萬(wàn)英凈 朱純剛

【摘要】? 目的? ? 分析高危人乳頭瘤病毒（HR-HPV）基因分型（DNA）聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）檢測(cè)宮頸病變的臨床價(jià)值。方法? ? 對(duì)瑞昌市人民醫(yī)院2018年1月—2020年12月8 600份婦女宮頸脫落細(xì)胞樣本進(jìn)行HR-HPV DNA PCR、超薄液基細(xì)胞學(xué)檢查（TCT），以組織病理檢查結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)比2種檢測(cè)方法的診斷效能、不同病變檢出率，并分析HR-HPV各基因型與宮頸病變相關(guān)性。結(jié)果? ? 組織病理檢查結(jié)果顯示，8 600份婦女宮頸脫落細(xì)胞樣本中，陽(yáng)性1 462份、陽(yáng)性率為17.00%，陰性7 138份、陰性率為83.00%；TCT檢測(cè)結(jié)果顯示，真陽(yáng)性1 298份、假陽(yáng)性412份、真陰性6 726份、假陰性164份；HR-HPV DNA PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，真陽(yáng)性1 401份、假陽(yáng)性243份、真陰性6 895份、假陰性61份。HR-HPV DNA PCR檢測(cè)方法診斷準(zhǔn)確度、敏感度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值顯著高于TCT檢測(cè)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。與組織病理檢查相比，TCT、HR-HPV DNA PCR對(duì)不同病變檢出率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；TCT、HR-HPV DNA PCR 2種檢測(cè)方法相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；與TCT檢測(cè)方法相比，HR-HPV DNA PCR檢測(cè)方法對(duì)不同病變檢出率更接近于病理檢查，診斷價(jià)值更高。經(jīng)Logistic回歸分析，HPV16、18、31、33、52、58亞型與宮頸病變的發(fā)生均呈正相關(guān)（P<0.05）。結(jié)論? ? HR-HPV感染與宮頸病變具有密切的相關(guān)性，HR-HPV DNA PCR在宮頸病變的檢測(cè)中具有較高檢出率，診斷效能顯著。

【關(guān)鍵詞】? 人乳頭瘤病毒； 基因分析； 宮頸病變； 超薄液基細(xì)胞學(xué)

中圖分類號(hào)：R739.34? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1672-1721（2023）29-0114-03

DOI：10.19435/j.1672-1721.2023.29.038

目前，大量研究已證實(shí)，HR-HPV感染后所引起的原癌基因、抑癌基因表達(dá)改變可促進(jìn)細(xì)胞的增殖與惡性輕化，HR-HPV的持續(xù)感染為導(dǎo)致宮頸癌發(fā)生的首要病因。因此，尋求有效的檢測(cè)方法及時(shí)篩查該病具有必要性[1]。既往多采用TCT、巴氏涂片法等，但此類檢測(cè)方法易受主觀因素影響，檢測(cè)特異度、靈敏度仍具較大上升空間[2]。多種HPV亞型病毒感染均可導(dǎo)致宮頸發(fā)生癌前病變，不同基因型之間也具有明顯的差異，但目前臨床關(guān)于此觀點(diǎn)尚未達(dá)成完全一致。本研究選擇瑞昌市人民醫(yī)院8 600份婦女宮頸脫落細(xì)胞樣本，進(jìn)一步探討HR-HPV DNA PCR的診斷效能。

1? ? 資料與方法

1.1? ? 臨床資料? ? 對(duì)瑞昌市人民醫(yī)院2018年1月—2020年12月8 600份婦女宮頸脫落細(xì)胞樣本進(jìn)行HR-HPV DNA PCR、TCT。診斷標(biāo)準(zhǔn)：符合文獻(xiàn)中關(guān)于宮頸病變的判定標(biāo)準(zhǔn)[3]。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合診斷標(biāo)準(zhǔn)者；具有陰道內(nèi)分泌物增多、下腹疼痛、腰部疼痛等癥狀；患者均知情此研究且簽署同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：子宮切除患者；具有宮頸手術(shù)史者；合并嚴(yán)重的心、腦、血管等疾病者；肝、腎功能不全者；合并其他婦科惡性腫瘤疾病者；處于妊娠期或哺乳期者；檢查前24 h有性生活者；臨床資料不全、依從性不佳者。

1.2? ? 方法? ? 3種檢查方法具體操作如下。

1.2.1? ? 組織病理檢查方法? ? 對(duì)患者進(jìn)行陰道鏡下宮頸組織病理學(xué)檢查，并將其檢查結(jié)果作為本次研究的金標(biāo)準(zhǔn)。于電子陰道鏡（江蘇新瑪醫(yī)療器械有限公司）下，定位宮頸內(nèi)可疑病灶，取出部分宮頸組織行病理檢查。若于陰道鏡下未發(fā)現(xiàn)病灶，則于宮頸管口搔刮進(jìn)行多點(diǎn)取材后，將其送檢。由瑞昌市人民醫(yī)院2名經(jīng)驗(yàn)豐富、資歷較深的病理師對(duì)病理檢查結(jié)果進(jìn)行診斷，若意見不一致，進(jìn)行商討后達(dá)成一致。宮頸腫瘤組織分類主要可分為正?；蜓装Y、宮頸上皮內(nèi)瘤變（CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ級(jí)）、鱗狀細(xì)胞癌（SCC）5種類型，其中CINⅠ級(jí)及以上為陽(yáng)性[4]。

1.2.2? ? TCT檢測(cè)方法? ? 指導(dǎo)患者取膀胱截石位，取樣前，應(yīng)用棉拭子將宮頸口分泌物去除，應(yīng)用特制毛刷取宮頸脫落細(xì)胞，將其保存在Thinprep保存液中，對(duì)其進(jìn)行漂洗，之后測(cè)定細(xì)胞密度，離心沉降液體，應(yīng)用Prep2000制片系統(tǒng)固片機(jī)（孝感奧華醫(yī)療科技有限公司），將其制成薄層細(xì)胞涂片（直徑大小為2 cm），選擇質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95%的酒精作為固定液進(jìn)行濕固定。巴氏染色細(xì)胞后，于顯微鏡下（奧林巴斯公司，型號(hào)CX21）對(duì)其進(jìn)行鏡檢。將其鏡檢結(jié)果分為正?；蜓装Y、不典型鱗狀細(xì)胞（ASCH）、高度鱗狀上皮內(nèi)病變（HSIL）、低度鱗狀上皮內(nèi)病變（LSIL）、鱗狀細(xì)胞癌（SCC）5種類型，其中LSIL、HSIL判定為陰性，SCC判定為陽(yáng)性[5]。

1.2.3? ? PCR定量檢測(cè)方法? ? 指導(dǎo)患者保持膀胱截石位，取樣前應(yīng)用棉拭子去除宮頸口分泌物，之后將采樣刷深入到患者宮頸內(nèi)1～2 cm處，按照順時(shí)針的方向旋轉(zhuǎn)5～8周，停留5 s取出，將采樣刷置于一次性使用宮頸脫落細(xì)胞保存液中，置于4～8 ℃的環(huán)境中保存，以待檢測(cè)。應(yīng)用人乳頭瘤病毒核酸分型檢測(cè)試劑盒（熒光PCR法）（HPV21分型）（江蘇碩世生物科技股份有限公司），按照試劑盒說(shuō)明書操作步驟進(jìn)行HPV檢測(cè)。高危HPV基因型包括16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、82等亞型。PCR擴(kuò)增條件為50 ℃ 5 min UNG酶處理、95 ℃預(yù)變性10 min、95 ℃ 10 s、58 ℃ 40 s、38 ℃ 5 s，共45個(gè)循環(huán)，其中HPV亞型擴(kuò)增曲線呈典型S曲線且CT值小于參考值判定為陽(yáng)性。

1.3? ? 觀察指標(biāo)? ? 分析檢測(cè)結(jié)果，對(duì)比2種檢測(cè)方法的診斷效能、不同病變檢出率，分析HR-HPV各基因型與宮頸病變相關(guān)性。

1.4? ? 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法? ? 采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)量資料以x±s表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以百分比表示，采用χ2檢驗(yàn)，采用Logistic回歸分析法分析高危HPV基因分型與宮頸病變的關(guān)系，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2? ? 結(jié)果

2.1? ? 檢測(cè)結(jié)果? ? 組織病理檢查結(jié)果：8 600份婦女宮頸脫落細(xì)胞樣本中，陽(yáng)性1 462份、陽(yáng)性率為17.00%，陰性7 138份、陰性率為83.00%。TCT檢測(cè)結(jié)果：真陽(yáng)性1 298份、假陽(yáng)性412份、真陰性6 726份、假陰性164份。HR-HPV DNA PCR檢測(cè)結(jié)果：真陽(yáng)性1 401份、假陽(yáng)性243份、真陰性6 895份、假陰性61份，見表1。

2.2? ? 診斷效能? ? HR-HPV DNA PCR檢測(cè)方法診斷準(zhǔn)確度、靈敏度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值顯著高于TCT檢測(cè)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表2。

2.3? ? 不同病變檢出率? ? 與組織病理檢查相比，TCT、HR-HPV DNA PCR對(duì)不同病變檢出率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；TCT、HR-HPV DNA PCR 2種檢測(cè)方法相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；與TCT檢測(cè)方法相比，HR-HPV DNA PCR檢測(cè)方法對(duì)不同病變檢出率更接近于病理檢查，診斷價(jià)值更高，見表3。

2.4? ? Logistic回歸分析? ? 經(jīng)Logistic回歸分析，HPV16、18、31、33、52、58亞型與宮頸病變的發(fā)生均呈正相關(guān)（P<0.05），見表4。

3? ? 討論

宮頸癌在臨床上非常常見，此病的發(fā)生主要是量變到質(zhì)變的過(guò)程，發(fā)展周期高達(dá)3～8年。據(jù)相關(guān)統(tǒng)計(jì)資料顯示，宮頸癌疾病的發(fā)病率在女性惡性腫瘤中的占比高達(dá)25%，且近些年來(lái)此病患者逐漸年輕化，對(duì)廣大女性身體健康造成極為不利的影響[6-8]。因此，早期對(duì)宮頸病變進(jìn)行正確篩查，對(duì)于防治宮頸癌具有重要意義。

既往臨床多采用宮頸細(xì)胞學(xué)檢查、陰道鏡檢查、組織病理學(xué)檢查等方法，TCT檢測(cè)較為常見，主要應(yīng)用宮頸刷對(duì)宮頸鱗柱交界處細(xì)胞進(jìn)行收集，并在相應(yīng)處理后進(jìn)行巴氏染色，之后根據(jù)國(guó)際癌癥協(xié)會(huì)推薦標(biāo)準(zhǔn)對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行診斷[9-11]。此種檢測(cè)技術(shù)可在一定程度上提高細(xì)胞數(shù)量、質(zhì)量，可更加科學(xué)客觀地描述病情，但此檢測(cè)方法的診斷結(jié)果與操作人員制片經(jīng)驗(yàn)具有一定關(guān)系，且細(xì)胞消化不充分、固定液的時(shí)間過(guò)長(zhǎng)等因素，均可導(dǎo)致TCT檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確，影響診斷結(jié)果[12-13]。本研究發(fā)現(xiàn)，HR-HPV DNA PCR檢測(cè)方法診斷準(zhǔn)確度、敏感度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值顯著高于TCT檢測(cè)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。2種檢查方式對(duì)不同病變檢出率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；與TCT檢測(cè)方法相比，HR-HPV DNA PCR檢測(cè)方法對(duì)不同病變檢出率更接近于病理檢查結(jié)果，診斷價(jià)值更高。研究數(shù)據(jù)進(jìn)一步證實(shí)，HR-HPV DNA PCR檢測(cè)方法對(duì)宮頸病變的診斷效能更顯著。近些年來(lái)，多數(shù)研究學(xué)者認(rèn)為HPV持續(xù)感染極易導(dǎo)致上皮細(xì)胞的無(wú)限增殖，是引起宮頸癌疾病的主要分子機(jī)制[14-15]。本研究還發(fā)現(xiàn)，經(jīng)Logistic回歸分析，HPV16、18、31、33、52、58亞型與宮頸病變的發(fā)生均呈正相關(guān)；數(shù)據(jù)提示高危HPV基因分型與宮頸病變的發(fā)生具有直接關(guān)系。分析其原因，病毒進(jìn)入患者機(jī)體后，主要通過(guò)將自身DNA整合入宿主細(xì)胞中，從而有效抑制宿主的抑癌基因，其中最常見的感染類型為HPV 16、18亞型，而HPV31、33、35、39等其他基因分型次之。再次證實(shí)HPV感染為導(dǎo)致宮頸癌疾病發(fā)生的高危因子，并且不同基因分型對(duì)于宮頸癌的致病力也有所不同。由此可見，HPV基因分型PCR檢測(cè)對(duì)于宮頸病變的診斷具有顯著價(jià)值。

綜上所述，高危HPV基因分型與宮頸病變的發(fā)生具有緊密的相關(guān)性，高危HPV基因分型PCR檢測(cè)在宮頸病變篩查中具有較高的診斷準(zhǔn)確度、靈敏度，對(duì)宮頸不同病變檢出率較高，臨床應(yīng)用價(jià)值顯著，可繼續(xù)推廣。

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