張 躍，李 剛，沈光年，吳惠明，周德剛，劉曉冬，王慧強(qiáng)，程敏姮，傅彩霞，杜 鵑，吳 迪，李 蕊，李志軍，趙浩軍

（北京市動物疫病預(yù)防控制中心，北京 102629）

禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病（avian reticuloendotheliosis，RE）是由禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒（reticuloendotheliosis virus，REV）引起雞、火雞、鴨和野禽不同癥狀的綜合征，包括免疫抑制、致死性網(wǎng)狀細(xì)胞瘤、生長抑制綜合征（矮小綜合征）以及淋巴組織和其他組織的慢性腫瘤。REV 多以隱性感染方式存在于臨床健康禽類中，當(dāng)機(jī)體免疫力下降時，REV 便會大量復(fù)制引發(fā)宿主發(fā)病和死亡，這給RE 的預(yù)防與凈化造成了許多困難[1-2]。禽白血?。╝vian leukosis，AL）是由禽白血病病毒（avian leukosis virus，ALV）引起的禽淋巴細(xì)胞白血病、成紅細(xì)胞白血病、髓性細(xì)胞白血病等的多種腫瘤性疫病。ALV 感染可導(dǎo)致雞只生產(chǎn)性能下降，免疫器官萎縮，細(xì)胞免疫、體液免疫應(yīng)答降低，從而導(dǎo)致雞只免疫保護(hù)力低下，易繼發(fā)其他疾病。

REV 和ALV 是嚴(yán)重危害我國養(yǎng)雞業(yè)的病原，既可水平傳播，也可垂直傳播，這給其凈化帶來了一定難度，因此掌握這兩種病原在種雞群中的感染狀況具有重要意義。為了解北京市種雞場REV 和ALV 感染情況，對2021 年從北京市所有種雞場采集的雞血清樣品和蛋液樣品，采用 ELISA 方法進(jìn)行了REV 和ALV 檢測，以期為北京市RE 和AL凈化及防控提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品來源 按照北京市動物疫病監(jiān)測與流行病學(xué)調(diào)查計劃，2021 年對所有種雞場進(jìn)行REV感染抗體檢測以及AL 病原學(xué)檢測，分別在不同季度采樣，采樣時間分別為1 月、4 月、7 月和10 月的上旬。每場每次隨機(jī)采集相同份數(shù)的血清和蛋液樣品。原則上所有種雞場每年檢測1 次，在不同季度采集樣品，存欄量較大的場每年采集2～3 次（不同季度采集），共計采集38 個場次的血清樣品和蛋液樣品各2 660 份，采樣雞群涵蓋祖代和父母代雞群。2021 年北京市共有種雞場27 個，分布在9個區(qū)，各場存欄4 000～316 300 只（表1）。

表1 2021 年北京市各區(qū)種雞場存欄情況

1.1.2 主要試劑 REV 抗體ELISA 檢測試劑盒，IDEXX 公司生產(chǎn)；ALV p27 抗原ELISA 檢測試劑盒，BioCheck 公司生產(chǎn)。

1.1.3 主要儀器 酶標(biāo)儀（SUNRISE），奧地利TECAN 公司生產(chǎn)。

1.2 方法

1.2.1 樣品抽樣 場內(nèi)采用系統(tǒng)隨機(jī)抽樣法，采樣雞群為200～455 日齡。按照估計流行率方法進(jìn)行個體抽樣量計算，設(shè)定預(yù)期流行率5%、置信水平95%、可接受誤差5%，每場每次隨機(jī)采集樣品70 份。

1.2.2 抗體或抗原檢測 對采集的血清，采用ELISA 方法檢測REV 抗體；對采集的蛋液，采用ELISA 方法檢測ALV p27 抗原。試驗(yàn)操作按照試劑盒說明書進(jìn)行。兩種方法的敏感性均為98%，特異性均為100%。雞場中如檢出1 份及以上REV抗體陽性或ALV p27 抗原陽性樣品，則該雞場為RE 或AL 陽性場。

1.2.3 數(shù)據(jù)分析 用 Excel 軟件整理數(shù)據(jù)，采用SPSS 軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，使用卡方檢驗(yàn)或Fisher精確檢驗(yàn)方法進(jìn)行差異性分析，P＜0.05 表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 總體情況

共檢測27 個場的血清樣品和蛋液樣品各2 660 份。統(tǒng)計結(jié)果（表2）顯示：ALV-p27抗原個體表觀陽性率為1.54%，個體真實(shí)陽性率為1.57%（95%CI：1.10%～2.05%），場表觀陽性率為29.63%，場真實(shí)陽性率為 30.23%；REV 感染個體表觀陽性率為33.83%，個體真實(shí)陽性率為34.53%（95%CI：32.72%～36.33%），場表觀陽性率為81.48%，場真實(shí)陽性率為83.14%。

表2 北京市種雞場REV 感染抗體和ALV-p27 抗原檢測結(jié)果統(tǒng)計

2.2 地區(qū)分布

由表3 可知，5 個區(qū)8 個場檢出ALV-p27 抗原，其中區(qū)2 個體陽性率最高（3.57%），與其他4 個陽性區(qū)差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），而其他4個陽性區(qū)之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；9個區(qū)22 個場檢出REV 感染抗體陽性個體，其中區(qū)1（98.57%）、區(qū)6（90.00%）個體陽性率較高，與其他區(qū)差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），區(qū)2、5、7、8 之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），其他區(qū)之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。各區(qū)ALV-p27 抗原和REV 感染抗體場陽性率之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

表3 北京市不同區(qū)種雞場REV 感染抗體和ALV-p27 抗原檢測結(jié)果 單位：%

2.3 時間分布

由表4 可知，4 個季度均檢測出ALV-p27 抗原陽性個體，其中第三季度個體陽性率最高（4.86%），與其他季度間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），而其他3 個季度之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。除第四季度未檢出REV 感染抗體陽性個體外，其他3 個季度均有檢出，且個體陽性率差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），其中第二季度個體陽性率最高（85.40%）。

表4 北京市不同季度種雞場REV 感染抗體和ALV-p27 抗原檢測結(jié)果 單位：%

2.4 群間分布

由表5 可知，祖代雞群和父母代雞群均檢出ALV-p27 抗原和REV 感染抗體陽性個體，且個體陽性率差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），其中祖代雞群ALV-p27抗原個體陽性率高于父母代雞群，父母代雞群REV 感染抗體個體陽性率高于祖代雞群。

表5 北京市不同代次種雞場REV 感染抗體和ALV-p27 抗原檢測結(jié)果 單位：%

3 討論

目前REV 疫苗研發(fā)尚處于實(shí)驗(yàn)室階段[3]，還未有商品化疫苗，因此本試驗(yàn)所測抗體均為REV感染抗體。本次監(jiān)測結(jié)果顯示：2021 年北京市種雞場REV 感染抗體個體陽性率為33.83%，9 個區(qū)均檢出REV 感染抗體，祖代群與父母代群感染抗體個體陽性率差異顯著（P＜0.05）；除第四季度未檢出外，其他3 個季度均有REV 感染被檢出。上述結(jié)果表明北京市REV 感染普遍，分布廣泛。從監(jiān)測結(jié)果可以看出，北京市種雞場的REV 個體感染率低于徐佳等[4]報道的黑龍江省部分種雞場2018 年（34.19%）和2019 年（40.38%）的個體陽性率，以及李珂等[5]報道的云南省個體陽性率（72.77%），但高于李玉杰等[6]報道的山東省8個種雞場REV 抗體陽性率（1.65%），說明北京市REV 感染較嚴(yán)重。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，由于REV 感染引起的癥狀不明顯，因此大部分種雞場對REV 感染重視程度不足，尚有部分場未開展監(jiān)測凈化工作，且防疫工作不到位，未制定科學(xué)的消毒程序，造成了該病的垂直及水平傳播。本次監(jiān)測發(fā)現(xiàn)第二季度REV 個體陽性率較高，采樣時間為4 月初，提示春季可能是RE 的多發(fā)季節(jié)。本次監(jiān)測發(fā)現(xiàn)，祖代種雞場場REV 感染率低于父母代場，這可能是因?yàn)榇蟛糠肿娲鷪鲩_展了REV 抗體抽檢工作，及時淘汰了陽性雞只。但還有部分祖代場和父母代場未開展REV 監(jiān)測凈化工作，且由于帶毒母雞可將REV 垂直傳播給雛雞，造成雛雞感染，因此種雞場應(yīng)制定適合本場的凈化方案，開展檢測凈化工作，及時淘汰檢出的陽性個體，同時完善種雞場的綜合疫病防控措施。

監(jiān)測結(jié)果顯示，北京市種雞場的ALV-p27 抗原個體陽性率為1.54%，場陽性率為29.63%。該結(jié)果低于王倩等[7]報道的安徽省部分禽場2017—2019 年ALV p27 抗原陽性率（5.9%）和場陽性率（60.0%以上），以及趙勝杰等[8]報道的河南省種雞場ALV p27 抗原個體陽性率（7.61%），但高于邢林林等[9]等報道的2020 年山東省ALV p27 抗原陽性率（0.10%）和場陽性率（20.00%）。目前針對AL 仍無切實(shí)可行的治療方法，也無有效疫苗，唯一有效的控制方法就是凈化。北京市一直要求種雞場開展AL 監(jiān)測凈化工作，但從監(jiān)測結(jié)果看整體凈化效果不佳，場陽性率由2018 年的11.90%增加到29.63%，個體陽性率由0.63%增加到1.54%，且仍有5 個區(qū)的種雞場存在AL 流行，因此應(yīng)進(jìn)一步加強(qiáng)種雞場的AL 凈化工作，尤其是祖代種雞場。

本次監(jiān)測抽樣有一定的局限性。從監(jiān)測結(jié)果來看，REV 抗體個體陽性率相對較高，這可能與在抽樣設(shè)計時用預(yù)期流行率5%、可接受誤差5%計算樣品量，導(dǎo)致每次每場抽取的樣品數(shù)量較少有關(guān)。另外，各場每年采樣的季度不同，也會導(dǎo)致檢測結(jié)果不能真實(shí)反映全年的流行情況。今后繼續(xù)開展監(jiān)測時，可將設(shè)定的預(yù)期流行率提高，以增加抽樣數(shù)量，同時每年各場的采樣時間盡量統(tǒng)一，以使監(jiān)測結(jié)果更具代表性。另外，本次監(jiān)測只采集了200 日齡以上的成年雞樣品，未采集雛雞和育成雞樣品，因而REV 和ALV 在這部分雞群中的流行情況不清，有待于進(jìn)一步監(jiān)測。

由于RE 和AL 均為免疫抑制病[10-11]，可引起機(jī)體免疫系統(tǒng)受損，免疫功能下降，繼而造成其他病原的易感性增強(qiáng)及疫苗免疫失敗，給養(yǎng)雞場造成更嚴(yán)重?fù)p失，因此養(yǎng)殖場應(yīng)高度重視對這兩種疫病的防控，積極推進(jìn)其凈化工作，及時淘汰陽性雞只，同時加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，制定科學(xué)的消毒程序，降低流行率，逐步實(shí)現(xiàn)種群凈化目標(biāo)。

4 結(jié)論

監(jiān)測發(fā)現(xiàn)，北京市種雞場REV 和ALV 感染較為普遍，病原分布廣泛，說明北京市種雞場這兩種免疫抑制病的凈化效果不佳，存在傳播風(fēng)險。因此，北京市各種雞場應(yīng)高度重視這兩種疫病的監(jiān)測和綜合防控，加快推進(jìn)其種群凈化工作。