徐 強(qiáng),余 輝,楊 柳,張 丹,馮麗娟

陜西省漢中市中心血站,陜西漢中 723000

乙型肝炎病毒(HBV)性肝炎已成為嚴(yán)重威脅人類健康的世界性疾病,也是我國當(dāng)前流行廣泛、危害性大的一種疾病。乙型肝炎病毒性肝炎表面抗原(HBsAg)是早期診斷HBV的重要指標(biāo),其在普通人群中的陽性率為7.20%[1]。HBV可通過血液傳播[2],是國內(nèi)外輸血安全領(lǐng)域最為關(guān)注的焦點(diǎn)之一。因此,保證輸血安全,避免因輸血而導(dǎo)致的HBV感染,加強(qiáng)血液篩查對防控因輸血傳播的感染性疾病尤為重要。本研究首先對漢中市無償獻(xiàn)血人群中HBV感染的陽性率進(jìn)行篩查,并對陽性樣本做進(jìn)一步的確證實(shí)驗(yàn),統(tǒng)計(jì)并分析了漢中市中心血站無償獻(xiàn)血人群中HBV攜帶者的分布情況,以期為無償獻(xiàn)血者HBV反應(yīng)性篩查提供參考依據(jù),現(xiàn)對2020-2022年漢中市無償獻(xiàn)血者HBsAg篩查及確證實(shí)驗(yàn)的結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料和方法

1.1一般資料 選取2020年1月至2022年12月漢中市中心血站體檢合格并獻(xiàn)血成功的106 139例無償獻(xiàn)血者作為研究對象,年齡18～60歲。

1.2試劑與儀器 (1)試劑:HBsAg診斷試劑盒(北京萬泰生物工程股份有限公司或廈門英科新創(chuàng)科技有限公司);HBV核酸檢測(NAT)試劑盒(瑞士Roche公司);HBsAg確證試劑盒(珠海麗珠試劑股份有限公司),以上試劑分別由中國食品藥品檢定研究院、國家藥品監(jiān)督管理局檢測合格,且均在有效期內(nèi)使用。(2)儀器:TECAN EVO 150全自動加樣儀(瑞士TECAN公司);FAME24/20全自動酶免分析儀(瑞士哈美頓公司);HAMILTON STAR全自動混樣儀(美國Roche公司);COBAS Ampliprep/TaqMan全自動核酸提取擴(kuò)增儀(美國Roche公司)。

1.3方法

1.3.1酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)和NAT 首先采用2種國產(chǎn)ELISA檢測試劑盒對無償獻(xiàn)血者的血液樣本進(jìn)行HBsAg檢測[吸光度(A)≥臨界值,判定為陽性],2種試劑檢測均為陰性的標(biāo)本采用Roche COBASs201系統(tǒng)(6混檢)進(jìn)行HBV脫氧核糖核酸(DNA)檢測,將混檢陽性的6個樣本繼續(xù)做單檢實(shí)驗(yàn),單檢陽性的樣本即為NAT陽性。

1.3.2中和實(shí)驗(yàn)法(HBsAg確證實(shí)驗(yàn)) 應(yīng)用HBsAg確證試劑盒,對HBsAg初篩陽性的無償獻(xiàn)血者血液樣本和NAT陽性的無償獻(xiàn)血者1個月后抽取的靜脈血樣本進(jìn)行確證實(shí)驗(yàn),操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。并計(jì)算陰性對照平均值、陽性對照抑制率、樣本抑制率,以樣本抑制率≥50%為陽性,<50%為陰性。初篩結(jié)果為陽性,確證實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陰性,則被認(rèn)為假陽性。若陰性、陽性對照的計(jì)算值不符合試劑盒說明書中關(guān)于實(shí)驗(yàn)有效性的判定標(biāo)準(zhǔn),則視為實(shí)驗(yàn)無效。

1.4收集無償獻(xiàn)血者的基本資料 收集獻(xiàn)血者數(shù)據(jù)庫中2020年確證實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽性的無償獻(xiàn)血者的基本資料,并統(tǒng)計(jì)不同年齡(<28歲、28～60歲),性別(男、女),民族(漢族、其他民族),婚姻狀況(單身、已婚),生活區(qū)域(城市、農(nóng)村),獻(xiàn)血次數(shù)(1次、>1次)獻(xiàn)血者的數(shù)量。

1.5質(zhì)量控制 按照本實(shí)驗(yàn)室項(xiàng)目的質(zhì)量控制要求,若室內(nèi)質(zhì)控檢測結(jié)果在控且試劑盒內(nèi)陽性、陰性對照檢測結(jié)果符合預(yù)期要求,則提示本次實(shí)驗(yàn)有效。若室內(nèi)質(zhì)控檢測結(jié)果不在控或陽性、陰性對照檢測結(jié)果不符合預(yù)期要求,則提示本次實(shí)驗(yàn)無效,應(yīng)分析原因并重新檢測。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或百分率表示,組間比較采用χ2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1應(yīng)用ELISA和NAT初篩2020-2022年無償獻(xiàn)血者的HBV陽性率比較 ELISA初篩HBsAg和NAT初篩HBV的總陽性率進(jìn)行比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 應(yīng)用ELISA和NAT 初篩2020-2022年無償獻(xiàn)血者的HBV陽性率比較[n(%)]

2.22020年ELISA單、雙試劑初篩陽性的確證實(shí)驗(yàn)陽性率的比較 ELISA雙試劑初篩陽性進(jìn)行確證實(shí)驗(yàn)的陽性率要高于單試劑,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);兩種初篩試劑(北京萬泰,英科新創(chuàng))進(jìn)行ELISA單試劑初篩陽性的確證實(shí)驗(yàn)陽性率比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。NAT初篩HBV陽性的33例無償獻(xiàn)血者中,有1例未完成確證實(shí)驗(yàn),其余32例無償獻(xiàn)血者中進(jìn)行確證實(shí)驗(yàn)結(jié)果均陽性的有3例,確證陽性率為9.4%。

表2 2020年ELISA初篩陽性標(biāo)本及確證實(shí)驗(yàn)陽性率的比較[n(%)]

2.32020年確證實(shí)驗(yàn)陽性的無償獻(xiàn)血者基本資料比較 28～60歲的無償獻(xiàn)血者進(jìn)行確證實(shí)驗(yàn)的陽性率比<28歲的無償獻(xiàn)血者高(P<0.05);農(nóng)村無償獻(xiàn)血者的確證實(shí)驗(yàn)陽性率比城市無償獻(xiàn)血者高(P<0.05);獻(xiàn)血次數(shù)為1次的無償獻(xiàn)血者的確證實(shí)驗(yàn)陽性率比獻(xiàn)血次數(shù)>1次的無償獻(xiàn)血者高(P<0.05)。見表3。

表3 2020年確證實(shí)驗(yàn)陽性的無償獻(xiàn)血者基本資料比較[n(%)]

3 討 論

為了規(guī)范臨床用血,保障臨床輸血安全,漢中市中心血站除在獻(xiàn)血前使用膠體金法對無償獻(xiàn)血者進(jìn)行HBsAg篩查,對初篩合格的血液樣本應(yīng)用ELISA和NAT再次篩查HBV感染,多種方法的同時應(yīng)用,在很大程度上縮短了HBV感染的“窗口期”,降低了HBV輸血感染的發(fā)生率。有研究發(fā)現(xiàn)ELISA檢測HBsAg的假陽性率較高,NAT也易產(chǎn)生假陽性,其中標(biāo)本、試劑、氣溶膠污染等都可能導(dǎo)致假陽性的情況發(fā)生[3],這與本研究結(jié)果一致。但由于檢測成本高和工作量大等原因,我國目前未要求對HBsAg初篩為陽性的樣本進(jìn)行確證實(shí)驗(yàn),因此丟失了一部分HBsAg假陽性獻(xiàn)血者,造成了血液資源的浪費(fèi)[4]。

本研究發(fā)現(xiàn),雖然無償獻(xiàn)血者獻(xiàn)血前均經(jīng)過膠體金法檢測HBsAg,但仍然有一定比例的無償獻(xiàn)血者應(yīng)用ELISA和NAT檢測HBsAg為陽性。由此可見,為保血液安全,采用ELISA和NAT檢測HBsAg必不可少。本研究結(jié)果顯示,2020年1-12月36 469例經(jīng)過膠體金法檢測的結(jié)果為陰性的無償獻(xiàn)血者血液樣本中,ELISA和NAT共檢出HBV陽性感染者131例,陽性率為0.36%,和南京胡珀璐等[5]研究結(jié)果相符,遠(yuǎn)低于國內(nèi)其他地區(qū),比如內(nèi)江市的0.91%[6]和濟(jì)寧市的5.04%[7]。

本研究發(fā)現(xiàn),應(yīng)用NAT檢測2020年無償獻(xiàn)血者的HBV陽性率為0.09%,與常州的0.1%[8]相近,提示應(yīng)用NAT能有效提高血液安全,降低輸血性疾病感染風(fēng)險[9]。但本研究也發(fā)現(xiàn)NAT初篩HBV陽性的32例無償獻(xiàn)血者中,確證實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽性的樣本僅有3例,確證陽性率為9.4%,其原因有可能是NAT可造成假陽性,確證試驗(yàn)試劑靈敏度偏低,或者獻(xiàn)血者處于隱匿性肝炎,和其他研究相符[10-12]。此外,本研究中28～60歲的無償獻(xiàn)血者確證實(shí)驗(yàn)的陽性率高于<28歲的無償獻(xiàn)血者(P<0.05),這與我國從1992年起將乙肝疫苗預(yù)防接種列入國家免疫計(jì)劃中[13],實(shí)施強(qiáng)制性的0-1-6新生兒乙肝疫苗接種方案有關(guān)。<28歲的人群出生時都接種了乙肝疫苗。本研究中,農(nóng)村無償獻(xiàn)血者確證實(shí)驗(yàn)的陽性率比城市無償獻(xiàn)血者高(P<0.05),這與滿小青[7]對濟(jì)寧市獻(xiàn)血者HBV感染研究結(jié)果不符,提示原因可能為:本研究所在地為五線城市,以農(nóng)村人口居多,獻(xiàn)血者也主要以農(nóng)民為主,農(nóng)村生活習(xí)慣和個人衛(wèi)生較差,易導(dǎo)致HBV傳播;本研究中,獻(xiàn)血次數(shù)為1次的無償獻(xiàn)血者確證實(shí)驗(yàn)的陽性率比獻(xiàn)血次數(shù)>1次的無償獻(xiàn)血者高(P<0.05),這可能與獻(xiàn)血者的獻(xiàn)血動機(jī)有關(guān),如四川省綿陽市對獻(xiàn)血人群HBV流行情況的分析[14],重復(fù)獻(xiàn)血者能積極參與本站組織的多種宣教活動,具有良好的生活習(xí)慣和健康意識,而初次獻(xiàn)血者往往存在其他動機(jī),如因種種原因借獻(xiàn)血行免費(fèi)健康體檢等。最后,本研究還發(fā)現(xiàn)ELISA雙試劑檢測HBV感染的確證實(shí)驗(yàn)陽性率高于ELISA單試劑檢測,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),這可能與試劑包被物不同、獻(xiàn)血者個人體內(nèi)某些抗原抗體存在類似交叉反應(yīng)等有關(guān)。為了提高血液安全,在建立篩查HBV陽性者歸隊(duì)流程中,應(yīng)重點(diǎn)跟蹤HBV ELISA單試劑陽性和NAT陽性的無償獻(xiàn)血者。同時,政府應(yīng)加強(qiáng)無償獻(xiàn)血知識的宣傳,鼓勵固定無償獻(xiàn)血者積極獻(xiàn)血,鞏固和發(fā)展固定無償獻(xiàn)血者隊(duì)伍,降低輸血傳播HBV的風(fēng)險。

綜上所述,ELISA雙試劑初篩陽性進(jìn)行確證實(shí)驗(yàn)的陽性率要高于單試劑初篩陽性。但本研究仍存在一定的局限性:(1)本研究選用獻(xiàn)血后的HBsAg陽性樣本進(jìn)行分析,并未將膠體金法初篩陽性樣本納入確證實(shí)驗(yàn)。(2)未對2021-2022年ELISA和NAT陽性樣本進(jìn)行確證實(shí)驗(yàn)。未來將在局限性之上繼續(xù)進(jìn)行研究,以期完整建立無償獻(xiàn)血者HBV反應(yīng)性篩查。