羅桂云

梅毒是臨床上一種常見性病，主要指機(jī)體感染蒼梅毒是由梅毒螺旋體感染引起的一種慢性，系統(tǒng)性的性傳播疾病。梅毒主要通過性傳播、母嬰傳播以及血液傳播。梅毒患者是唯一的傳染源，患者的精液、乳汁、唾液和血液當(dāng)中都可以存在梅毒螺旋體［1-3］。梅毒根據(jù)病程可以分為三期，一期梅毒可表現(xiàn)為硬下疳，腹股溝淋巴結(jié)腫大，此時(shí)傳染性最強(qiáng)，二期梅毒可表現(xiàn)為梅毒疹，硬下疳消退，傳染性也較強(qiáng)，三期梅毒可表現(xiàn)為骨梅毒、神經(jīng)梅毒等。目前臨床對(duì)梅毒螺旋體的實(shí)驗(yàn)室檢測方法主要有甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（tolulized red unheated serum test，TRUST）、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）、化學(xué)發(fā)光微粒子免疫測定法（chemiluminescent microparticle immunoassay，CMIA）及梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(yàn)（treponema pallidum particle agglutination test，TPPA）等，上述方法在臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用中均各有優(yōu)勢(shì)與弊端。本研究對(duì)惠東縣慢性病防治站收治的疑似梅毒感染患者分別采用不同梅毒血清學(xué)檢測方法進(jìn)行測定，分析并比較其診斷價(jià)值，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象與一般資料 選擇2021 年11 月—2022年9月惠東縣慢性病防治站檢驗(yàn)科收取的51例疑似梅毒患者作為研究對(duì)象，其中男性27 例，女性24 例；年齡22～41 歲，平均（31.47±2.96）歲。收集所有患者的血液樣本。

1.1.1 納入標(biāo)準(zhǔn) ① 研究對(duì)象均存在《梅毒、淋病和生殖道沙眼衣原體感染診療指南（2020 年）》［3］中梅毒相關(guān)臨床表現(xiàn)；② 入組前意識(shí)清晰且具備基本理解能力；③ 對(duì)本研究內(nèi)容知情同意。

1.1.2 排除標(biāo)準(zhǔn) ① 合并心腦血管重大疾病患者；② 合并肝、腎等重要器官功能障礙者；③ 存在精神異常或認(rèn)知障礙者；④ 對(duì)本研究使用試劑過敏者。

1.1.3 倫理學(xué) 本研究符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)本單位倫理審批（審批號(hào)：20230509），所有檢測均獲得過受檢者或家屬的知情同意。

1.2 儀器與試劑 TDL-80-2B 低速自動(dòng)平衡離心機(jī)由上海安亭科學(xué)儀器廠生產(chǎn)，KJ-201BD 振蕩器由上海一恒科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn)，Multiskans MK3全自動(dòng)酶聯(lián)免疫分析儀購自芬蘭雷博診斷有限公司，雅培i2000全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析儀購自美國雅培公司。終止液（規(guī)格：100 mL∶500 mL）由上海酶聯(lián)生物科技有限公司生產(chǎn)，抗原液（批號(hào)：H20223400346）購自南京諾唯贊醫(yī)療科技有限公司，TPPA 試劑盒（批號(hào)：H20173406813，規(guī)格：20×5 人份/盒）由日本富士瑞必歐株式會(huì)社提供。

1.3 研究方法 所有入組對(duì)象均采集晨起空腹靜脈血10 mL 作為后續(xù)檢測樣本，置于低速自動(dòng)平衡離心機(jī)，以3 000 r/min 離心5 min，獲取上層血清。

1.3.1 TRUST 法檢測 收集血清樣本（50 μL）置于加樣卡片圈內(nèi)，再均勻涂抹，使樣本分布于整個(gè)卡片圈，將抗原液（北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司）輕輕搖勻，借助試劑盒自帶針頭滴加1 滴抗原液至卡片圈，再將卡片置于立體脫色搖床上方，使用振蕩器進(jìn)行8 min 振蕩搖勻（調(diào)節(jié)速度為100 r/min），立即于亮光下進(jìn)行結(jié)果觀察。

1.3.2 ELISA 法檢測 使用全自動(dòng)酶聯(lián)免疫分析儀開展ELISA 法檢測，分別收集3 份血清樣本（每份50 μL）置于預(yù)包被板條孔內(nèi)，設(shè)置陽性、陰性以及空白對(duì)照組，隨后將血清樣本置于恒溫箱內(nèi)（溫度控制在37 ℃）進(jìn)行60 min 溫育；取出板條孔，分別將酶標(biāo)記物（50 μL）加入陽性、陰性以及空白對(duì)照孔內(nèi)，振蕩搖勻；置于恒溫箱內(nèi)（溫度控制在37 ℃）進(jìn)行30 min 溫育。再將板條孔取出，進(jìn)行洗板操作后，各孔內(nèi)加入底物緩沖液（50 μL），振蕩搖勻后置于恒溫箱內(nèi)（溫度控制在37 ℃）進(jìn)行30 min 溫育，最后在各孔內(nèi)加入終止液（50 μL）并混勻。

1.3.3 CMIA 法檢測 使用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析儀以及配套試劑、質(zhì)控液及標(biāo)準(zhǔn)液，嚴(yán)格按照儀器及試劑盒說明書開展各項(xiàng)操作。

1.3.4 TPPA 法檢測 使用TPPA 試劑盒與質(zhì)控液，在室溫條件下由操作人員在U 型板上開展標(biāo)本依次倍比稀釋操作，再分別加入未致敏與致敏明膠顆粒，振蕩混合30 s，加蓋后靜置（注意調(diào)節(jié)室溫在15～30 ℃）；2 h 后，借助觀察鏡對(duì)其反應(yīng)圖像進(jìn)行觀察并記錄，最后對(duì)測定結(jié)果進(jìn)行判定。

1.4 觀察指標(biāo)

1.4.1 不同檢測方法陽性結(jié)果判定 ①TRUST 法：陽性特征為圓圈內(nèi)出現(xiàn)粉色或紅色的絮狀物，若圓圈內(nèi)觀察到甲苯胺紅顆粒在中央處發(fā)生聚集或呈均勻分布，則判定為陰性［5］；②ELISA 法：樣本OD值S/C.O≥1.0 提示梅毒螺旋體抗體反應(yīng)陽性；樣本OD 值S/C.O＜1.0 提示梅毒螺旋體抗體反應(yīng)陰性［6］；③CMIA 法：S/C.O 值≥1.0 判定為有反應(yīng)性（陽性）；S/C.O 值＜1.0 判定為無反應(yīng)性（陰性）；④TPPA 法：滴度≥1∶80 時(shí)判斷為陽性。

1.4.2 不同檢測方法結(jié)果與臨床診斷結(jié)果比較 根據(jù)公式計(jì)算診斷效能：敏感度＝真陽性例數(shù)/（真陽性例數(shù)+假陰性例數(shù)）×100%，特異度＝真陰性例數(shù)/（真陰性例數(shù)+假陽性例數(shù)）×100%，診斷準(zhǔn)確度＝（真陽性例數(shù)+真陰性例數(shù)）/總例數(shù)×100%［7］。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 22.0軟件分析數(shù)據(jù)。計(jì)量資料符合正態(tài)分布以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同血清學(xué)方法檢測梅毒的檢出結(jié)果比較TPPA 方法檢出陽性23 例，TRUST 及ELISA 方法檢出陽性樣本數(shù)分別為16 例、17 例，TPPA 方法診斷梅毒的敏感度明顯高于TRUST 及ELISA 方法，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），CMIA 方法檢測出陽性樣本數(shù)為25 例，TPPA 與CMIA 檢測方法的敏感度比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 不同血清學(xué)檢測方法的診斷結(jié)果比較

2.2 不同血清學(xué)檢測方法的敏感度、特異度以及診斷準(zhǔn)確度比較 TPPA 方法診斷梅毒的特異度為96.15%，TRUST、ELISA 及CMIA 方法診斷梅毒的特異度分別為61.54%、57.69%、76.92%，TPPA 方法的特異度明顯高于TRUST、ELISA 及CMIA 方法，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），TPPA 方法對(duì)梅毒的診斷準(zhǔn)確度為94.12%，TRUST、ELISA 及CMIA 方法對(duì)梅毒的診斷準(zhǔn)確度為62.75%、62.75%、88.24%；TPPA 方法對(duì)梅毒的診斷準(zhǔn)確度明顯高于TRUST 及ELISA 方法，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），TPPA與CMIA 方法的診斷準(zhǔn)確度比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。見表2。

表2 不同血清學(xué)檢測方法的敏感度、特異度及診斷準(zhǔn)確度比較

3 討論

人體一旦感染梅毒，通常表現(xiàn)為較明顯的硬下疳特征，隨著病情進(jìn)展，患者會(huì)出現(xiàn)全身梅毒疹，病情嚴(yán)重時(shí)會(huì)對(duì)骨關(guān)節(jié)、黏膜、心血管、淺表淋巴結(jié)及神經(jīng)系統(tǒng)等造成損傷，進(jìn)而引發(fā)顱內(nèi)壓增高、視網(wǎng)膜炎癥、癡呆等癥狀，影響患者工作與日常生活，導(dǎo)致其生活質(zhì)量下降［8］。因此早期明確診斷并開展針對(duì)性治療對(duì)改善梅毒患者預(yù)后具有重要意義。

梅毒可以作為預(yù)后判斷以及復(fù)發(fā)或再感染的診斷指標(biāo)［9］。目前，盡管檢驗(yàn)科研發(fā)出聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）等各種新型分子檢測技術(shù)，但由于缺乏特異性基因參考，且容易受患者機(jī)體狀況等因素的干擾，導(dǎo)致臨床仍將TPPA 作為梅毒檢測的“金標(biāo)準(zhǔn)”。TPPA 血清學(xué)檢測方法的準(zhǔn)確度最高，但由于該方法使用的試劑盒價(jià)格較高，普通工薪階層患者難以接受，因此，TPPA 無法成為梅毒常規(guī)篩查手段［10］。TRUST 法主要通過在抗原內(nèi)加入甲苯胺紅顆粒作為指示物，為檢測人員肉眼觀察提供一定便利。該方法主要優(yōu)勢(shì)為經(jīng)濟(jì)實(shí)惠、患者接受程度高，且檢測結(jié)果可隨病情發(fā)生變化而產(chǎn)生不同程度的反應(yīng)，因此臨床通常借助這一檢測方法對(duì)患者臨床病情變化實(shí)施監(jiān)測。但TRUST 法容易受到外界多種因素（如患者自身存在免疫性疾病、合并惡性腫瘤、前帶反應(yīng)、吸毒等）干擾，導(dǎo)致最終檢測結(jié)果的準(zhǔn)確度偏低。當(dāng)行TRUST 法檢測結(jié)果顯示患者為陰性時(shí)，不排除存在一或三期梅毒、神經(jīng)性梅毒及潛伏梅毒的可能性，臨床檢驗(yàn)醫(yī)師必須結(jié)合患者的實(shí)際癥狀作出準(zhǔn)確判斷。因此，臨床又開始探索其他血清學(xué)檢測方法。ELISA 法屬于檢驗(yàn)科常用方法之一，在梅毒疾病診斷中應(yīng)用的原理為借助基因重組梅毒螺旋體的特異性抗原TP17 及TP47 包被酶板孔，運(yùn)用雙抗原夾心法以檢測梅毒螺旋體表面特異性抗原IgM 及IgG 的抗體［11］。這一檢測方法可以有效避免主觀判定所產(chǎn)生的誤差，借助定位酶標(biāo)儀準(zhǔn)確判讀結(jié)果，有助于臨床檢出率提高，檢測結(jié)果較為客觀且可靠。但檢驗(yàn)科在臨床實(shí)際長期應(yīng)用后發(fā)現(xiàn)，ELISA 法檢測過程中不可避免地出現(xiàn)假陽性結(jié)果，再加上方法學(xué)方面的缺陷及包被原料的差異，導(dǎo)致這一檢測方法存在一定的漏檢風(fēng)險(xiǎn)。有研究人員將TPPA 作為“金標(biāo)準(zhǔn)”，發(fā)現(xiàn)ELISA 法存在較多假陽性結(jié)果［12］?；瘜W(xué)發(fā)光法屬于新型標(biāo)記免疫測定方法，該技術(shù)主要特點(diǎn)為敏感度及準(zhǔn)確度高、操作簡便、可重復(fù)檢測等，近年來得到飛速發(fā)展。與常規(guī)ELISA 法中以酶標(biāo)板為固相載體實(shí)施檢測不同，化學(xué)發(fā)光法的主要載體為懸浮性磁微粒，能有效擴(kuò)大與樣品反應(yīng)的表面積，因此檢測更迅速且靈活；再加上磁場作用，能準(zhǔn)確反映梅毒螺旋體的動(dòng)態(tài)變化，從而彌補(bǔ)ELISA 的不足［13］。陳俊生和張旭明［14］研究中對(duì)118 份化學(xué)發(fā)光法所得陰性標(biāo)本應(yīng)用TPPA 法開展檢測，結(jié)果顯示均為陰性，提示CMIA 的敏感度較高。

綜上所述，TPPA 檢測方法的敏感度、特異度及診斷準(zhǔn)確度均優(yōu)于TRUST 法及ELISA 法，CMIA 法的敏感度高達(dá)100%，CMIA 聯(lián)合TPPA 的血清學(xué)檢測策略在臨床具有較好的應(yīng)用前景。今后臨床醫(yī)師可考慮CMIA 與TPPA 檢測方法聯(lián)合使用，以避免發(fā)生漏診、誤診，進(jìn)一步提高對(duì)梅毒臨床診斷的準(zhǔn)確度，從而為后續(xù)治療方案的選擇提供可靠依據(jù)。

此外，試驗(yàn)開展期間也發(fā)現(xiàn)本研究的不足之處：① 研究對(duì)象單一且缺乏排除標(biāo)準(zhǔn)，可能存在地區(qū)差異；② 研究對(duì)象存在個(gè)體差異，如血清標(biāo)本送檢時(shí)間不一致，檢驗(yàn)人員的操作水平差異都可能對(duì)檢測結(jié)果造成影響。今后開展試驗(yàn)時(shí)可考慮納入不同地區(qū)病例，引用嚴(yán)謹(jǐn)?shù)呐懦龢?biāo)準(zhǔn)，并充分考慮各種可能影響檢測結(jié)果的主觀合客觀因素并合理排除，更加深入分析不同梅毒血清學(xué)檢測策略對(duì)臨床梅毒患者的診斷價(jià)值。

利益沖突作者聲明不存在利益沖突