王甲銀

近年來，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)技術(shù)得到了廣泛發(fā)展，同時臨床檢測技術(shù)也獲得長足進步，通過系統(tǒng)的診斷方法可以切實保證對疾病的診斷，滿足臨床需要。其中細菌培養(yǎng)是臨床進行微生物檢驗的重要方法，該方法能發(fā)揮一定的作用，但存在耗時長等不足，因此采用涂片鏡檢就成為提升檢驗效果的重要保證。目前有臨床研究顯示，通過涂片鏡檢配合細菌培養(yǎng)的方法可以顯著提升檢驗效果，滿足患者的診斷需要，從而為臨床用藥提供指導(dǎo)。有研究結(jié)果顯示，將涂片鏡檢與細菌培養(yǎng)方法聯(lián)合應(yīng)用，能顯著提升檢驗效果，確保檢驗結(jié)果的準確性［1］。因此，本研究就細菌培養(yǎng)和涂片鏡檢在微生物檢驗中的臨床應(yīng)用價值進行論述，將將結(jié)果報告如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象 回顧并收集2021 年1 月—2022 年12 月本院檢驗科接收的84 份待檢樣本，所有樣本均分別接受細菌培養(yǎng)和涂片鏡檢。樣本取材于84 例患者，其中男性54 例，女性30 例；年齡21～74 歲，平均（47.12±5.14）歲。

1.1.1 納入標準 ① 患者臨床資料齊全；② 患者或家屬均對本研究知情，并同意參與研究。

1.1.2 排除標準 ① 標本采集過程中存在樣本污染；② 標本資料缺項過多；③ 特殊標本。

1.1.3 倫理學(xué) 本研究符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)標準，并經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會審批（審批號：PYYXLL-LW-2023-012），本研究進行的所有檢測均獲得過患者或家屬的知情同意。

1.2 儀器與試劑 本研究使用Forma?Ⅱ系列水套式二氧化碳培養(yǎng)箱（由賽默飛世爾科技公司提供），Olympus BX53 顯微鏡（由日本奧林巴斯株式會社提供）；培養(yǎng)基與染色液由西格瑪奧德里奇公司提供。使用法國生物梅里埃公司ATB 自動微生物鑒定及藥敏分析儀進行細菌鑒定。

1.3 涂片鏡檢與細菌培養(yǎng) 對84 份樣本先進行涂片鏡檢，直接涂抹玻片或離心沉淀后涂片，而后實施革蘭染色和抗酸染色，在顯微鏡下觀察，以可見細菌提示為陽性，未見細菌則判定為陰性。根據(jù)涂片檢查結(jié)果不同選擇合適的培養(yǎng)基，孵育18～24 h，48 h無細菌則為無菌生長。

1.4 觀察指標 涂片鏡檢分為3 級，A 級：低倍顯微鏡視野中白細胞數(shù)不低于25 個，鱗狀上皮細胞數(shù)不超過10 個；B 級：低倍視野中白細胞數(shù)不低于25 個，鱗狀上皮細胞數(shù)為10～25個，細菌不少于3種；C級：鱗狀上皮細胞數(shù)不小于25 個，標本不合格。完成涂片鏡檢后進行細菌培養(yǎng)，分析細菌培養(yǎng)結(jié)果［2］。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 使用SPSS 22.0 統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進行分析和處理，符合正態(tài)分布的計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗，計數(shù)資料以例（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 涂片鏡檢合格率 研究結(jié)果顯示，84 份標本中，合格標本77 份，其中A 類標本37 份，B 類標本40 份，不合格標本（C 類）7 份，合格率為91.67%。

2.2 不同類型標本的涂片鏡檢細菌檢出率 研究結(jié)果顯示，84 份標本中，檢出64 份致病菌或優(yōu)勢生長菌，陽性檢出率為76.19%。37 份A 類標本中檢出陽性樣本32 份，陽性檢出率為86.49%；40 份B 類標本中檢出陽性樣本25 份，陽性檢出率為62.50%；7 份C 類標本中檢出陽性標本3 份，陽性檢出率為42.86%。A 類標本的陽性檢出率明顯高于B 類標本和C 類標本（χ12＝5.752，P1＝0.016；χ22＝6.887，P1＝0.009）。見表1。

表1 不同類型標本的涂片鏡檢細菌檢出率比較

2.3 64 份陽性樣本檢出情況 64 份陽性樣本中，檢出革蘭陰性菌樣本42 份，占比為65.63%，檢出革蘭陽性菌樣本18 份，占比為28.13%，檢出真菌樣本4 份，占比為6.24%。見表2。

表2 陽性樣本檢出細菌類型分布

3 討論

由于人類感染性疾病的類型多，且造成原因復(fù)雜，病原體的復(fù)雜性也逐漸增加，且各類新型傳染病也屢見不鮮。其中，因抗菌藥物的大量應(yīng)用造成部分病原微生物的耐藥性增強，這無疑會增加患者的治療難度［3］。因此，在感染發(fā)生后及時進行診斷，鑒別微生物類型，評估患者病情，對用藥方案的制定具有重要的意義。目前臨床進行微生物檢驗和鑒別手段已經(jīng)愈發(fā)豐富，包括免疫學(xué)方法、分子生物學(xué)檢驗方法等，但目前在實際臨床工作中，尤其是基層醫(yī)療機構(gòu)主要應(yīng)用的還是傳統(tǒng)微生物檢驗技術(shù)，包括生物鑒定法、培養(yǎng)法、染色法等，該類檢驗技術(shù)的應(yīng)用可以在對患者的診斷中發(fā)揮積極作用。其中，涂片鏡檢和細菌培養(yǎng)是最常用的檢測方法，涂片鏡檢方法操作較簡單，通過顯微鏡對涂片進行觀察，涂片中的細菌在達到一定數(shù)量后，就可以實現(xiàn)對樣本的快速檢測，從而對樣本進行初步診斷［4］。然而涂片鏡檢方法雖然能起到一定的檢驗作用，但在具體應(yīng)用上不足也很明顯。涂片鏡檢的陽性率要建立在樣本中死菌和活菌數(shù)量的基礎(chǔ)上，若死菌和活菌數(shù)量過少，會影響檢驗結(jié)果的準確性，所以在進行檢驗時，涂片鏡檢僅能作為基礎(chǔ)的檢驗方法，若僅依靠涂片鏡檢進行微生物檢驗，容易對臨床治療形成制約［5］。因而在應(yīng)用涂片鏡檢查的同時，應(yīng)根據(jù)需要采用細菌培養(yǎng)方法以確保檢驗效果。采用細菌培養(yǎng)方法，可以借助革蘭染色法實現(xiàn)對微生物的鑒定和檢驗［6］。同時配合應(yīng)用該檢驗方法，能夠顯著提升檢驗的質(zhì)量和準確性。

有研究結(jié)果顯示，在對樣本進行微生物檢驗時，同時應(yīng)用細菌培養(yǎng)聯(lián)合涂片鏡檢方法能形成優(yōu)勢互補［7］。其中，涂片鏡檢可用來糾正儀器報告錯誤，避免誤報，尤其是采用涂片鏡檢的方法能快速檢測到樣本中存在的死菌和活菌，使微生物檢驗的效果得到保證。而細菌培養(yǎng)則是微生物檢驗的“金標準”，通過該方法的應(yīng)用，能夠切實檢測到存在的病原菌，同時值得注意的是，病原微生物本身具有多樣性特點，且生長繁殖過程比較復(fù)雜，部分病原微生物菌落的生長速度較慢，因此通過早期涂片鏡檢難以發(fā)現(xiàn)，而應(yīng)用細菌培養(yǎng)的方法則可以實現(xiàn)對此類菌群的鑒別。在實際應(yīng)用中，將細菌培養(yǎng)和涂片鏡檢進行聯(lián)用，能夠顯著提升檢驗效果，也有利于對各類感染性疾病的鑒別及診斷，從而為臨床用藥提供支持［8］。但需要注意的是，在微生物檢驗中，采用細菌培養(yǎng)聯(lián)合涂片鏡檢方法，雖然能起到一定的作用，但還是容易導(dǎo)致檢驗結(jié)果出現(xiàn)陰性。目前有學(xué)者研究結(jié)果表明，細菌培養(yǎng)結(jié)果出現(xiàn)陰性與多種因素有關(guān)［9］，現(xiàn)闡述如下。

首先，在樣本采集和送檢環(huán)節(jié)中若存在不規(guī)范操作，很容易導(dǎo)致樣本中的微生物死亡，或?qū)е戮簾o法及時培養(yǎng)，該情況下就會造成檢出假陰性結(jié)果，同時在進行相關(guān)操作的過程中，若不能保證合理操作，還會導(dǎo)致外來菌混入，從而造成假陽性結(jié)果。

其次，受檢者自身的用藥情況通常也會造成假陰性結(jié)果出現(xiàn)，這主要是因為若受檢者在采樣前存在服用抗菌藥物的情況，會對細菌的生長產(chǎn)生抑制，繼而導(dǎo)致假陰性結(jié)果出現(xiàn)［10］。

另外，培養(yǎng)基對菌群培養(yǎng)有直接影響，培養(yǎng)基的成分、pH 值、培養(yǎng)溫度等若不符合菌群生長的條件，并不利于菌群結(jié)構(gòu)的培養(yǎng)。同時，在進行實驗室檢驗的過程中若存在操作不當或消毒不徹底等問題，則會導(dǎo)致樣本被污染，從而對檢驗結(jié)果造成影響，因此強化環(huán)節(jié)質(zhì)量控制對保證檢驗質(zhì)量以及結(jié)果準確性至關(guān)重要［11］。

相較于細菌培養(yǎng)，涂片鏡檢同樣會受多種因素影響。首先，涂片過薄或取材不當?shù)热藶橐蛩赝鶗苯佑绊懲科恼鎸嵭浴Ｆ浯?，在進行涂片的過程中要進行革蘭染色，染色后革蘭陰性菌會表現(xiàn)為紅色，背景同屬于紅色，這種情況下漏診概率較大，且痰液樣本更容易出現(xiàn)該類問題。另外，不動桿菌屬在進行鏡檢時，形態(tài)為革蘭陰性球桿菌，與奈瑟菌形態(tài)接近，若不進行仔細鑒別，很容易導(dǎo)致誤診漏診的發(fā)生［12］。在實際臨床工作中，即使將兩種方法聯(lián)合應(yīng)用，還是可能導(dǎo)致漏診，此類情況的重要表現(xiàn)即為涂片陽性，培養(yǎng)陰性。有研究顯示，涂片中的細菌會出現(xiàn)被膿細胞吞噬的狀況，而在白細胞死亡后，其實體釋放的物質(zhì)在很大程度上會影響菌群的繁殖，繼而導(dǎo)致培養(yǎng)結(jié)果為陰性［13］。同時，標本中的微生物若為厭氧菌，則在常規(guī)環(huán)境下培養(yǎng)菌群的繁殖會受到極大影響。并且，部分樣本中存在苛養(yǎng)菌、緩慢生長菌、L 型菌，上述菌群在常規(guī)培養(yǎng)條件下很容易受到營養(yǎng)、時間不足等因素的影響，導(dǎo)致生長受抑制。因此，最終的檢驗結(jié)果往往會受多種客觀因素的影響以及制約，這無疑會導(dǎo)致檢驗結(jié)果失真，繼而影響患者的臨床治療。

針對上述情況，在采用細菌培養(yǎng)和涂片鏡檢的過程中，應(yīng)采取相應(yīng)措施，降低多種因素的影響，以便最大限度保證檢驗結(jié)果的準確性。首先，要特別確保培養(yǎng)基的質(zhì)量，保證培養(yǎng)基的硬度和培養(yǎng)液的清澈度，防止氣泡出現(xiàn)。其次要對培養(yǎng)基中的酸堿值進行監(jiān)測，由于有特殊要求的培養(yǎng)基往往會表現(xiàn)出不同顏色，因此要確保pH 值波動度控制在±0.2范圍內(nèi)，保證培養(yǎng)基作用得到充分發(fā)揮。另外要注意標本采集工作的順利進行，現(xiàn)有研究表明，標本采集時間與結(jié)果存在緊密聯(lián)系，采集過程中要注意對采集時間的控制，具體要視患者情況的不同，確定采集時間，標本采集通常在用藥前和用藥后兩個階段進行，病情特殊者應(yīng)在疾病典型期、急性期兩個階段進行樣本采集［14］。在采集方式上，應(yīng)根據(jù)檢測需要和微生物特點進行采集，并保證采集環(huán)節(jié)做到無菌操作，以避免標本污染的情況發(fā)生。而在送檢過程中，要及時進行送檢，若路程過遠，應(yīng)加強對標本的保護，防止在運送時造成樣本污染，具體可以根據(jù)實際情況，進行冷藏或真空保存等，而在進行樣本交接時，應(yīng)對樣本進行檢查，若存在樣本暴露等問題，則視為不合格樣本［15］。此外，在進行微生物檢驗時，室內(nèi)環(huán)境通常也會影響檢驗結(jié)果，在環(huán)境不理想時，假陰性、假陽性結(jié)果發(fā)生的概率會明顯增加，所以需要做好對實驗室的保護工作，注意儀器的防潮和消毒，每日對實驗室進行滅菌處理，保證室內(nèi)達到無菌標準，按時檢查消毒設(shè)施，對超過使用年限的設(shè)備應(yīng)及時更換，并對實驗室檢驗使用的玻璃器皿進行檢查，檢查過程中若發(fā)現(xiàn)器皿上有微生物殘留，應(yīng)及時進行滅菌處理。最后，在進行檢驗時要嚴格按照相關(guān)流程進行操作，調(diào)整壓力、試劑劑量等，確保檢驗結(jié)果的準確性。本研究結(jié)果表明，采用細菌培養(yǎng)和涂片鏡檢聯(lián)合的方法進行檢驗，能顯著提升檢驗效果，但即便如此，還是有可能發(fā)生未檢出的情況，這類情況的發(fā)生與多種因素有關(guān)，所以在此基礎(chǔ)上進行檢驗時，要特別注意對細節(jié)的把握，尤其是要保證檢驗質(zhì)量，強化對各個環(huán)節(jié)的控制，以此來保證整體的檢驗效果，最大限度避免假陽性和假陰性結(jié)果的出現(xiàn)，滿足現(xiàn)實需要。另外還應(yīng)注意的是，在檢驗過程中要注意提升鏡檢標本的制作質(zhì)量，最大限度減少人為因素導(dǎo)致的不合格標本，這有利于提升檢驗效果，并能為后續(xù)的細菌培養(yǎng)提供支持［10］。

本研究結(jié)果表明，細菌培養(yǎng)和涂片鏡檢聯(lián)合應(yīng)用能最大限度地確保檢驗結(jié)果的準確性，涂片鏡檢可以在短時間內(nèi)初步判斷樣本中是否存在細菌，以及反映細菌的形態(tài)和數(shù)量。而細菌培養(yǎng)則可以進一步確認細菌的種類，并進行藥敏試驗，為臨床治療提供重要的依據(jù)。細菌培養(yǎng)和涂片鏡檢在微生物檢驗中相輔相成，為細菌培養(yǎng)提供篩選和診斷依據(jù)。但在具體應(yīng)用上，還是容易出現(xiàn)假陰性等情況，針對此類問題要依據(jù)影響因素，采取具有針對性的措施，以提升檢驗質(zhì)量和結(jié)果準確性。

綜上所述，細菌培養(yǎng)和涂片鏡檢聯(lián)合應(yīng)用，可以在微生物檢驗中發(fā)揮重要的作用，值得在臨床工作中推廣。

利益沖突作者聲明不存在利益沖突