孫慶生,黃彭,李希,張姍,張照蘭

1.鄭州市中醫(yī)院,河南 鄭州 450000; 2.大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院,遼寧 大連 116011;3.睢縣人民醫(yī)院,河南 睢縣 476900; 4.濰坊市人民醫(yī)院,山東 濰坊 261000; 5.虞城縣人民醫(yī)院,河南 虞城 476300; 6.河南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院,河南 鄭州 450000

慢性萎縮性胃炎(chronic atrophic gastritis,CAG)是最常見(jiàn)的消化系統(tǒng)疾病,以黏膜萎縮、血管外露和黏膜結(jié)節(jié)為特征,臨床主要表現(xiàn)為上腹痛、消化不良、腹脹、惡心、嘔吐、打嗝、食欲不振和體質(zhì)量減輕等。從病理學(xué)角度來(lái)講,CAG可發(fā)展為腸化生和異型增生,而這些都屬于癌前病變,也是從炎癥到腸型胃癌的重要病理階段[1]。數(shù)據(jù)顯示,1%的慢性胃部炎癥患者可能發(fā)展為惡性胃腫瘤[2]。目前CAG的西醫(yī)治療包括保護(hù)胃黏膜、抗幽門螺桿菌以及促進(jìn)胃動(dòng)力方面的藥物。從中醫(yī)學(xué)來(lái)講,慢性萎縮性胃炎屬于“痞滿”“胃脘痛”等范疇,臨床常見(jiàn)分型主要為脾胃虛弱證。六君子湯來(lái)源于《醫(yī)學(xué)正傳》,由人參、白術(shù)、茯苓、甘草、陳皮、半夏6味中藥組成,具有益氣健脾,燥濕化痰的功效,主要用于治療食少便溏、胸脘痞悶、嘔逆等脾胃氣虛兼痰濕等脾胃氣虛之證,臨床研究表明,六君子湯可緩解脾胃虛弱型CAG患者的臨床癥狀,減輕患者氧化應(yīng)激及炎癥反應(yīng)[3]。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是生物信息學(xué)的重要組成部分,在解析多組分藥物作用方面發(fā)揮著重要的作用。李梢提出“網(wǎng)絡(luò)靶點(diǎn)”這一新概念,將單個(gè)分子藥物靶點(diǎn)的概念擴(kuò)展到其對(duì)生物網(wǎng)絡(luò)的系統(tǒng)效應(yīng),以研究化合物的系統(tǒng)性作用機(jī)制[4]。作為網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的核心觀點(diǎn),“網(wǎng)絡(luò)靶點(diǎn)”為分析研究中藥方劑的物質(zhì)基礎(chǔ)及指導(dǎo)活性成分的挖掘提供新的研究策略。

CAG的本質(zhì)是慢性炎癥浸潤(rùn)[5],在生理病理過(guò)程中,核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域樣受體蛋白3(Nod-like receptor protein 3,NLRP3)炎性小體以非活性形式出現(xiàn),并被許多信號(hào)激活,在促進(jìn)細(xì)胞炎癥及程序性死亡中發(fā)揮重要作用[6]。目前,NLRP3炎性小體在慢性萎縮性胃炎中的研究缺乏,且在胃炎向胃癌轉(zhuǎn)化機(jī)制中作用不明確。為了更好地研究NLRP3炎性小體介導(dǎo)的六君子湯治療慢性萎縮性胃炎及其炎癌轉(zhuǎn)化機(jī)制,本研究應(yīng)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)進(jìn)行分析,通過(guò)對(duì)六君子湯中目標(biāo)化合物進(jìn)行預(yù)測(cè),將活性化學(xué)成分分別與活性靶點(diǎn)進(jìn)行分子對(duì)接比較,同時(shí),應(yīng)用KEGG通路富集分析,進(jìn)一步探究六君子湯對(duì)CAG的作用機(jī)制,并通過(guò)開(kāi)源數(shù)據(jù)庫(kù)分析平臺(tái)對(duì)腸化生、異型增生、胃癌的不同病理階段的核心靶點(diǎn)進(jìn)行分析。

1 資料與方法

1.1 NLRP3相關(guān)靶點(diǎn)的預(yù)測(cè)以“NRLP3”為關(guān)鍵詞,從以下數(shù)據(jù)庫(kù)中獲取NRLP3相關(guān)靶點(diǎn):(1)比較毒理基因組學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)(comparative toxicogenomics database,CTD,http://ctdbase.org/):用于研究化學(xué)物質(zhì)、基因和疾病之間的作用關(guān)系;(2)STRING數(shù)據(jù)庫(kù):STRING作為在線分析平臺(tái),能夠根據(jù)置信區(qū)間的不同,對(duì)不同蛋白質(zhì)之間的功能聯(lián)系進(jìn)行預(yù)測(cè);(3)STITCH數(shù)據(jù)庫(kù):STITCH數(shù)據(jù)庫(kù)是一個(gè)用于檢索已知的以及被預(yù)測(cè)的化合物和靶蛋白之間相互作用關(guān)系的開(kāi)源數(shù)據(jù)庫(kù)平臺(tái)。

1.2 六君子湯化學(xué)成分篩選、靶點(diǎn)預(yù)測(cè)和NLRP3介導(dǎo)活性成分相關(guān)靶點(diǎn)的獲取藥物吸收、分布、代謝和排泄(absorption、distribution、metabolism、excretion,ADME)研究是藥代動(dòng)力學(xué)的重要內(nèi)容,在藥物篩選方面占有重要的地位。藥物不僅具備較好的臨床效果,還需要擁有最佳的ADME特性[7]。ADME參數(shù)的應(yīng)用,不僅有利于降低新藥研發(fā)的成本,而且有助于提高成功率。本研究基于藥物ADME特性,以口服生物利用度(oral bioavailability,OB)和類藥性(drug-likeness,DL)作為篩選指標(biāo),設(shè)定OB≥30%且DL≥0.18[8],分別以“人參”“茯苓”“白術(shù)”“甘草”“半夏”“陳皮”為關(guān)鍵詞,從中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)(traditional Chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform,TCMSP,http://lsp.nwu.edu.cn/tcmsp.php)[9]篩選六君子湯組方中藥的活性成分?；谒Y選化學(xué)成分,通過(guò)以下2種方法預(yù)測(cè)成分相關(guān)靶點(diǎn):(1)以活性成分為關(guān)鍵詞,在TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)中搜索相關(guān)靶點(diǎn),選取來(lái)源于“DrugBank”的靶點(diǎn)以提高結(jié)果預(yù)測(cè)的準(zhǔn)確性,其中DrugBank是生物信息學(xué)和化學(xué)信息學(xué)相結(jié)合的數(shù)據(jù)庫(kù),詳細(xì)地將藥物數(shù)據(jù)和藥物靶標(biāo)信息結(jié)合起來(lái);(2)利用PubChem數(shù)據(jù)庫(kù)檢索成分的Canonical SMILES,并采用Swiss Target Prediction數(shù)據(jù)庫(kù)(http://www.swisstargetprediction.ch/)[10]預(yù)測(cè)活性成分相關(guān)靶點(diǎn)。作為一個(gè)在線網(wǎng)絡(luò)工具,Swiss Target Prediction基于相似原理,通過(guò)反向篩選預(yù)測(cè)小分子最可能的蛋白質(zhì)靶標(biāo)。根據(jù)其結(jié)果相關(guān)性,選取“probability>0.5”的靶點(diǎn)進(jìn)行下一步分析[11]。使用Uniport數(shù)據(jù)庫(kù)(https://www.uniprot.org/)[12]將成分所對(duì)應(yīng)的蛋白名稱轉(zhuǎn)化為基因名,限定物種為“human”,從而獲取成分相應(yīng)靶點(diǎn)基因。將NLRP3相關(guān)活性靶點(diǎn)和活性成分靶點(diǎn)導(dǎo)入Cytoscape軟件獲取活性成分相關(guān)靶點(diǎn)和NLRP3相關(guān)靶點(diǎn)的交集,并構(gòu)建“中藥-活性成分-交集靶點(diǎn)-NLRP3”網(wǎng)絡(luò)圖,應(yīng)用Network Analyzer功能對(duì)網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行拓?fù)浞治龊Y選核心活性成分。利用Cytoscape插件“Network Analyzer”功能對(duì)可視化網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行拓?fù)鋵W(xué)分析,獲取自由度值(Degree)等相關(guān)參數(shù)以分析網(wǎng)絡(luò)節(jié)點(diǎn)重要性。在網(wǎng)絡(luò)圖中,“節(jié)點(diǎn)”表示中藥、活性成分、靶點(diǎn)或疾病,“邊”是指兩個(gè)節(jié)點(diǎn)之間的聯(lián)系,節(jié)點(diǎn)的“度”是描述與節(jié)點(diǎn)相連的邊的數(shù)目[13],度值越大,表明節(jié)點(diǎn)在網(wǎng)絡(luò)中的重要性相對(duì)較高。

1.3 慢性萎縮性胃炎、炎癌轉(zhuǎn)化重要病理階段靶點(diǎn)預(yù)測(cè)和NLRP3介導(dǎo)的疾病相關(guān)靶點(diǎn)獲取以“慢性萎縮性胃炎(chronic atrophic gastritis)、腸上皮化生(intestinal metaplasia)、胃黏膜上皮異型增生(gastric epithelial dysplasia)、胃癌(gastric carcinoma/cancer)”為關(guān)鍵詞,從以下數(shù)據(jù)庫(kù)中獲得疾病相關(guān)靶點(diǎn):(1)DisGeNET數(shù)據(jù)庫(kù)(http://www.disgenet.org/);(2)GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)(https://www.genecards.org/),選擇“Score>1”的靶點(diǎn);(3)CTD數(shù)據(jù)庫(kù),選取經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的靶點(diǎn);(4)藥物靶標(biāo)數(shù)據(jù)庫(kù)(therapeutic target database,TTD,http://db.idrblab.net/ttd/)。通過(guò)Cytoscape3.2.1軟件Merge功能取慢性萎縮性胃炎相關(guān)靶點(diǎn)和NLRP3相關(guān)靶點(diǎn)的交集,并構(gòu)建“慢性萎縮性胃炎-NLRP3”網(wǎng)絡(luò)圖。

1.4 NLRP3介導(dǎo)六君子湯治療慢性萎縮性胃炎潛在作用靶點(diǎn)的獲取靶點(diǎn)通常作為網(wǎng)絡(luò)中的成員發(fā)揮著整體協(xié)同作用,靶基因之間的相互作用關(guān)系在許多疾病的治療中發(fā)揮著重要的作用。隨著醫(yī)學(xué)水平的高速發(fā)展,嚴(yán)重疾病的治療正在從基因水平上得到解決[14],因此,了解蛋白之間相互作用關(guān)系,也有助于進(jìn)一步研究其作用機(jī)制。將NLRP3介導(dǎo)的活性成分治療慢性萎縮性胃炎靶點(diǎn)定義為潛在作用靶點(diǎn),將“中藥-活性成分-交集靶點(diǎn)-NLRP3”網(wǎng)絡(luò)和“慢性萎縮性胃炎-NLRP3”網(wǎng)絡(luò)相交,獲取潛在靶點(diǎn)。為了獲取蛋白之間相互關(guān)系,通過(guò)STRING數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)潛在作用靶點(diǎn)進(jìn)行分析,設(shè)定“Minimum Required Interaction Score ≥ 0.9”“Active Interaction Sources”來(lái)源于“Experiments”,獲取潛在靶點(diǎn)相互作用網(wǎng)絡(luò),并利用Cytoscape將結(jié)果進(jìn)行可視化,獲得蛋白質(zhì)相互作用(protein-protein interaction,PPI)網(wǎng)絡(luò),通過(guò)網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治鲞M(jìn)一步揭示網(wǎng)絡(luò)中的關(guān)鍵靶點(diǎn)。

1.5 NLRP3介導(dǎo)的六君子湯治療慢性萎縮性胃炎潛在作用靶點(diǎn)通路富集分析為了進(jìn)一步闡明潛在作用靶點(diǎn)的作用機(jī)制,通過(guò)生物學(xué)信息注釋數(shù)據(jù)庫(kù)DAVID(https://david.ncifcrf.gov/home.jsp,V6.8)對(duì)靶點(diǎn)進(jìn)行京都基因與基因組百科全書 (Kyoto encyclopedia of genes and gnomes,KEGG)通路富集分析,設(shè)定“Background”為“Homo sapiens”,以P<0.05作為顯著功能和通路的臨界值,并利用Cytoscape將“潛在靶點(diǎn)-通路”結(jié)果進(jìn)行可視化分析。

1.6 分子對(duì)接通過(guò)對(duì)網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)分析之后,篩選出NLRP3介導(dǎo)的度值較高的靶點(diǎn)和相關(guān)活性成分,從RCSB蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)(http://www.pdb.org/)下載候選靶點(diǎn)的晶體結(jié)構(gòu)(http://www.pdb.org/),從PubChem數(shù)據(jù)庫(kù)中下載化合物的SDF格式文件,通過(guò)SYBYL-X2.0軟件進(jìn)行去水、加氫和格式轉(zhuǎn)換,執(zhí)行分子對(duì)接,計(jì)算活性化合物和靶點(diǎn)的結(jié)合分?jǐn)?shù)。為了更好地進(jìn)行對(duì)比,同樣選取陽(yáng)性西藥阿莫西林進(jìn)行分子對(duì)接。

2 結(jié)果

2.1 NLRP3相關(guān)靶點(diǎn)以“NRLP3”為關(guān)鍵詞,基于CTD、STRING和STITCH數(shù)據(jù)庫(kù)檢索相關(guān)靶點(diǎn),去重后共計(jì)獲得270靶點(diǎn)。靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)如圖1。

2.2 六君子湯化學(xué)成分及相關(guān)靶點(diǎn)和NLRP3介導(dǎo)活性成分相關(guān)靶點(diǎn)基于OB≥30%且DL≥0.18的篩選標(biāo)準(zhǔn),從TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)得到六君子湯組方中藥的152個(gè)活性成分。從TCMSP和Swiss Target Prediction預(yù)測(cè)得到181個(gè)成分相關(guān)靶點(diǎn)。通過(guò)Cytoscape3.2.1軟件Merge功能取活性成分相關(guān)靶點(diǎn)和NLRP3相關(guān)靶點(diǎn)的交集,并構(gòu)建“中藥-活性成分-交集靶點(diǎn)-NLRP3”網(wǎng)絡(luò)圖,如圖2所示,此網(wǎng)絡(luò)包含127個(gè)節(jié)點(diǎn)(6個(gè)中藥節(jié)點(diǎn),107個(gè)活性成分節(jié)點(diǎn),13個(gè)NLRP3介導(dǎo)的靶點(diǎn))。應(yīng)用Network Analyzer功能對(duì)網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行拓?fù)浞治霭l(fā)現(xiàn),MOL000422(Kaempferol,山柰酚)和MOL004328(Naringenin,柚皮素)具有較高的Degree值,可能參與的生物功能較多,在網(wǎng)絡(luò)中的重要性相對(duì)較強(qiáng)。

2.3 慢性萎縮性胃炎和NLRP3介導(dǎo)的疾病相關(guān)靶點(diǎn)從DisGeNET、GeneCards、CTD和TTD數(shù)據(jù)庫(kù)獲取慢性萎縮性胃炎相關(guān)靶點(diǎn)10 086個(gè),通過(guò)Cytoscape3.2.1軟件Merge功能取慢性萎縮性胃炎相關(guān)靶點(diǎn)和NLRP3相關(guān)靶點(diǎn)的交集,并構(gòu)建“慢性萎縮性胃炎-NLRP3”網(wǎng)絡(luò)圖,如圖3所示,此網(wǎng)絡(luò)包含105個(gè)節(jié)點(diǎn)(1個(gè)疾病節(jié)點(diǎn),NLRP3介導(dǎo)的疾病靶點(diǎn)103個(gè))。

2.4 NLRP3介導(dǎo)的六君子湯治療慢性萎縮性胃炎的潛在作用靶點(diǎn)將“中藥-活性成分-交集靶點(diǎn)-NLRP3”網(wǎng)絡(luò)和“慢性萎縮性胃炎-NLRP3”網(wǎng)絡(luò)相交,獲取11個(gè)潛在靶點(diǎn)。應(yīng)用STRING數(shù)據(jù)庫(kù)獲取潛在靶點(diǎn)的PPI關(guān)系,設(shè)定“Minimum Required Interaction Score ≥ 0.9”“Active Interaction Sources”來(lái)源于“Experiments”,獲取潛在靶點(diǎn)相互作用網(wǎng)絡(luò),并利用Cytoscape將結(jié)果進(jìn)行可視化,如圖4所示,PPI網(wǎng)絡(luò)由45個(gè)節(jié)點(diǎn)(11個(gè)潛在靶點(diǎn)經(jīng)STRING分析得到45個(gè)節(jié)點(diǎn))構(gòu)成,網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)分析顯示,JUN、過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ(peroxisome proliferator activated receptor gamma,PPARG)、蛋白激酶B1(protein kinase B1,AKT1)和腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor,TNF)等靶點(diǎn)位于最內(nèi)側(cè)圈,具有較高的度值,可能在疾病治療中發(fā)揮著重要的作用。

圖4 NLRP3介導(dǎo)的六君子湯治療慢性萎縮性胃炎潛在作用靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)圖

2.5 NLRP3介導(dǎo)的六君子湯治療慢性萎縮性胃炎潛在作用靶點(diǎn)通路富集分析利用DAVID在線分析平臺(tái),45個(gè)靶點(diǎn)中共有36個(gè)核心靶點(diǎn)富集到23條通路中,利用Cytoscape構(gòu)建“潛在靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)圖,如圖5所示,此網(wǎng)絡(luò)包括60個(gè)節(jié)點(diǎn),195條邊,網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治龊?發(fā)現(xiàn)最內(nèi)側(cè)圈AKT1、絲裂原激活蛋白激酶10(mitogen activation protein kinase,MAPK10)、MAPK9、MAPK8、TNF和JUN等靶點(diǎn)具有較高的度值,MLRP3可能通過(guò)TNF和MAPK等信號(hào)通路發(fā)揮著重要的作用。

圖5 “潛在靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)圖

2.6 分子對(duì)接驗(yàn)證基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析結(jié)果,TNF信號(hào)通路富集的基因數(shù)目較多,且度值較高的靶基因均有顯示,因此,NLRP3介導(dǎo)的TNF、AKT1、MAPK10、MAPK9、MAPK8、TNF和JUN等核心靶點(diǎn)群可能通過(guò)多種通路發(fā)揮治療慢性萎縮性胃炎的作用。通過(guò)與Protein Lounge 數(shù)據(jù)庫(kù)中的通路信息進(jìn)行對(duì)比發(fā)現(xiàn),TNF可能通過(guò)JUN、MAPK8、AKT1、CASP3、NLRP3發(fā)揮作用。將活性成分度值較高的山柰酚和TNF、JUN、MAPK8、AKT1,CASP3、NLRP3進(jìn)行分子對(duì)接。同時(shí),將抗幽門螺桿菌常用藥物阿莫西林和上述靶點(diǎn)對(duì)接發(fā)現(xiàn),諸多靶點(diǎn)和中藥活性成分山柰酚、陽(yáng)性藥阿莫西林均具有結(jié)合作用,其中MAPK8的結(jié)合作用相對(duì)較強(qiáng)。見(jiàn)圖6—圖7。

圖6 山柰酚、阿莫西林與TNF、JUN、MAPK8、AKT1、CASP3、NLRP3對(duì)接分值柱形圖

圖7 MAPK8 和山柰酚、阿莫西林分子對(duì)接示意圖

2.7 NLRP3介導(dǎo)的六君子湯治療慢性萎縮性胃炎及炎癌轉(zhuǎn)化的作用機(jī)制分析將腸上皮化生、胃黏膜上皮異型增生、胃癌相應(yīng)靶點(diǎn)和NLRP3介導(dǎo)的六君子湯治療慢性萎縮性胃炎靶點(diǎn)相交,利用STRING平臺(tái)獲取各階段交集靶點(diǎn)的蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)圖并將結(jié)果可視化。如圖8所示,PPI網(wǎng)絡(luò)圖中可以看出,AKT1、TNF、JUN、CASP3等靶點(diǎn)均具有較高的度值,這也意味著治療慢性萎縮性胃炎的各靶點(diǎn)在治療腸上皮化生、異型增生、胃癌不同的病理過(guò)程中同樣發(fā)揮著重要的作用。

圖9 NLRP3介導(dǎo)的六君子湯治療慢性萎縮性胃炎及炎癌轉(zhuǎn)化的重要靶點(diǎn)機(jī)制

3 討論

CAG的發(fā)生與幽門螺桿菌感染、飲食、遺傳、藥物等因素相關(guān)[15],在多種因素作用下,胃黏膜發(fā)生損傷,進(jìn)而導(dǎo)致黏膜萎縮、腸上皮化生等病理改變[16],其臨床主要表現(xiàn)為反復(fù)發(fā)作的非特異性消化不良,可將其歸屬于中醫(yī)學(xué)的“痞滿”“胃痛”“嘈雜”“吐酸”等范疇[17]。目前,CAG的治療以西醫(yī)對(duì)癥治療為主,缺乏特效藥物,難以從根本上逆轉(zhuǎn)其病理改變。研究表明,中醫(yī)藥不僅可改善CAG的臨床癥狀,在修復(fù)胃黏膜、延緩甚至逆轉(zhuǎn)CAG、抑制癌基因表達(dá)等方面也有顯著療效[18]。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為,CAG病位在胃,與脾、腎密切相關(guān),其發(fā)生發(fā)展與外邪侵襲、飲食不節(jié)、情志失調(diào)、脾胃素虛等因素有關(guān)[19]。在多種因素影響下,脾胃虛弱,納運(yùn)失常,導(dǎo)致氣血生化無(wú)源,氣機(jī)升降失調(diào),最終引起氣滯、血瘀、痰濕等,進(jìn)一步妨礙脾胃氣機(jī)。CAG臨床主要分為肝胃氣滯證、肝胃郁熱證、脾胃虛弱證、脾胃濕熱證、胃陰不足證、胃絡(luò)瘀血證等證型[20],但主要以脾胃虛弱證為基礎(chǔ),故臨床多用益氣健脾之法。作為益氣健脾的中藥方劑六君子湯,以人參為君藥,具有補(bǔ)益元?dú)?健脾益肺功效;白術(shù)、法半夏為臣藥,具有健脾益氣、燥濕化痰之功;茯苓、陳皮為佐藥,能健脾和胃、理氣健脾;甘草為使藥,具有甘溫益氣兼有調(diào)和諸藥的功效;諸藥合用,共奏健脾益氣和胃之效。

NLRP3炎性小體作為一種細(xì)胞質(zhì)多蛋白復(fù)合物,能夠?qū)Χ喾N刺激產(chǎn)生反應(yīng),引起白細(xì)胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和IL-18等炎癥因子的釋放[21]。然而,在中藥靶點(diǎn)數(shù)據(jù)庫(kù)中未有NLRP3的收錄。因此,本研究基于NLRP3炎性小體,從CTD、STRING和STITCH數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)得到相關(guān)靶點(diǎn)270個(gè)。通過(guò)TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù),對(duì)六君子湯中的成分進(jìn)行篩選并對(duì)其靶點(diǎn)進(jìn)行預(yù)測(cè),然后與NLRP3相關(guān)靶點(diǎn)取交集,拓?fù)浞治鼋Y(jié)果顯示山柰酚和柚皮素可能發(fā)揮著重要的治療作用。從成分歸屬來(lái)講,山柰酚和柚皮素歸屬于黃酮類化合物,均具有較好的抗炎作用[22-23]。

通過(guò)對(duì)NLRP3介導(dǎo)六君子湯治療慢性萎縮性胃炎相關(guān)靶點(diǎn)分析發(fā)現(xiàn),基于STRING平臺(tái)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)來(lái)源獲取潛在靶點(diǎn)的蛋白間相互作用關(guān)系,網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)分析顯示,JUN、PPARG、AKT1和TNF等靶點(diǎn)可能在疾病的治療中發(fā)揮著重要作用。KEGG通路富集分析結(jié)果表明,AKT1、MAPK10、MAPK9、MAPK8、TNF和JUN等為具有較高度值的靶點(diǎn),可能通過(guò)TNF信號(hào)通路和MAPK等信號(hào)通路發(fā)揮著重要的治療作用。研究表明,中醫(yī)藥能夠通過(guò)抑制NLRP3的激活,調(diào)節(jié)PI3K/AKT信號(hào)通路,抑制炎癥因子的聚集,發(fā)揮抗炎作用[24]。分子對(duì)接結(jié)果顯示,諸多靶點(diǎn)和活性成分山柰酚、陽(yáng)性藥阿莫西林均具有結(jié)合作用,其中MAPK8的結(jié)合作用相對(duì)較強(qiáng),表明中藥單體成分山柰酚可能通過(guò)核心靶點(diǎn)MAPK8發(fā)揮重要的治療作用。此外,通過(guò)炎癌轉(zhuǎn)化相關(guān)靶點(diǎn)的對(duì)比發(fā)現(xiàn),NLRP3介導(dǎo)六君子湯通過(guò)核心靶點(diǎn)群在腸上皮化生、異型增生、胃癌不同病理過(guò)程的治療中發(fā)揮著舉足輕重的作用。

幽門螺桿菌感染作為CAG的最常見(jiàn)的病因,隨著病情的遷延進(jìn)展,可以引起腸化生、異型增生甚至胃癌。在分子機(jī)制中,TNF/TNFR系統(tǒng)包括可溶性和跨膜形式的TNF,在慢性炎癥的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮著重要作用[25]。TNF主要由內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生,能夠被細(xì)菌、炎癥和其他刺激活化,在解除對(duì)TNF表達(dá)調(diào)控的動(dòng)物模型中進(jìn)行的廣泛研究表明,TNF可能誘導(dǎo)炎癥病理過(guò)程,同時(shí)發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用[26]。AKT1是三種密切相關(guān)的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶(AKT1、AKT2和AKT3)之一,稱為AKT激酶,能夠調(diào)節(jié)包括代謝、增殖、細(xì)胞存活、生長(zhǎng)和血管生成在內(nèi)的許多生理和病理過(guò)程[27]。絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶能夠激活MAPK8/JNK1等MAPKs相關(guān)蛋白,參與細(xì)胞增殖、分化、遷移、轉(zhuǎn)化和程序性細(xì)胞死亡等過(guò)程[28]。炎性小體是應(yīng)對(duì)多種不同的外源性和內(nèi)源性病原體信號(hào)的傳導(dǎo)平臺(tái),NLRP3炎性小體是研究最廣泛的炎性體之一,可調(diào)節(jié)IL-1β和IL-18等多種促炎細(xì)胞因子的成熟,驅(qū)動(dòng)炎癥相關(guān)級(jí)聯(lián)反應(yīng),參與多種慢性炎癥疾病[29]。因此推測(cè),六君子湯可以根除幽門螺桿菌,進(jìn)而可能阻斷疾病發(fā)展?；贜LRP3相關(guān)靶點(diǎn)預(yù)測(cè),應(yīng)用中藥化學(xué)和生物信息學(xué)相關(guān)理論,對(duì)六君子湯治療慢性萎縮性胃炎的活性成分進(jìn)行篩選并預(yù)測(cè)相關(guān)靶點(diǎn),通過(guò)KEGG通路富集分析得到,AKT1、MAPK10、MAPK9、MAPK8、TNF和JUN等靶點(diǎn)可能通過(guò)TNF和MAPK等信號(hào)通路發(fā)揮重要的作用。作為臨床常見(jiàn)病、多發(fā)病,慢性萎縮性胃炎常引起腸上皮化生、異型增生,并向胃癌發(fā)展,各病理階段潛在靶點(diǎn)均和六君子湯治療慢性萎縮性胃炎靶點(diǎn)在一定程度上重合,這也提示了六君子湯能夠在“炎癌轉(zhuǎn)化”的過(guò)程中發(fā)揮重要作用。因此,基于中醫(yī)“治未病”的理論,六君子湯能夠阻止慢性炎癥向癌癥的轉(zhuǎn)化,這也為重要靶點(diǎn)的研究提供了思路。