覃達(dá)文　楊秀程　洪章萍　熊倩妤　蒙楠　胡勇　楊興林

摘要：目的 分析貴州省近3年人類免疫缺陷病毒（HIV）/艾滋?。ˋIDS）患者合并梅毒感染病毒（HIV-RNA）載量與T淋巴細(xì)胞亞群之間的相關(guān)性。方法 選取2019年1月1日—2021年12月31日在貴陽市公共衛(wèi)生救治中心新確診且未進(jìn)行抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療（ART）的HIV/AIDS患者2 869例。根據(jù)患者梅毒檢測結(jié)果，分為單純HIV感染組2 289例、HIV/梅毒現(xiàn)癥感染組333例和HIV/梅毒既往感染組247例。比較3組患者一般人口學(xué)資料及實(shí)驗(yàn)室檢測指標(biāo)基線數(shù)據(jù)的差異，并分析HIV不同組間各自HIV-RNA載量與T淋巴細(xì)胞亞群的相關(guān)性。結(jié)果 HIV/梅毒現(xiàn)癥感染組的年齡小于單純HIV感染組和HIV/梅毒既往感染組，男性占比高于單純HIV感染組和HIV/梅毒既往感染組（P＜0.05）。HIV/梅毒現(xiàn)癥感染組的HIV-RNA載量低于單純HIV感染組，CD4⁺T細(xì)胞、CD8⁺T細(xì)胞、CD3⁺T細(xì)胞均高于單純HIV感染組（P＜0.05）；HIV/梅毒既往感染組的HIV-RNA載量高于HIV/梅毒現(xiàn)癥感染組，CD4⁺T細(xì)胞、CD8⁺T細(xì)胞、CD3⁺T細(xì)胞均低于HIV/梅毒現(xiàn)癥感染組（P＜0.05）；HIV不同組間CD4/CD8比值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。單純HIV感染組和HIV/梅毒既往感染組Ⅰ級、Ⅱ級、Ⅲ級HIV-RNA載量均依次降低（P＜0.05）；HIV/梅毒現(xiàn)癥感染組Ⅱ級、Ⅲ級HIV-RNA載量低于Ⅰ級（P＜0.05）。3組患者HIV-RNA載量與T淋巴細(xì)胞亞群均呈負(fù)相關(guān)（P＜0.01）。結(jié)論 HIV/梅毒合并感染后T淋巴細(xì)胞亞群發(fā)生改變；隨著HIV-RNA載量的變化，HIV/梅毒合并感染的T淋巴細(xì)胞亞群亦有所差異。

關(guān)鍵詞：人類免疫缺陷病毒；艾滋??；梅毒；病毒載量；T淋巴細(xì)胞；貴州

中圖分類號：R512.91，R759.1文獻(xiàn)標(biāo)志碼：ADOI：10.11958/20221797

Correlation analysis between viral load and T lymphocyte subsets in HIV/AIDS patients

co-infected with syphilis infection in Guizhou province

QIN Dawen YANG Xiucheng HONG Zhangping XIONG Qianyu MENG Nan HU Yong YANG Xinglin

1 School of Public Health and Wellness， Guizhou Medical University， Guiyang 550025， China;

2 Department of Laboratory， Guiyang Medical Center for Public Health

△Corresponding Author E-mail： yangxinglin.123@163.com

Abstract： Objective To analyze the correlation between HIV-RNA load and T lymphocyte subsets in HIV/AIDS patients co-infected with syphilis in Guizhou province in recent three years. Methods A total of 2 869 newly diagnosed HIV/AIDS patients who did not receive antiretroviral therapy （ART） were selected in the public health rescue center of Guiyang from January 1， 2019 to December 31， 2021. According to results of syphilis testing， patients were divided into the simple HIV infection group （n= 2 289）， the current HIV/syphilis infection group （n=333） and the previous HIV/syphilis infection group （n=247）. The general demography data and the baseline data of laboratory test indicators were compared between the three groups of patients. The correlation between the HIV-RNA load and T lymphocyte subsets in different groups of HIV was analyzed. Results The age of the HIV/syphilis current infection group was lower than that of the HIV/syphilis simple infection group and the HIV/syphilis past infection group， and the proportion of males was higher than that of the HIV simple infection group and the HIV/syphilis past infection group （P＜0.05）. The HIV-RNA load was lower in the HIV/syphilis current infected group than that in the HIV-only infected group. CD4⁺T cells， CD8⁺T cells， and CD3⁺T cells were higher in the HIV/syphilis current infected group than those of the HIV simple infection group （P＜0.05）. The HIV-RNA load was higher in the HIV/syphilis previous infection group than that in the HIV/syphilis current infection group， and CD4⁺T cells， CD8⁺T cells and CD3⁺T cells were lower than those in the HIV/syphilis current infection group （P＜0.05）. There was no significant difference in the CD4/CD8 ratio between different HIV groups （P＞0.05）. The HIV-RNA load of grade Ⅰ， Ⅱ and Ⅲ decreased sequentially in the simple HIV infection group and the? previous HIV/syphilis infection group （P＜0.05）. The HIV-RNA load of grade Ⅱ and Ⅲ in the HIV/syphilis current infection group was lower than that of grade Ⅰ （P＜0.05）. There was a negative correlation between HIV-RNA load and T lymphocyte subsets in the three groups of patients （P＜0.01）. Conclusion Changes in? T lymphocyte subsets occur after HIV/syphilis co-infection. With changes in HIV-RNA load， there are also differences in the T lymphocyte subsets of HIV/syphilis co-infection.

Key words： HIV; AIDS; syphilis; viral load; T lymphocyte; Guizhou

艾滋病（acquired immune deficiency syndrome，AIDS）是國內(nèi)外關(guān)注的重大傳染性疾病，截至2021年底，全球約有3 840萬例人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）感染者，其中2021年新發(fā)感染者約150萬［1］。HIV主要以破壞CD4⁺T細(xì)胞為主，導(dǎo)致機(jī)體免疫功能缺陷，同時梅毒與HIV感染存在相似的傳播途徑（如性傳播、血液傳播、母嬰傳播等），使得合并梅毒感染的概率增加［2-3］。CD4⁺T細(xì)胞水平是反映機(jī)體免疫功能及病程進(jìn)展的一項(xiàng)重要免疫指標(biāo)，與機(jī)體內(nèi)病毒（HIV-RNA）載量相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，HIV/梅毒合并感染時，HIV-RNA載量升高，CD4⁺T細(xì)胞數(shù)量下降，可引起免疫系統(tǒng)功能損傷，嚴(yán)重者導(dǎo)致“惡性梅毒”發(fā)生［4-6］。近年來，針對HIV/梅毒合并感染是否影響HIV的病程進(jìn)展尚存較大爭議［7-8］。本研究選擇貴州省近3年新確診且未進(jìn)行抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療（antiretroviral therapy，ART）的HIV/AIDS患者，通過回顧性分析單純HIV感染及HIV/梅毒合并感染的HIV-RNA載量和T淋巴細(xì)胞亞群變化差異、CD4⁺T細(xì)胞計(jì)數(shù)級別與HIV-RNA載量差異、各自HIV-RNA載量與T淋巴細(xì)胞亞群的相關(guān)性，了解HIV/梅毒合并感染時HIV-RNA載量與T淋巴細(xì)胞亞群的變化情況，為臨床診療提供參考依據(jù)。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選擇2019年1月1日—2021年12月31日在貴陽市公共衛(wèi)生救治中心新確診且未進(jìn)行ART的HIV/AIDS患者為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）HIV/AIDS患者由貴州省HIV確診實(shí)驗(yàn)室診斷為HIV陽性。（2）HIV/AIDS患者進(jìn)行梅毒診斷。（3）一般人口學(xué)資料及基線實(shí)驗(yàn)室檢測指標(biāo)完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）既往接受ART。（2）合并病毒性肝炎。（3）患有嚴(yán)重自身免疫性疾病、精神疾病及惡性腫瘤。HIV/AIDS患者診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《中國艾滋病診療指南（2018版）》［9］，梅毒診斷參照WS273-2018梅毒診斷標(biāo)準(zhǔn)［10］。本研究方案通過貴陽市公共衛(wèi)生救治中心倫理委員會審查（審批編號：202148），所有患者均簽署知情同意書。

1.2 研究方法

回顧性收集整理患者年齡、性別等一般人口學(xué)資料，在瑞美實(shí)驗(yàn)室管理系統(tǒng)中搜索梅毒螺旋體、HIV-RNA、CD4⁺T細(xì)胞、CD8⁺T細(xì)胞、CD3⁺T細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室檢測指標(biāo)并將對應(yīng)患者的數(shù)據(jù)錄入Excel，同時對所有收集的數(shù)據(jù)進(jìn)行嚴(yán)格審核。

1.3 實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)檢測及分組

通過無菌試管收集患者空腹外周血10 mL，并在24 h內(nèi)進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)檢測，包括梅毒螺旋體、HIV-RNA、CD4⁺T細(xì)胞、CD8⁺T細(xì)胞、CD3⁺T細(xì)胞。

1.3.1 梅毒檢測

采用快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)（RPR）聯(lián)合梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)（TPPA）進(jìn)行診斷，試劑盒分別購自上海科華和日本富士公司（批號分別為20181109、VN181012），并按照說明書進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。根據(jù)患者梅毒檢測結(jié)果，分為單純HIV感染組［RPR（-）TPPA（-）］、HIV/梅毒現(xiàn)癥感染組［RPR（+）TPPA（+）］、HIV/梅毒既往感染組［RPR（-）TPPA（+）］。

1.3.2 病毒載量檢測

采用實(shí)時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（quantitative real-time reverse transcription polymerase chain reaction，RT-qPCR）方法檢測，使用COBAS AmpliPrep儀器及核酸提取試劑盒（美國Roche公司）提取HIV-RNA，通過COBAS TaqMan 48測定其病毒載量。相關(guān)操作按照說明書進(jìn)行。

1.3.3 T淋巴細(xì)胞亞群檢測

使用BD FACSCantoTM Ⅱ流式細(xì)胞分析儀（美國BD公司）及專用試劑盒對T淋巴細(xì)胞亞群進(jìn)行檢測。采用反向移液技術(shù)吸取50 μL混勻的EDTA-K2抗凝全血，加入管底，避免血液碰到管壁上部。在流式管底部加入一定量的流式抗體試劑，將流式管放置旋渦混合器（型號XH-B）上方，輕輕渦動混勻約3 s，室溫避光反應(yīng)25 min。向管內(nèi)加入450 μL流式細(xì)胞儀用溶血劑，輕輕渦動混勻約15 s，室溫避光反應(yīng)10 min。絕對計(jì)數(shù)微球開瓶之前渦動混勻約30 s。吸取50 μL混勻后的絕對計(jì)數(shù)微球，加入管底，避免液體碰到管壁上部，輕輕渦動混勻約10 s。上機(jī)檢測。CD4⁺T細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測結(jié)果分為3級：Ⅰ級，CD4⁺T細(xì)胞計(jì)數(shù)≤200個/μL；Ⅱ級，CD4⁺T細(xì)胞計(jì)數(shù)201～350個/μL；Ⅲ級，CD4⁺T細(xì)胞計(jì)數(shù)≥351個/μL。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 24.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。為方便統(tǒng)計(jì)將HIV-RNA載量進(jìn)行對數(shù)轉(zhuǎn)換。計(jì)量資料正態(tài)性檢驗(yàn)采用K-S檢驗(yàn)法，非正態(tài)分布的計(jì)量資料以M（P₂₅，P₇₅）表示，多組間比較采用Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)，組間多重比較采用Nemenyi檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例（%）表示，多組間比較采用χ²檢驗(yàn)；采用Spearman秩相關(guān)分析HIV不同組間各自HIV-RNA載量與T淋巴細(xì)胞亞群的相關(guān)性。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組間一般資料比較

共納入研究對象2 869例，其中單純HIV感染組2 289例，男1 616例（70.6%），女673例（29.4%）；年齡1～91歲，中位年齡46.0（31.5，58.0）歲。HIV/梅毒現(xiàn)癥感染組333例，男276例（82.9%），女57例（17.1%），年齡16～80歲，中位年齡33.0（26.0，50.0）歲。HIV/梅毒既往感染組247例，男175例（70.9%），女72例（29.1%），年齡19～88歲，中位年齡48.0（34.0，61.0）歲。HIV/梅毒現(xiàn)癥感染組的年齡小于單純HIV感染組及HIV/梅毒既往感染組（χ2=66.245，P＜0.05），男性占比高于單純HIV感染組及HIV/梅毒既往感染組（χ2=21.974，P＜0.05）。

2.2 不同組間HIV-RNA載量和T淋巴細(xì)胞亞群變化比較

HIV/梅毒現(xiàn)癥感染組的HIV-RNA載量低于單純HIV感染組，CD4⁺T細(xì)胞、CD8⁺T細(xì)胞、CD3⁺T細(xì)胞均高于單純HIV感染組（P＜0.05）；HIV/梅毒既往感染組的HIV-RNA載量高于HIV/梅毒現(xiàn)癥感染組，CD4⁺T細(xì)胞、CD8⁺T細(xì)胞、CD3⁺T細(xì)胞均低于HIV/梅毒現(xiàn)癥感染組（P＜0.05）；不同組間CD4/CD8比值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

2.3 不同組間CD4⁺T細(xì)胞計(jì)數(shù)級別與HIV-RNA載量的差異

同一CD4⁺T細(xì)胞計(jì)數(shù)級別下3組間HIV-RNA載量差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。3組內(nèi)CD4⁺ T細(xì)胞計(jì)數(shù)級別與各自HIV-RNA載量差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；其中，單純HIV感染組和HIV/梅毒既往感染組Ⅰ級、Ⅱ級、Ⅲ級HIV-RNA載量均依次降低（P＜0.05）；HIV/梅毒現(xiàn)癥感染組Ⅱ級、Ⅲ級HIV-RNA載量低于Ⅰ級（P＜0.05），Ⅱ級與Ⅲ級間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表2。

2.4 3組各自HIV-RNA載量與T淋巴細(xì)胞亞群的相關(guān)性

單純HIV感染組、HIV/梅毒現(xiàn)癥感染組、HIV/梅毒既往感染組中各自HIV-RNA載量與T淋巴細(xì)胞亞群均呈負(fù)相關(guān)（P＜0.01），見表3。

3 討論

T淋巴細(xì)胞對機(jī)體的免疫反應(yīng)發(fā)揮關(guān)鍵作用，患者感染HIV時，CD4⁺T細(xì)胞是HIV-RNA攻擊的重要靶細(xì)胞，導(dǎo)致外周循環(huán)系統(tǒng)中CD4⁺T細(xì)胞數(shù)量逐漸減少［11］。然而，機(jī)體主要利用CD4⁺T細(xì)胞清除梅毒螺旋體［12］。章松平等［13］研究顯示，HIV/AIDS患者合并梅毒隱性感染早期，細(xì)胞免疫功能可能有所增強(qiáng)。本研究也發(fā)現(xiàn)，HIV/梅毒現(xiàn)癥感染組CD4⁺T細(xì)胞數(shù)量高于單純HIV感染組，提示HIV/梅毒現(xiàn)癥感染組的基線CD4⁺T細(xì)胞計(jì)數(shù)可能出現(xiàn)一過性增加，這有利于更多的CD4⁺T細(xì)胞攻擊梅毒螺旋體，加強(qiáng)其清除力度。但是，本研究結(jié)果顯示，HIV/梅毒既往感染組的CD4⁺T細(xì)胞數(shù)量低于HIV/梅毒現(xiàn)癥感染組，HIV-RNA載量高于HIV/梅毒現(xiàn)癥感染組，提示梅毒患者既往感染時免疫系統(tǒng)可能已受到損傷，在合并HIV感染后，基線CD4⁺T細(xì)胞計(jì)數(shù)并未出現(xiàn)一過性增加的現(xiàn)象，表明HIV/梅毒合并感染的不同時期，機(jī)體免疫激活狀態(tài)與CD4⁺T細(xì)胞、HIV-RNA載量密切相關(guān)且有所差異，推測其會影響梅毒的疾病進(jìn)展。因此，及時檢測HIV-RNA載量、T淋巴細(xì)胞亞群對于梅毒的病程進(jìn)展及臨床診療至關(guān)重要。

HIV/AIDS患者合并梅毒感染是否影響HIV的病程進(jìn)展目前尚存較大爭議。有研究報道，HIV/梅毒合并感染并不會影響HIV疾病進(jìn)展［7］。另有研究發(fā)現(xiàn)，HIV合并梅毒感染者的CD4⁺T細(xì)胞數(shù)量的減少與HIV-RNA載量增加有關(guān)［14-15］。本研究結(jié)果顯示，單純HIV感染組和HIV/梅毒既往感染組中Ⅰ級、Ⅱ級、Ⅲ級HIV-RNA載量依次降低，且2組患者HIV-RNA載量與CD4⁺T細(xì)胞數(shù)量呈負(fù)相關(guān)，表明隨著HIV-RNA載量增加，CD4⁺T細(xì)胞數(shù)量的減少，導(dǎo)致機(jī)體免疫系統(tǒng)功能缺陷，推測可能會影響HIV患者的病程進(jìn)展，這與相關(guān)報道結(jié)果相似［8，16］。因此，筆者建議對所有單純HIV及合并梅毒患者應(yīng)進(jìn)行HIV-RNA載量、T淋巴細(xì)胞亞群檢測，并及時接受相應(yīng)治療。

綜上所述，HIV/梅毒合并感染后T淋巴細(xì)胞亞群發(fā)生改變；隨著HIV-RNA載量的變化，HIV/梅毒合并感染的T淋巴細(xì)胞亞群亦有所差異。HIV/梅毒合并感染的細(xì)胞學(xué)免疫機(jī)制錯綜復(fù)雜，目前仍未完全明確，一定程度上HIV-RNA載量與T淋巴細(xì)胞免疫功能相互影響，是病情發(fā)生、發(fā)展與轉(zhuǎn)歸的重要因素。本研究的局限性在于：作為一項(xiàng)觀察性研究，未對HIV/梅毒合并感染進(jìn)行臨床分期研究，且未考慮患者年齡、性別、種族等因素，僅探討了新確診且未進(jìn)行ART的HIV/梅毒合并感染基線HIV-RNA載量與T淋巴細(xì)胞亞群的相關(guān)性。本研究為下一步開展前瞻性研究提供思路，針對新確診的HIV/梅毒合并感染進(jìn)行臨床分期并開展隨訪調(diào)查，觀察患者在治療期間的HIV-RNA載量和T淋巴細(xì)胞亞群變化，從而為疾病的臨床治療提供理論依據(jù)。

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（2022-11-14收稿 2023-02-09修回）

（本文編輯 陳麗潔）