張小萍 李黎 王翠蓮 陳良娟 梁曉利 陳平熹

無(wú)乳鏈球菌即B族鏈球菌（group BStreptococcus，GBS）感染是新生兒階段較嚴(yán)重的細(xì)菌感染性疾病，GBS 是一種常定植于胃腸道與生殖道的革蘭陽(yáng)性雙球菌，新生兒GBS 感染一般發(fā)生在母體內(nèi)，感染途徑為羊膜腔感染或胎膜破裂感染，也可在分娩過程中通過陰道獲得［1-2］。相關(guān)研究顯示，妊娠期母體陰道內(nèi)GBS 定植較多，會(huì)直接增加母嬰垂直傳播與早發(fā)感染的風(fēng)險(xiǎn)［3］。

新生兒GBS 感染可直接引起新生兒腦膜炎、新生兒肺炎、新生兒膿毒癥等疾病，同時(shí)具有病情進(jìn)展迅速、病死率高等特點(diǎn)，因此，新生兒GBS 感染已成為新生兒死亡的主要原因，伴隨近年來(lái)“多孩”政策的實(shí)施，新生兒GBS 感染的發(fā)病率正逐年升高，對(duì)該疾病的診療現(xiàn)已成為新生兒科和婦產(chǎn)科醫(yī)師研究的重點(diǎn)［4］。

對(duì)新生兒GBS 感染最有效的治療方法為抗菌藥物治療，包括青霉素、氨芐西林、左氧氟沙星、利奈唑胺、四環(huán)素等，該類藥物進(jìn)入人體后能抑制細(xì)菌細(xì)胞壁合成，使細(xì)菌細(xì)胞膜發(fā)生改變，抑制或干擾細(xì)菌的蛋白質(zhì)合成，抑制細(xì)菌病原體核酸的轉(zhuǎn)錄與復(fù)制，但在實(shí)際應(yīng)用中，應(yīng)用抗菌藥物治療新生兒GBS 感染易出現(xiàn)耐藥，因此針對(duì)該特點(diǎn)實(shí)施臨床特點(diǎn)、分布情況分析與藥敏試驗(yàn)分析意義重大［5］。

本研究結(jié)合羅定市人民醫(yī)院60 例新生兒GBS感染患兒的臨床資料，對(duì)分離出疑似GBS 的菌株進(jìn)行鑒定和藥敏試驗(yàn)，并對(duì)結(jié)果數(shù)據(jù)及患兒的臨床特點(diǎn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2017 年1 月—2023 年3 月本院60 例GBS 陽(yáng)性新生兒進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)的血液標(biāo)本，其中男性30 例，女性30 例；早產(chǎn)兒6 例，足月產(chǎn)兒54 例；經(jīng)陰道分娩50 例，剖宮產(chǎn)6 例。共分離出80 株GBS 菌株。

1.1.1 納入標(biāo)準(zhǔn) ① 患兒血液樣本均經(jīng)細(xì)菌培養(yǎng)，確診為新生兒GBS 感染；② 可完整提供本研究所需相關(guān)數(shù)據(jù)和資料。

1.1.2 排除標(biāo)準(zhǔn) 拒絕配合研究者。

1.1.3 倫理學(xué) 本研究符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)本院倫理審批（審批號(hào)：2020015），所有患兒監(jiān)護(hù)人均對(duì)本研究?jī)?nèi)容知情并簽署同意書。

1.2 儀器與試劑 VITEK2 Compact 細(xì)菌鑒定儀和革蘭陽(yáng)性細(xì)菌鑒定卡（GP 卡）以及AST-GP67 藥敏卡均購(gòu)自法國(guó)生物梅里埃公司。

1.3 研究方法

1.3.1 菌株鑒定 血液、腦脊液標(biāo)本采集后直接注射入血培養(yǎng)瓶，使用血培養(yǎng)儀進(jìn)行增菌培養(yǎng)。其他類型標(biāo)本于2 h 內(nèi)接種于血平板和GBS 專用顯色平板，置于37 ℃ 5% CO2培養(yǎng)箱內(nèi)溫育18～24 h 后，觀察平板上菌落特點(diǎn)。在血平板上GBS 菌落呈灰色，半透明或不透明，表面有光滑、凸起，不易乳化，部分有β-溶血環(huán)。在顯色平板上，GBS 菌落為表面光滑、凸起，粉紅色或紫紅色。挑取可疑菌落進(jìn)行涂片鏡檢，經(jīng)革蘭染色（+）、CAMP 試驗(yàn)（+）、觸酶試驗(yàn)（-）初篩后的球菌進(jìn)行分純培養(yǎng)和鑒定。對(duì)分純培養(yǎng)后的菌落采用細(xì)菌鑒定儀和革蘭陽(yáng)性細(xì)菌鑒定卡按照操作規(guī)程進(jìn)行菌株鑒定。

1.3.2 藥敏試驗(yàn) 使用全自動(dòng)細(xì)菌鑒定藥敏儀及配套AST-GP67 藥敏卡，采用最低抑菌濃度法（minimal inhibitory concentration，MIC）按標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行操作，標(biāo)準(zhǔn)菌株為金黃色葡萄球菌ACTT29213，檢測(cè)抗菌藥物包括青霉素、氨芐西林、左氧氟沙星、利奈唑胺、四環(huán)素、莫西沙星、萬(wàn)古霉素、環(huán)丙沙星及克林霉素。

1.4 觀察指標(biāo)及評(píng)價(jià)工具 ① 分析60 例患兒的臨床體征；② 分析81 株GBS 菌株的分布情況；③ 分析81 株GBS 菌株的藥敏試驗(yàn)結(jié)果。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 通過Microsoft Excel 軟件建立數(shù)據(jù)庫(kù)錄入所有臨床資料，采用SPSS 22.0 軟件分析數(shù)據(jù)。藥敏試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用WHONET 19.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，各類抗菌藥物所得結(jié)果以敏感、中介與耐藥3 個(gè)項(xiàng)目構(gòu)成比表示。

2 結(jié)果

2.1 臨床特征 60 例患兒中出現(xiàn)發(fā)熱25 例，氣促18 例，發(fā)紺10 例，反應(yīng)差7 例；60 例患兒中包括腦膜炎19 例（均為GBS 晚發(fā)性感染），新生兒肺炎24 例，新生兒膿毒癥17 例。見表1。

表1 60 例GBS 陽(yáng)性患兒的臨床特征與疾病類型

2.2 GBS 菌株分布 81 例 GBS 菌株中從血液中檢出25 例，從痰標(biāo)本中檢出15 例，從臍分泌物標(biāo)本中檢出10 例，從耳道分泌物標(biāo)本中檢出10 例。其中10例患兒在痰標(biāo)本與耳道分泌物標(biāo)本中均檢出GBS，4 例患兒在血液標(biāo)本和痰標(biāo)本中均分離出GBS。

2.3 藥敏試驗(yàn)結(jié)果 對(duì)80 例GBS 菌株展開藥敏試驗(yàn)分析，結(jié)果顯示GBS 對(duì)四環(huán)素的耐藥率最高，為92.50%，其次為克林霉素，耐藥率為73.75%，對(duì)左氧氟沙星的耐藥率為31.25%，位列第三。GBS 對(duì)青霉素、氨芐西林、利奈唑胺、莫西沙星、萬(wàn)古霉素、環(huán)丙沙星等抗菌藥物均無(wú)耐藥。見表2。

表2 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

GBS 是一種定植于女性消化道和生殖道的條件性致病菌，該細(xì)菌對(duì)絨毛膜具有較強(qiáng)的吸附與穿透性，妊娠期易刺激子宮收縮，引起早產(chǎn)；新生兒GBS感染則容易引起新生兒腦膜炎、新生兒菌血癥、新生兒膿毒癥、新生兒肺炎等相關(guān)疾病，因此圍術(shù)期篩查GBS 對(duì)產(chǎn)婦和新生兒均至關(guān)重要［6-7］。

首先本研究結(jié)果顯示，60 例患兒中出現(xiàn)發(fā)熱25 例，氣促18 例，發(fā)紺10 例，反應(yīng)差7 例；60 例患兒中腦膜炎19 例（均為GBS 晚發(fā)性感染），新生兒肺炎24 例，新生兒膿毒癥17 例。本研究結(jié)果提示GBS 感染的早發(fā)臨床體征主要以呼吸道表現(xiàn)為主（如發(fā)熱、氣促、發(fā)紺等），晚發(fā)感染常合并顱內(nèi)感染，主要表現(xiàn)為腦膜炎，而早發(fā)性新生兒GBS 感染的高危因素主要有：① 新生兒免疫功能不完善；② 母體孕期生殖道、泌尿道出現(xiàn)GBS 定植，新生兒口腔、鼻咽、皮膚存在GBS 定植［8］；③ 極低體質(zhì)量新生兒；④ 母體胎膜早破≥18 h，產(chǎn)時(shí)發(fā)熱，產(chǎn)程較長(zhǎng)［9］。因此早發(fā)型新生兒GBS 感染以母嬰垂直感染為主，一般在分娩12 h 發(fā)病，病情主要特點(diǎn)為發(fā)病急，進(jìn)展速度快，患兒出現(xiàn)發(fā)熱、氣促、發(fā)紺等癥狀；晚發(fā)性GBS 感染以顱內(nèi)感染為主，患兒易出現(xiàn)化膿性腦膜炎，一般癥狀為拒奶、反應(yīng)差，因此，通過分析以上臨床特征可判斷患者感染類型與主要受累部位，對(duì)指導(dǎo)新生兒GBS 感染的治療具有重要意義［10-11］。

其次，本研究結(jié)果顯示，81 例GBS 菌株中從血液中檢出25 例，從痰標(biāo)本中檢出15 例，從臍分泌物標(biāo)本中檢出10 例，從耳道分泌物標(biāo)本中檢出10 例。有10 例患兒在痰標(biāo)本和耳道分泌物標(biāo)本中均檢出GBS，4 例患兒在血液標(biāo)本和痰標(biāo)本中均分離出GBS，研究結(jié)果反向印證了新生兒GBS 感染存在多種類型，且感染部位差異較大，因此在確定新生兒GBS 感染類型時(shí)需檢測(cè)血液、痰液、腦脊液、耳道分泌物樣本，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行綜合分析［12］。

抗菌藥物是目前臨床針對(duì)各類感染性、創(chuàng)傷性以及炎癥性疾病廣泛應(yīng)用的一類藥物，但若使用不當(dāng)極易造成抗菌藥物耐藥，該特點(diǎn)在新生兒GBS 感染中同樣具有突出體現(xiàn)，抗菌藥物耐藥是指部分微生物對(duì)原本敏感的抗菌藥物產(chǎn)生高度耐受特性［13］。簡(jiǎn)而言之，就是原來(lái)對(duì)抗菌藥物敏感的人群現(xiàn)在對(duì)抗菌藥物不敏感，若未及時(shí)發(fā)現(xiàn)或更換抗菌藥物的使用，加之新生兒自身免疫機(jī)制較弱，可直接導(dǎo)致患兒死亡，因此對(duì)新生兒GBS 感染合理使用抗菌藥物治療意義重大［14］。

最后，本研究對(duì)80 例GBS 菌株展開藥敏試驗(yàn)分析，結(jié)果顯示GBS 對(duì)四環(huán)素的耐藥率最高（為92.50%），其次為克林霉素（耐藥率為73.75%）和左氧氟沙星（耐藥率為31.25%），GBS 對(duì)青霉素、氨芐西林、利奈唑胺、莫西沙星、萬(wàn)古霉素、環(huán)丙沙星等均無(wú)耐藥性。四環(huán)素類抗菌藥物是臨床應(yīng)用較廣泛的一類廣譜抗菌藥物，被廣泛應(yīng)用于革蘭陽(yáng)性菌感染的治療中，主要包括四環(huán)素、金霉素、土霉素等。相關(guān)研究提出，四環(huán)素類抗菌藥物的核糖體保護(hù)蛋白是與延伸因子EF-G 和EF-Tu 具有顯著序列和結(jié)構(gòu)相似性的鳥苷三磷酸（guanosine triphosphate，GTP），而最常見的核糖體保護(hù)基因是tetO 和tetM，該類基因是引起GBS 菌株對(duì)四環(huán)素抗菌藥物耐藥的主要原因［15］。另外有研究結(jié)果顯示，GBS 菌株對(duì)克林霉素、左氧氟沙星具有不同程度的耐藥性，因此在實(shí)際應(yīng)用中需給予更多關(guān)注，合理調(diào)整使用藥物，從而保證抗菌藥物的治療效果［16］。就臨床左氧氟沙星抗菌藥物的實(shí)際用藥情況來(lái)看，青霉素是首選的抗菌藥物，代表性藥物包括阿莫西林、克拉維酸鉀等，筆者認(rèn)為其應(yīng)用優(yōu)勢(shì)在于該類抗菌藥物具有特殊的通透性，更容易進(jìn)入細(xì)胞外膜，其次其與細(xì)菌中全部青霉素結(jié)合蛋白均有較強(qiáng)的親和力；再次該藥物具有明顯的抗菌藥物后效應(yīng)［17-18］。微生物藥敏試驗(yàn)結(jié)果分析能夠指導(dǎo)臨床用藥，本例患兒血培養(yǎng)和腦脊液GBS 藥敏試驗(yàn)結(jié)果都是對(duì)青霉素、氨芐西林、頭孢類、利奈唑胺片和萬(wàn)古霉素敏感，對(duì)阿奇霉素和克拉霉素耐藥［19-20］。

綜上所述，在對(duì)新生兒GBS 感染實(shí)施治療前需綜合評(píng)估其臨床特點(diǎn)，組合應(yīng)用血清非特異性指標(biāo)，盡早識(shí)別，經(jīng)驗(yàn)性應(yīng)用抗菌藥物，最大程度提升抗菌藥物的治療效果與安全性。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突