李 健 劉義勇 胡志強 杜忠偉 王 旭 王 鑫*

（1. 延邊朝鮮族自治州農(nóng)業(yè)科學(xué)院，國家食用菌產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系延吉綜合試驗站，吉林 延吉 133000；2. 梨樹縣森林病蟲害防治中心，吉林 延吉 133000）

白囊耙齒菌（Irpexlacteus），俗稱白耙齒菌，是一種藥用真菌，分類學(xué)上隸屬于擔(dān)子菌亞門（Basidiomycetes）、層菌綱（Hymenomycetes）、非褶菌目（Aphyllophorales）、多孔菌科（Polyporaceae）、耙齒菌屬（IrpexFr.）[1]。其廣泛分布于吉林、黑龍江、四川、云南和西藏等地，是一種常見的野生木腐真菌[2]。白囊耙齒菌主要生長在闊葉樹倒木、枯立木、枯枝上，子實體一年生，菌蓋呈瓦片狀平伏或堆疊式覆蓋（圖1），形似貝殼，或自然反卷，形似屋檐，偶爾側(cè)向生長聯(lián)合。菌蓋呈白色、奶油色或淡黃色，可能生長密集絨毛或硬毛；其外表光滑且有淺淺的溝紋，邊緣顏色均一，邊緣幼嫩的部分通常呈現(xiàn)孔狀、多角形，管口為薄壁結(jié)構(gòu)。新鮮時質(zhì)地是軟革質(zhì)、性韌，具有特殊的淡香，而在干燥的過程中會收縮變堅硬，顏色漸變?yōu)闇\咖色，沒有任何香味[3-4]。

圖1 野生白囊耙齒菌

白囊耙齒菌多糖具有出色的抗菌、消炎和利尿功效，目前已經(jīng)研發(fā)出多種藥劑，如腎炎康和益腎康膠囊，用于治療腎炎[5]。此外，白囊耙齒菌還有較高含量的麥角甾醇和腺苷[6-7]。發(fā)酵中期的發(fā)酵液會散發(fā)出香氣，利用GC-MS分析技術(shù)可以檢測到30多種用于可日化和食品的香料成分[8]。

2013年，國內(nèi)圖力古爾等首先嘗試白囊耙齒菌栽培[9]。本試驗通過篩選白囊耙齒菌最佳出菇開口方式，以期提高其人工栽培的產(chǎn)量與質(zhì)量，為今后工廠化栽培奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 供試菌種

白囊耙齒菌‘IL-W01’在汪清縣仲坪鄉(xiāng)采集分離獲得，保藏在延邊朝鮮族自治州農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所。

1.2 主要試劑和儀器

葡萄糖、瓊脂、75%酒精、95%酒精等均為國產(chǎn)分析純。上海博迅YXQ-100A立式壓力蒸汽滅菌器，連云港國鑫GXMQ-EE-9.7JS培養(yǎng)基滅菌器，蘇州安泰SW-CJ-1BU潔凈工作臺，上海精宏DNP-9272電熱恒溫培養(yǎng)箱，濟南普朗特PLT-G50全自動定量灌裝機，天津泰斯特DZ-10LⅢ蒸餾水器，上海雷磁PHS-3C pH計，常熟雙杰JJ223BC分析天平，青島海爾HYC-390F冷藏冷凍箱，黑龍江千珍源傳送帶開口機。

1.3 母種制作

PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g、瓊脂粉20 g、葡萄糖20 g、水1 000 mL。

稱取馬鈴薯200 g切條放入鍋中，加入蒸餾水1 000 mL煮沸，用三層濾布過濾，留取濾液倒回鍋中，加入瓊脂粉20 g、葡萄糖20 g，加蒸餾水定容至1 000 mL，倒入全自動定量灌裝機中繼續(xù)加熱攪拌均勻后，即可將培養(yǎng)液灌裝至20 mm×200 mm玻璃試管中，灌裝至1/4試管高度，塞上海綿塞，在立式壓力蒸汽滅菌器中121 ℃滅菌30 min后擺放斜面，待培養(yǎng)基冷卻凝固后在潔凈工作臺中接入白囊耙齒菌菌種，在電熱恒溫培養(yǎng)箱中28 ℃避光培養(yǎng)，早晚各通風(fēng)一次。

1.4 原種（作栽培種）制作

培養(yǎng)基配方：二級菌專用枝條90%、輔料木屑7.8%、麥麩2%、白糖0.1%、石膏粉0.1%。

將主料二級菌專用枝條用石灰水浸泡24 h后，與經(jīng)加水?dāng)嚢杈鶆虻哪拘?、麥麩、白糖和石膏粉等輔料充分混合，使其含水量保持在60%～65%，并用白灰（熟石灰，CaO）調(diào)節(jié)pH至8。裝袋時先在16 cm×37 cm×0.004 cm聚乙烯二級菌袋底部鋪上一層輔料，再裝與輔料混合的二級菌專用枝條，最后再鋪一層輔料，裝袋要緊實，裝好后蓋上無棉蓋體，每袋裝干料0.5 kg。

裝好袋的培養(yǎng)基置于高壓滅菌器中121 ℃滅菌120 min，待冷卻后在潔凈工作臺中接入試管中1/10量的白囊耙齒菌母種，在恒溫培養(yǎng)箱中28 ℃避光培養(yǎng)20天，并早晚各通風(fēng)5 min。

1.5 栽培袋制作

培養(yǎng)料配方：雜木屑86.5%、稻糠10%、豆粉2%、石膏粉1%、石灰粉0.5%，含水量60%～65。

原料加水?dāng)嚢杌旌暇鶆颍恳杂檬志o握有水滴落為宜，用裝袋機裝入規(guī)格為17 cm×36 cm、厚0.004 cm的聚乙烯栽培袋中，每袋裝干料0.75 kg，并置于高壓滅菌器中121 ℃滅菌120 min。待冷卻后在潔凈工作臺中接入1根白囊耙齒菌原種枝條，在培養(yǎng)室中避光培養(yǎng)，初期保持溫度在28～30 ℃，控制CO2濃度在0.04%以下，空氣濕度在65%以下。8天后保持溫度在25～30 ℃，培養(yǎng)20～30天長滿菌袋。菌絲長滿后直接進行出菇管理。

1.6 出菇管理

（1）栽培方式。白囊耙齒菌可選用層架栽培或者地擺栽培出菇，本試驗采用層架栽培和地擺栽培相結(jié)合的方式進行，第一潮菇采收之前為溫室層架式栽培，采收后轉(zhuǎn)移到室外大棚地擺式栽培，之后進行第二潮菇出菇管理。

（2）開口方式。將栽培袋在溫室層架擺放5天，待菌絲恢復(fù)潔白時開始開口，準(zhǔn)備出菇。開口方式，立袋出菇設(shè)開“/”口、大“V”口和小“-”口，臥袋出菇設(shè)開大“—”口和敞口，共5種開口方式。每種開口方式100袋，比較子實體產(chǎn)量和商品性狀。開口前使用75%酒精對電動開口機刀頭和壁紙刀進行消毒處理。

①“/”口：用壁紙刀每袋開10個“/”口，分4豎排（2個、3個、2個、3個）分布菌袋側(cè)面。

②大“V”口：用壁紙刀每袋開10個大“V”口，（2個、3個、2個、3個）分布菌袋側(cè)面。

③小“-”口：在菌袋側(cè)面用黑木耳電動開口機開小“-”口，開10豎排，每豎排26個，共260個小“-”口。

④大“—”口：在菌袋頂部用壁紙刀開大“—”口，開2橫排，共2個大“—”口。

⑤敞口：在菌袋頂部用手將袋口打開，敞口。

（3）出菇管理。待開口3天后開口處菌絲恢復(fù)潔白，開始噴水，保持環(huán)境濕度在65%左右，溫度在22～26 ℃。出現(xiàn)原基后加大噴水量，保持環(huán)境濕度在85%左右，待菌袋表面長出2～3 cm大小的白色突起，且長出絨毛狀子實層時進行采收。采收后晾干放在陰涼處保存。

第一潮菇采收后，由于溫室溫度太高，轉(zhuǎn)移到室外大棚地擺，停水3天，待菌絲恢復(fù)潔白后繼續(xù)噴水。為避免高溫期出菇降低子實體產(chǎn)量和商品性，在進入三伏后停水1個月，待溫度適宜后再繼續(xù)澆水，進行第二潮菇出菇管理。

1.7 數(shù)據(jù)測定與分析

每種開口方式取30袋，記錄原基形成、子實體形成、子實體成熟時間和子實體形態(tài)，測兩次采摘的子實體鮮重、干重，取平均值，采用Excel 2017進行數(shù)據(jù)整理，SPSS 25采用鄧肯分析法進行方差分析和差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 子實體形成與成熟時間

5種開口方式子實體形成與成熟時間相差較大，以開口方式⑤最快，從菌袋開口至原基形成、子實體形成、子實體成熟的時間分別為8.00 d、12.67 d和45.67 d，其次是開口方式④和②，三者間原基形成時間無顯著差異，但子實體形成和成熟時間開口方式⑤與④、②之間差異顯著（表1）。開口方式③原基形成、子實體形成和成熟均最遲，比開口方式⑤分別遲5.67 d、8.66 d、10.00 d。5種開口方式按原基形成時間從快到慢排序，依次為⑤＜④＜②＜①＜③，顯示菌袋開口越大，形成原基越早。

表1 不同開口方式白囊耙齒菌子實體形成和成熟時間

表2 5種開口方式栽培的子實體產(chǎn)量

2.2 子實體形態(tài)

菌袋開口處培養(yǎng)料表面形成灰白色小突起，即為白囊耙齒菌原基，5種開口方式白囊耙齒菌均形成原基（圖2），但原基大小不同。5種開口方式按原基從小到大排序，依次為③＜①＜②＜④＜⑤，顯示菌袋開口越大，形成原基越大。

圖2 5種不同開口方式的白囊耙齒菌原基（上）和子實體（下）

5種開口方式栽培白囊耙齒菌子實體形態(tài)有所差異（圖2），其中①、②、④形態(tài)相似，呈聚集狀；⑤呈大朵狀，片大，邊緣有環(huán)帶；③呈散朵狀，根小，易于采摘，不粘連栽培料，且子實體形態(tài)好，商品價值高。

2.3 產(chǎn)量表現(xiàn)

5種開口方式栽培白囊耙齒菌，子實體平均鮮重、干濕比及生物轉(zhuǎn)化率均以開口方式⑤為高，分別為128.54 g/袋、1∶3.36和17.14%。開口方式③平均干重最高，為41.16 g/袋，子實體干濕比為1∶2.86，含水量較低，生物轉(zhuǎn)化率達(dá)15.70%。開口方式①各項指標(biāo)均低，平均干重22.85 g/袋、鮮重56.15 g/袋，生物轉(zhuǎn)化率僅7.49%。生物轉(zhuǎn)化率由高到低，依次為⑤＞④＞③＞②＞①。5種開口方式栽培白囊耙齒菌生物轉(zhuǎn)化率均較低，未能完全轉(zhuǎn)化培養(yǎng)料中的養(yǎng)分。

3 結(jié)論與討論

目前，國內(nèi)外對白囊耙齒菌的人工馴化栽培不同開口方式出菇的研究尚屬空白，國內(nèi)僅報道圖力古爾等[9]人工馴化栽培獲得成功，但未提及產(chǎn)量，采用的是敞口出菇。

本試驗經(jīng)對5種開口方式栽培白囊耙齒菌進行比較，結(jié)果顯示5種開口方式均能形成原基，并獲得成熟子實體，但在原基形成、子實體形成、子實體成熟時間，子實體形態(tài)和產(chǎn)量上均有差異。綜合各項結(jié)果，在日后栽培中可選擇開口方式⑤敞口和開口方式③小“-”口兩種開口方式，小“-”口與敞口的子實體成熟時間相差約10天，這可能與敞口方式開口大，容易接觸外界環(huán)境，致使生長發(fā)育較快有關(guān)。但敞口方式在澆水時易積水，高溫高濕易致雜菌污染率高，要注意控制溫度在26 ℃以下。小“-”口開口小，利于保水保濕，對不良環(huán)境耐受好，雜菌污染率低，可使用電動開口機開口，省時省力。子實體形態(tài)方面，敞口開口方式子實體呈大朵狀，片大，邊緣有環(huán)帶；小“-”口開口方式子實體呈散朵狀，根小、無栽培料粘連，易于采摘，且子實體形態(tài)好，商品價值高；其余3種開口方式①“/”口、②大“V”口和④大“—”口子實體形態(tài)相似，呈聚集狀。

本試驗篩選出白囊耙齒菌人工栽培適宜的出菇開口方式為敞口和小“-”口，為其人工栽培出菇開口方式提供了新的選擇。兩種開口方式產(chǎn)量上相近，但生物轉(zhuǎn)化率都很低，可能原因為白囊耙齒菌生長緩慢，在一個生長周期內(nèi)不能完全轉(zhuǎn)化培養(yǎng)料中的養(yǎng)分，提高生物轉(zhuǎn)化率將是未來白囊耙齒菌栽培的主要研究方向。