喬元昊 唐陽芹

傳染性單核細胞增多癥是一種由EB 病毒感染引起的急性和自限性疾病，以不規(guī)則發(fā)熱、咽痛、淋巴結腫大等為主要臨床表現(xiàn)［1-2］。該疾病在青少年或成人中較多發(fā)，主要傳播途徑為經(jīng)口緊密接觸傳播。40%～70%的EB 病毒感染且癥狀發(fā)作患兒中能夠檢測到EB 病毒核酸，在發(fā)病2 周左右檢測陽性率則高達90%及以上［3］。傳染性單核細胞增多癥是兒童感染EB 病毒后發(fā)生率較高的一類疾病，會嚴重影響患兒機體內(nèi)各個系統(tǒng)，導致鼻咽癌、淋巴瘤等疾病的發(fā)生［4］。傳染性單核細胞增多癥的患病人數(shù)在近年來持續(xù)增多，該疾病發(fā)病隱匿，且臨床癥狀和體征復雜多樣，檢測指標的特異性在低齡兒童中較低，因此誤診風險較高，需要尋找高效、準確的診斷方法，使患兒盡早接受對癥治療。本研究對異型淋巴細胞比例、EB 病毒抗體與核酸檢測在兒童傳染性單核細胞增多癥的診斷中獲得的效果展開分析，旨在促進對該疾病診斷水平的提升，現(xiàn)將結果報告如下。

1 資料與方法

1.1 樣本收集 研究樣本為2022 年1—12 月本院接收的180 例發(fā)熱患兒中選出的確診為傳染性單核細胞增多癥的37 例患兒，其中男性22 例（占比為59.46%），女性15例（占比為40.54%）；年齡2～11歲，平均（5.9±1.3）歲；身高74～155 cm，平均（111.5±20.6）cm；體質(zhì)量14～37 kg，平均（22.6±4.0）kg。

1.1.1 納入標準 ① 符合《諸福棠實用兒科學》第8 版中有關診斷標準者［5］；② 初次發(fā)病者；③ 未合并其他疾病者；④ 重要器官功能正常者。

1.1.2 排除標準 ① 存在自身免疫功能障礙者；② 因細菌感染、支原體感染等導致的傳染性單核細胞增多癥患兒；③ 罹患嚴重血液疾病、癌癥者；④ 存在先天畸形、發(fā)育遲緩等情況的患兒。

1.1.3 倫理學 本研究符合醫(yī)學倫理學標準，并經(jīng)本院醫(yī)學倫理委員會審批（審批號：PYYXLL-LW-2023-010），所有檢測均獲得過受檢患兒監(jiān)護人的知情同意。

1.2 研究方法

1.2.1 異型淋巴細胞檢測 在患兒入院時采集外周靜脈血2 mL，采用乙二胺四乙酸二鉀（ethylenediaminetetraacetic acid dipotassium salt dihydrate，EDTA-K2）抗凝，制作血涂片，再應用瑞氏-姬薩姆染液進行染色。血涂片自然干燥后，將其放置在油鏡下觀察。由具有血液細胞學檢測資質(zhì)的檢驗醫(yī)師負責閱片，對血細胞形態(tài)進行觀察，對淋巴細胞進行計數(shù)，分類100 個細胞，計算異型淋巴細胞比例。以Downey 分類為參照，分為三種類型：Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型，分別對應漿細胞型、不規(guī)則型、幼稚細胞型。陽性判定標準為異型淋巴細胞比例＞10%。

1.2.2 EB 病毒抗體（EB viral capsid antigen immunoglobulin M，VCA-IgM）檢測 采集患兒未進行抗凝處理的靜脈血3 mL，待其自然凝固后，以3 500 r/min（離心半徑為8 cm）離心10 min。取上層清液，應用全自動化學發(fā)光儀以及配套試劑進行VCA-IgM 檢測。嚴格按照說明書的操作步驟進行各項操作。檢測結果為＜20 kU/L 時判定為陰性，20～40 kU/L 判定為可疑，＞40 kU/L 判定為陽性。

1.2.3 EB 病毒核酸（EB virus-DNA，EBV-DNA）檢測

采用實時熒光定量聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction，PCR）對EDTA-K2抗凝血3 mL 展開檢測，同時應用EB 病毒核酸擴增熒光定量檢測試劑盒，得到EBV-DNA 檢測值。結果判定標準：EBV-DNA載量≥1×103個拷貝/mL 為陽性。

1.3 評價指標 統(tǒng)計并分析異型淋巴細胞比例檢測、VCA-IgM 檢測以及EBV-DNA 檢測的結果。計算并比較上述檢測方法單獨應用以及三種方法聯(lián)合應用的診斷效能。

1.4 統(tǒng)計學處理 經(jīng)SPSS 25.0 軟件進行數(shù)據(jù)分析。所涉及的計數(shù)資料和計量資料分別采用χ2檢驗和t檢驗，表現(xiàn)形式分別為例（%）和均數(shù)±標準差（±s）。差異有統(tǒng)計學意義，則P＜0.05。

2 結果

2.1 異型淋巴細胞比例、VCA-IgM 以及EBV-DNA檢測結果 結果顯示，37 例患兒中異型淋巴細胞比例為（16.22±3.47）%，陽性率為62.16%（23/37），VCA-IgM 抗體陽性率為83.78%（31/37），EBV-DNA陽性率為91.89%（34/37）。

2.2 不同檢測方法的診斷結果與確診結果比較聯(lián)合檢測共檢出真陽性例數(shù)為36 例，異型淋巴細胞比例、VCA-IgM 抗體、EBV-DNA 單項檢測的真陽性檢出例數(shù)分別為23 例、31 例、34 例。具體診斷結果見表1。

表1 不同檢測方法所得結果與確診結果比較

2.3 不同檢測方法單獨與聯(lián)合應用的診斷效能聯(lián)合檢測的敏感度和準確度均比明顯高于各檢測方法單獨應用（均P＜0.05），特異度、陽性預測值與陰性預測值均明顯高于異型淋巴細胞比例檢測和VCA-IgM 檢測（均P＜0.05）。見表2。

表2 不同檢測方法對傳染性單核細胞增多癥的診斷效能

3 討論

發(fā)熱是兒科多種疾病的首發(fā)臨床癥狀，多種因素均會導致發(fā)熱癥狀的出現(xiàn)，其中以感染最常見，如細菌、病毒感染等，而EB 病毒感染的發(fā)生率較高，患兒全身多個系統(tǒng)受累，病情嚴重程度存在差異，以典型的傳染性單核細胞增多癥為主要表現(xiàn)，部分患兒還會出現(xiàn)隱性感染［6-7］。單核細胞為血液內(nèi)最大的血細胞，主要來自于骨髓中的造血干細胞，能夠參與免疫反應，在吞噬抗原后將所攜帶的抗原決定簇轉交給淋巴細胞，誘導淋巴細胞產(chǎn)生特異性免疫反應［8］。原發(fā)性EB 病毒感染一般以隱性感染的形式存在于0～3 歲兒童中，無明顯的臨床表現(xiàn)，在學齡期及以上的兒童中則主要表現(xiàn)為傳染性單核細胞增多癥［9-10］。當EB 病毒進入兒童的口咽部后，會侵犯具有CD21 受體的細胞。另外B 淋巴細胞被EB病毒感染后會破壞原有表面抗原，導致T 淋巴細胞出現(xiàn)強烈的免疫應答，使其向細胞毒性T 細胞轉變。細胞毒性T 細胞會引起免疫性病理損傷，將被感染的B 細胞殺死，并對多種組織器官造成損傷［11-12］。臨床上一般根據(jù)流行病學、典型臨床表現(xiàn)、實驗室檢查結果等對傳染性單核細胞增多癥進行診斷。

健康人群體內(nèi)的B 淋巴細胞表面存在EB 病毒受體，當被EB 病毒感染后，B 淋巴表面的EB 病毒受體被攻擊后會激活T 淋巴細胞，逐漸向異型淋巴細胞轉變。異型淋巴細胞比例與病程進展有關，多在發(fā)病初的3～5 d 出現(xiàn)，在第7～10 天達到高峰并開始下降，持續(xù)時間在2～8 周［13］。異型淋巴細胞可在一定程度上反映機體與病毒的相互作用強弱，從而對傳染性單核細胞增多癥的嚴重程度進行評價。本研究數(shù)據(jù)顯示，37 例患兒血清中的異型淋巴細胞比例與陽性率分別為（16.22±3.47）%、62.16%，與臨床相關研究中的數(shù)據(jù)相近［14］。異型淋巴細胞比例超過10%，表明檢測結果呈陽性，80%左右的傳染性單核細胞增多癥患兒存在異型淋巴細胞比例增高的情況，因此可將此細胞比例的變化用于輔助診斷該疾病。但對異型淋巴細胞的形態(tài)識別存在主觀性，當檢測者的辨別能力較差時，會出現(xiàn)檢測結果重復，不利于與正常淋巴細胞進行比較［15］。同時異型淋巴細胞比例升高還會出現(xiàn)在其他疾病患兒中，只是與其他病原體感染比較，傳染性單核細胞增多癥引起的異型淋巴細胞比例增高更明顯，因此需要與其他指標進行聯(lián)合檢測，以促進診斷準確性的提升。近年來隨著臨床檢測技術的不斷發(fā)展與進步，EB 病毒抗體與核酸檢測等方法也開始在該疾病診斷中得到應用。

EB 病毒感染后，B 淋巴細胞會促使機體出現(xiàn)體液免疫反應，導致一系列EB 病毒抗體的出現(xiàn)，如對抗衣殼蛋白（capsid protein，CA）的IgG、IgM，主要為VCA-IgG、VCA-IgM。VCA-IgM 的出現(xiàn)時間最早，可用于判斷急性感染期，在體內(nèi)的存在持續(xù)時間為1～2 個月，VCA-IgG 的出現(xiàn)則稍晚。在EB病毒感染急性期和恢復期分別會出現(xiàn)抗早期抗原（early antigen，EA）的抗體、晚期抗核抗原（nuclear antigen，NA）的抗體［16］。VCA-IgG 及病毒中和抗體（virus neutralization antibody-IgG，VNA-IgG）會持續(xù)存在于患兒體內(nèi)。由于EB 病毒存在潛伏感染的特點，可將患兒VCA-IgM 指標用于傳染性單核細胞增多癥的輔助診斷中。本研究結果表明，37 例患兒中的VCA-IgM 陽性率較高，為83.78%，分析原因可能由于兒童的免疫系統(tǒng)正處于發(fā)育階段，尚未成熟，或者是處于病毒感染初期，機體感染病毒出現(xiàn)的抗體量較少，因此容易出現(xiàn)假陰性結果。

近年來熒光定量PCR 檢測技術越發(fā)成熟，已成為診斷多種疾病的有效手段。熒光定量PCR 通過有效擴增，能實時監(jiān)測每一個循環(huán)中的PCR 產(chǎn)物，準確檢測病毒的拷貝數(shù)，反映EB 病毒感染情況［17］。熒光定量PCR 通過對患兒的血清EBV-DNA 展開檢測，有助于了解患兒體內(nèi)病毒感染與復制情況，并與VCA-IgM 指標比較，該方法不會受到體液免疫功能的影響，具有操作更加簡便快速、準確性更高的優(yōu)勢，還能減少誤診、漏診等情況的出現(xiàn)［18-19］。另外EBV-DNA 的定量檢測為EB 病毒感染的一項敏感的分子生物學標志物，有助于臨床醫(yī)師根據(jù)病毒核酸量客觀判斷抗病毒治療效果；且熒光定量PCR在病原體感染的血液篩查中能夠檢出抗原和抗體還未出現(xiàn)時的“窗口期”內(nèi)感染，有助于預防因輸血所致的感染性疾?。?0-21］。在急性發(fā)熱患兒中，應用熒光定量PCR 技術能夠判斷此類患兒是否出現(xiàn)EB病毒感染，并觀察其療效。本研究結果顯示，患兒的EBV-DNA 陽性率在90%以上，表明該項檢測方式是一種較好的輔助診斷方法。另外本研究還表明，上述三項指標聯(lián)合檢測的診斷效能優(yōu)于單一指標檢測，這是由于兒童傳染性單核細胞增多癥存在隱性感染的情況，且發(fā)熱等癥狀相似于其他急性呼吸道感染性疾病，因此聯(lián)合三種指標進行檢測能夠減少假陽性和假陰性結果的出現(xiàn)，為后續(xù)治療的展開提供更可靠的參考依據(jù)［22］。

綜上所述，異型淋巴細胞比例、VCA-IgM 抗體、EBV-DNA 三項指標聯(lián)合檢測可促進兒童傳染性單核細胞增多癥輔助診斷效能的提升，但本研究存在一定局限性，三種指標聯(lián)合檢測的費用昂貴，且對實驗條件的要求較高，因此建議有條件的實驗室實施聯(lián)合檢測。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突