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料以n（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)。采用Kaplan-Meier 法繪制生存曲線，生存分析進(jìn)行Log rank 檢驗(yàn)。以P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 NSCLC 癌組織及癌旁組織的C-erbB-2 和C-MYC 表達(dá)比較

采用免疫組化技術(shù)檢測(cè)NSCLC 癌組織以及癌旁組織中C-erbB-2 及C-MYC 的表達(dá)情況。結(jié)果見(jiàn)圖1。NSCLC 癌組織的C-erbB-2、C-MYC 陽(yáng)性表達(dá)率高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 NSCLC 癌組織及癌旁組織的C-erbB-2 和C-MYC 表達(dá)比較［n（%）］Table 1 Comparison of C-erbB-2 and C-MYC expression in NSCLC cancer tissue and adjacent tissues［n（%）］

圖1 免疫組化檢測(cè)C-erbB-2 及C-MYC 在NSCLC 癌組織以及癌旁組織中的表達(dá)情況Figure 1 The expression of C-erbB-2 and C-MYC in NSCLC tissues and adjacent tissues detected with immunohistochemistry

2.2 C-erbB-2 和C-MYC 表達(dá)與NSCLC 臨床特征的關(guān)系

C-erbB-2 陽(yáng)性患者病理類型為腺癌、分化程度為低分化的比例高于C-erbB-2 陰性患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；C-erbB-2 陽(yáng)性與陰性患者的性別、年齡、吸煙史、TNM 分期、區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。C-MYC 陽(yáng)性患者TNM 分期為Ⅲ期、分化程度為低分化、有區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的比例高于C-MYC 陰性患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；C-MYC 陽(yáng)性與陰性患者的性別、年齡、吸煙史、病理類型比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表2。

表2 C-erbB-2 和C-MYC 表達(dá)與NSCLC 臨床特征的關(guān)系［n（%）］Table 2 Relationship between C-erbB-2 and C-MYC expression and clinical characteristics of NSCLC［n（%）］

2.3 C-erbB-2和C-MYC表達(dá)與NSCLC預(yù)后的關(guān)系

本研究進(jìn)行5 年隨訪，89 例NSCLC 患者中，總生存期為10.6～60.0 個(gè)月，中位生存期為57.2 個(gè)月，死亡45 例，存活44 例，5 年生存率為49.44%。C-erbB-2 陽(yáng)性與陰性患者的總生存期比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)圖2。C-MYC 陽(yáng)性與陰性患者的總生存期比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表3、圖3。

表3 C-erbB-2 和C-MYC 陽(yáng)性與陰性患者的生存情況比較Table 3 Comparison of survival between C-erbB-2 and C-MYC positive and negative patients

圖2 C-erbB-2 陽(yáng)性與陰性患者的生存曲線Figure 2 Survival curves of C-erbB-2 positive and negative patients

圖3 C-MYC 陽(yáng)性與陰性患者的生存曲線Figure 3 Survival curves of C-MYC positive and negative patients

3 討論

NSCLC 發(fā)病受遺傳因素影響，與原癌基因和抑癌基因的改變密切相關(guān)。C-erbB-2 基因?qū)儆趕rc基因家族，是常見(jiàn)的原癌基因之一。C-erbB-2 蛋白的病理研究最開(kāi)始見(jiàn)于乳腺癌，C-erbB-2 蛋白陽(yáng)性表達(dá)是乳腺癌預(yù)后差的重要標(biāo)志物［6］。C-erbB-2在正常上皮細(xì)胞中存在微弱表達(dá)，但無(wú)基因擴(kuò)增。本研究發(fā)現(xiàn)，NSCLC 癌組織的C-erbB-2 陽(yáng)性表達(dá)率高于癌旁組織，提示C-erbB-2 在NSCLC 癌組織中表達(dá)上調(diào)。進(jìn)一步分析C-erbB-2 陽(yáng)性表達(dá)與臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系，結(jié)果顯示，病理類型為腺癌、低分化的NSCLC 患者的C-erbB-2 陽(yáng)性表達(dá)率較高。朱國(guó)榮等［7］研究也報(bào)道，C-erbB-2 與組織學(xué)分型相關(guān)，周圍型、腺癌的患者C-erbB-2 陽(yáng)性表達(dá)率較高。C-erbB-2 在腺癌中的表達(dá)較高，可能是因?yàn)榉蜗侔┢鹪从谥夤莛つど掀ぜ罢骋合?，大部分患者病灶在外周，表現(xiàn)為周圍型肺癌，肺腺癌組織的C-erbB-2 受體較多。本研究結(jié)果顯示NSCLC 低分化與C-erbB-2 高表達(dá)有關(guān)，機(jī)制可能是C-erbB-2 基因表達(dá)的蛋白產(chǎn)物具有酪氨酸激酶活性，可催化三磷酸腺苷的磷酸基，C-erbB-2 基因表達(dá)的蛋白產(chǎn)物經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)移之后使下游蛋白酪氨酸殘基發(fā)生磷酸化，促進(jìn)了細(xì)胞無(wú)限增殖和低分化，分化程度越低說(shuō)明腫瘤細(xì)胞與正常細(xì)胞的異型性越大，故而C-erbB-2 高表達(dá)的患者更容易發(fā)生低分化。本研究發(fā)現(xiàn)，C-erbB-2 陽(yáng)性表達(dá)患者的總生存期較短，5 年生存率也較低。既往研究［8］分析乳腺癌及子宮內(nèi)膜癌患者C-erbB-2 與預(yù)后的關(guān)系，也發(fā)現(xiàn)C-erbB-2 陽(yáng)性表達(dá)患者的預(yù)后更差，5 年生存率更低。這可能是因?yàn)镃-erbB-2 陽(yáng)性表達(dá)患者癌組織的分化程度越低，與正常組織的異型性越高，腫瘤的惡性程度也越高，癌細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移、進(jìn)展也越快，也更容易復(fù)發(fā)，治療效果相對(duì)較差，因此患者生存期也較短。

C-MYC基因是一種具有轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用的癌基因，是人類較常見(jiàn)的高豐度癌基因，屬于MYC基因家族成員。該家族包括C-MYC、N-MYC、L-MYC 等基因，其中C-MYC 基因參與調(diào)節(jié)與DNA 損傷和修復(fù)有關(guān)的基因表達(dá)，激活基因突變，表達(dá)大量C-MYC 蛋白，促進(jìn)細(xì)胞增殖和分化［9］。本研究發(fā)現(xiàn)，NSCLC 癌組織的C-MYC 陽(yáng)性表達(dá)率高于癌旁組織。李王平等［10］研究也報(bào)道，在人小細(xì)胞肺癌H446 細(xì)胞中C-MYC 高表達(dá)。本研究顯示，C-MYC 在Ⅲ期、低分化、有區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的NSCLC 患者中高表達(dá)，這與李琛等［11］研究觀點(diǎn)一致。分析機(jī)制：C-MYC 基因主要通過(guò)基因擴(kuò)增和染色體易位重排的方式激活，C-MYC 基因產(chǎn)物為外顯子2 和3 共同編碼的P62C-MGC 磷酸化蛋白，其通過(guò)與染色體DNA 結(jié)合發(fā)揮轉(zhuǎn)化細(xì)胞的能力，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)、分化［12］。C-MYC 表達(dá)越高，癌細(xì)胞的分化程度也越低，惡性程度越高，越容易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，TNM 分期也越高［13］。進(jìn)一步對(duì)C-MYC 陽(yáng)性與陰性患者進(jìn)行生存分析，結(jié)果顯示，C-MYC 陽(yáng)性患者的5 年生存率明顯低于C-MYC 陰性患者，預(yù)后更差。

綜上所述，C-erbB-2 和C-MYC 表達(dá)情況與NSCLC 臨床特征相關(guān)，C-erbB-2 和C-MYC 表達(dá)情況與NSCLC 患者預(yù)后密切相關(guān)，可作為分子標(biāo)志物評(píng)估NSCLC 患者預(yù)后。