黃嫻,王維,解金輝,李彤彤(天津市血液中心免疫血液學(xué)研究室,天津 300110)

Kpa抗原(KEL3)屬于Kell系統(tǒng)的低頻抗原,抗Kpa非常罕見(jiàn),可能引起嚴(yán)重的急性[1]、遲發(fā)性溶血性輸血反應(yīng)[2]和胎兒貧血[3]、水腫[4]。抗E、抗Kpa混合抗體更未見(jiàn)報(bào)道且極易漏檢,近期本實(shí)驗(yàn)室發(fā)現(xiàn)1例,現(xiàn)報(bào)告如下。

1 對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象 患者,女,32歲,骨髓增生異常綜合征,無(wú)妊娠史,有5次輸血史,最近輸注紅細(xì)胞為2月前。血紅蛋白43 g/L,申請(qǐng)輸注紅細(xì)胞,醫(yī)院輸血科檢測(cè)不規(guī)則抗體篩查陽(yáng)性,送檢至本實(shí)驗(yàn)室。

1.2試劑與儀器 正定型標(biāo)準(zhǔn)血清和反定細(xì)胞(上海血液生物公司);抗篩細(xì)胞、RhD標(biāo)準(zhǔn)血清(荷蘭Sanquin公司);譜細(xì)胞(荷蘭Sanquin公司,意大利REAGENS公司);抗球蛋白卡(美國(guó)Bio-Rad公司);Rh分型標(biāo)準(zhǔn)血清、IgG型單克隆抗Kpa、抗Kpb標(biāo)準(zhǔn)血清(德國(guó)CE-IMMUNDIAGNOSTIKA公司);聚凝胺試劑、0.2 mol/L二硫蘇糖醇(DTT)和0.01 mol/L DTT(長(zhǎng)春博德公司);酸放散試劑盒(珠海貝索公司);KA2200離心機(jī)(日本久保田公司);毛細(xì)管離心機(jī)(德國(guó)Sigma公司)。

1.3血型血清學(xué)試驗(yàn) ABO正反定型、Rh分型、直接抗球蛋白試驗(yàn)、抗體篩查和鑒定均按《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》第4版進(jìn)行操作,酸放散試驗(yàn)按試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作,0.2 mol/L DTT處理紅細(xì)胞、0.01 mol/L DTT處理血清的IgM抗體參考AABB第20版,毛細(xì)管離心法按參考文獻(xiàn)操作[5]。效價(jià)采用試管法對(duì)血清倍比稀釋,抗E效價(jià)采用sanquin譜11號(hào)Ee、Kp(a-)細(xì)胞,抗Kpa效價(jià)采用sanquin譜8、16號(hào)ee、Kp(a+)細(xì)胞混合液,采用抗人球蛋白凝膠卡檢測(cè)。

2 結(jié)果

2.1患者血型 B型,Rh分型為CCDee,Kp(a-b+)。

2.2直接抗球蛋白試驗(yàn) 采用抗球蛋白卡,患者直接抗球蛋白試驗(yàn)2+。用毛細(xì)管離心法分離,近心端1+,遠(yuǎn)心端3+。提示既往輸注的紅細(xì)胞被致敏,可能有輸血反應(yīng)。

2.3抗體篩查和抗體鑒定結(jié)果 患者血清與抗篩細(xì)胞、Sanquin公司譜細(xì)胞在鹽水介質(zhì)中均陰性,在抗球蛋白卡中除與E陽(yáng)性細(xì)胞凝集外,與8號(hào)、16號(hào)ee、Kp(a+)細(xì)胞凝集強(qiáng)度為2+。為進(jìn)一步確認(rèn),加做REAGENS公司譜細(xì)胞,在抗球蛋白卡中與9號(hào)ee、Kp(a+)細(xì)胞凝集強(qiáng)度也為2+。提示患者血清中除含有抗E外,還存在抗Kpa。

患者血清在聚凝胺介質(zhì)中呈抗E格局,聚凝胺法對(duì)抗Kpa漏檢。血清與0.2 mol/L DTT處理后的譜細(xì)胞在抗球蛋白卡中也僅檢測(cè)到抗E,Kpa抗原被0.2 mol/L DTT破壞。

2.4抗體類(lèi)型、性質(zhì)和效價(jià) 患者血清經(jīng)等量EE、Kp(a-)紅細(xì)胞充分吸收1h后,吸收后血清格局為抗Kpa,EE、Kp(a-)紅細(xì)胞吸收后酸放散液格局為抗E,說(shuō)明患者血清中的抗E、抗Kpa為混合抗體,而非聯(lián)合抗體。

鹽水介質(zhì)陰性,采用0.01 mol/L DTT破壞患者血清中可能存在的IgM抗體,處理前后血清與Sanquin公司譜細(xì)胞在抗球蛋白卡中凝集強(qiáng)度不變,確證本案例中的抗E、抗Kpa均為IgG性質(zhì)。

患者血清在抗球蛋白卡中抗E效價(jià)16,抗Kpa效價(jià)64。

2.5放散液抗體檢測(cè) 在抗球蛋白卡中,患者紅細(xì)胞酸放散液與Sanquin公司譜細(xì)胞反應(yīng)。由于放散液量的限制,選做部分細(xì)胞。1號(hào)ee、Kp(a-)凝集強(qiáng)度2+,3號(hào)EE、Kp(a-)凝集強(qiáng)度4+,8號(hào)ee、Kp(a+)凝集強(qiáng)度3+。酸放散液與含有E或Kpa抗原的細(xì)胞反應(yīng)強(qiáng)于ee、Kp(a-)細(xì)胞。

2.6交叉配血 篩選B型,Rh分型為CCDee,Kp(a-)的懸浮紅細(xì)胞2 U與患者配血,鹽水法主次側(cè)均陰性,聚凝胺法和抗球蛋白卡結(jié)果主側(cè)均陰性,次側(cè)均1+。輸注后患者血紅蛋白值由43 g/L上升為57 g/L,無(wú)輸血不良反應(yīng)。

3 討論

抗E在我國(guó)有輸血史人群中是最常檢出的抗體[6],而抗Kpa很罕見(jiàn)。Kpa抗原陽(yáng)性的表型頻率在亞洲極低,在黑人中低于0.01%,在高加索人中較多,也僅為2%[7]。自1957年發(fā)現(xiàn)第1例抗Kpa(Penney)至今,PubMed數(shù)據(jù)庫(kù)共報(bào)道抗Kpa不足20例,多因妊娠、輸血等免疫刺激產(chǎn)生[8],另有1例為天然抗體、1例可能與細(xì)菌感染有關(guān)[9]。因輸血產(chǎn)生抗Kpa的多為淋巴瘤、地中海貧血患者等長(zhǎng)期輸血患者。Kell血型系統(tǒng)抗體多為IgG型,主要是IgG1,在抗球蛋白介質(zhì)中反應(yīng)良好,可引起急性、遲發(fā)性溶血。由于Kell糖蛋白出現(xiàn)于紅系祖細(xì)胞上,抗Kpa可導(dǎo)致胎兒紅細(xì)胞生成抑制,造成胎兒貧血[10]。

本例患者無(wú)妊娠史,有多次輸血史,毛細(xì)管離心后直接抗球蛋白試驗(yàn)遠(yuǎn)心端強(qiáng)陽(yáng)性,提示輸注紅細(xì)胞被致敏,可能輸注了E或Kpa抗原陽(yáng)性的血液,混合抗體或與輸血免疫相關(guān)。另外,酸放散液與E或Kpa抗原陽(yáng)性的紅細(xì)胞反應(yīng)均強(qiáng)于ee、Kp(a-)紅細(xì)胞,放散液中可能存在抗E、抗Kpa,可考慮稀釋放散液,格局可能更明確。針對(duì)患者血清中的抗E、抗Kpa混合抗體,需篩選E和Kpa抗原陰性的血液輸注,由于患者Rh表型為CCDee,為排除抗E聯(lián)合抗c的潛在可能,給予CCDee、Kp(a-)血液更安全。此后4個(gè)月內(nèi),患者輸注8次B型、CCDee、Kp(a-)血液,共16 U,輸注效果良好,無(wú)不良反應(yīng),且4個(gè)月中患者直接抗球蛋白試驗(yàn)結(jié)果逐漸由2+變?yōu)?+,最后變?yōu)殛幮浴?/p>

抗Kpa罕見(jiàn)但不應(yīng)被忽視,國(guó)外有報(bào)道該抗體被電子配血漏檢而導(dǎo)致血管外溶血[11]?；仡櫛纠贵w鑒定:(1)因Kpa頻率低,譜細(xì)胞中陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)少,可使用多套譜細(xì)胞鑒定;(2)巰基還原劑可破壞Kell糖蛋白結(jié)構(gòu)中半胱氨酸間的二硫鍵[12],從而破壞紅細(xì)胞上的Kell抗原,為抗Kpa鑒定提供依據(jù)。(3)聚凝胺試驗(yàn)漏檢Kell系統(tǒng)抗體[13],若本案例僅采用鹽水法和聚凝胺法會(huì)漏檢抗Kpa。(4)混合抗體檢測(cè)時(shí),運(yùn)用吸收放散、效價(jià)等試驗(yàn)有助于確證抗體。輸血前檢測(cè)應(yīng)綜合運(yùn)用多種方法,保障臨床輸血安全。