張雪影,李莉婭,蒲婧哲,張亞中,

(1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,安徽 合肥 230012;2.安徽省食品藥品檢驗(yàn)研究院,安徽 合肥 230051)

中藥川貝母為百合科貝母屬植物川貝母(卷葉貝母)FritillariacirrhosaD.Don、暗紫貝母F.unibracteataHsiao et K.C.Hsia、甘肅貝母F.przewalskiiMaxim.、梭砂貝母F.delavayiFranch.、太白貝母F.taipaiensisP.Y.Li或瓦布貝母F.unibracteataHsiao et K.C.Hsia var wabuensis(S.Y.Tang et S.C.Yue)Z.D.Liu,S.Wang et S.C.Chen的干燥鱗莖。按性狀不同分別習(xí)稱(chēng)“松貝”“青貝”“爐貝”和“栽培品”。川貝母具有清熱潤(rùn)肺、化痰止咳、散結(jié)消癰的功效,主要用于治療肺熱燥咳、干咳少痰等癥[1],主產(chǎn)于海拔3 000～4 000 m的四川甘孜、阿壩州以及與青海、甘肅、西藏交界地區(qū)[2]。

由于其特殊的生長(zhǎng)環(huán)境,加之種子休眠期長(zhǎng)、自然萌發(fā)率低、野生資源過(guò)度采挖等原因,正品川貝母資源匱乏、價(jià)格昂貴,難以滿(mǎn)足臨床需求[3]。因此,市場(chǎng)上出現(xiàn)了以市售價(jià)格低廉的伊貝母(FritillariapallidifloraSchrenk)、平貝母(FritillariaussuriensisMaxim)、浙貝母(Fritillariathunbergii)、湖北貝母(FritillariaeHupehensisBulbus)等摻雜或冒充川貝母進(jìn)行銷(xiāo)售的現(xiàn)象,這不僅進(jìn)一步加劇了川貝母藥用混亂的情況,也導(dǎo)致其臨床效果得不到保障[4]。本研究從傳統(tǒng)的性狀、顯微鑒別兩方面將川貝母與常見(jiàn)的易混品進(jìn)行初步區(qū)分。性狀鑒別將根據(jù)藥材的大小、形態(tài)、顏色、質(zhì)地、斷面、氣味等特征進(jìn)行區(qū)分[1,5-6]。顯微鑒別則是根據(jù)藥材淀粉粒的形狀、大小,臍點(diǎn)的形狀、位置,層紋的有無(wú)、形狀,導(dǎo)管的類(lèi)型和直徑等特征進(jìn)行區(qū)分[7-10]。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 α6 Sony相機(jī):日本索尼有限公司;直尺:浙江得力集團(tuán)有限公司;DM4B Leica顯微鏡:德國(guó)徠卡顯微鏡公司。

1.2 試藥 水合氯醛(批號(hào)20200320,分析醇)、丙三醇(批號(hào)20201012,分析醇):國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;載玻片(25 mm×75 mm)、蓋玻片(24 mm×24 mm):江蘇世泰實(shí)驗(yàn)器材有限公司。樣品采集信息見(jiàn)表1,經(jīng)鑒定均為正品。

表1 不同品種貝母的性狀、顯微鑒別、樣品采集信息

2 方法

2.1 性狀鑒別方法 參照《中華人民共和國(guó)藥典》2020年版四部通則0212[1],采用性狀觀(guān)察與測(cè)定,對(duì)收集到的川貝母及其市場(chǎng)易混品藥材樣品,通過(guò)感官記錄藥材的形狀、表面(色澤與質(zhì)地)、氣味等。使用直尺測(cè)量長(zhǎng)度、直徑,相機(jī)拍照進(jìn)行記錄。

2.2 顯微鑒別方法 粉末制片:取干燥藥材粉末,參照《中華人民共和國(guó)藥典》2020年版四部通則2001的顯微鑒別法[1],用顯微鏡對(duì)其組織、細(xì)胞或內(nèi)含物等特征進(jìn)行鑒別。水裝片(主要觀(guān)察淀粉粒):取樣品粉末適量,置于載玻片上,滴加超純水,加蓋蓋玻片,置于顯微鏡下觀(guān)察,調(diào)整放大倍數(shù),拍照并記錄。水合氯醛裝片(主要觀(guān)察導(dǎo)管),取藥材樣品粉末適量,置于載玻片上,滴加水合氯醛溶液,置于酒精燈上加熱,重復(fù)此步驟2～3次,放冷,滴加稀甘油,加蓋蓋玻片,置于顯微鏡下觀(guān)察,調(diào)整放大倍數(shù),拍照并記錄。

3 結(jié)果

3.1 性狀鑒別結(jié)果 對(duì)收集到的川貝母及其市場(chǎng)常見(jiàn)易混品進(jìn)行拍照記錄,比較其性狀存在的差異。見(jiàn)圖1和表2。

注:A.松貝;B.青貝;C.爐貝;D.新疆貝母;E.伊犁貝母;F.平貝母;G.浙貝母;H.湖北貝母;圖中標(biāo)尺示1 cm

表2 不同種類(lèi)貝母藥材性狀鑒別

3.1.1 川貝母 松貝多呈類(lèi)圓錐形或近球形,直徑為0.3～1.0 cm,表面類(lèi)白色;外層肉質(zhì)鱗葉2片,大小懸殊,大片緊抱小片,未抱合部分呈新月?tīng)?俗稱(chēng)“懷中抱月”;頂端閉合,先端稍尖,底部平,微凹;氣微,味微甘、微苦。

青貝多呈類(lèi)扁球形,直徑為0.4～1.6 cm,表面類(lèi)白色;外層2片肉質(zhì)鱗莖,大小相近,相對(duì)抱合;頂部開(kāi)裂,裂口稍大,底部較平,微凹;氣微,味微甘、微苦。

爐貝多呈長(zhǎng)圓錐形,直徑為0.5～2.5 cm,表面類(lèi)白色、淺棕黃色或間有棕色斑紋,俗稱(chēng)“虎皮斑”;外層鱗葉2片,大小相近;頂部開(kāi)裂而略尖,俗稱(chēng)“馬牙嘴”,底部稍尖或稍鈍;氣微,味微甘、微苦。

3.1.2 伊貝母 新疆貝母多呈扁球形,直徑為0.5～1.5 cm,表面類(lèi)白色;外層2片肥厚的肉質(zhì)鱗葉呈月牙形,大小相近而緊靠;頂端平展而開(kāi)裂,裂口小,底部圓鈍;氣微,味微苦。伊犁貝母多呈圓錐形或橢球形,個(gè)體較大,表面淺黃棕色,稍粗糙;外層兩片肥大的肉質(zhì)鱗片呈心形,一片較大或近等大,抱合;頂端稍尖,少有開(kāi)裂,底部微凹;氣微,味苦。

3.1.3 平貝母 平貝母多呈扁球形或圓錐形(小平貝),直徑為0.5～2 cm,表面類(lèi)白色至黃白色;外層2片肉質(zhì)鱗葉肥厚,大小相近或一片稍大,抱合;頂端略平、稍開(kāi)裂,底部較平,不突出;氣微,味苦。

3.1.4 浙貝母 浙貝母(珠貝)多呈扁球形,直徑為0.6～1.2 cm,表面類(lèi)白色或淡黃色;外層兩片鱗葉肥厚似腎形,一片稍大,相互抱合;頂端不開(kāi)裂,稍尖或鈍圓,底部較平,不突出;氣微,味苦。

3.1.5 湖北貝母 湖北貝母多呈扁圓球形,大小為0.8～3.5 cm,表面淺棕色至黃棕色;外層2片肉質(zhì)鱗葉肥厚略呈腎形,或大小懸殊,大片緊抱小片;頂端閉合或開(kāi)裂,底部凹陷呈窩狀;氣微,味苦。不同種類(lèi)貝母藥材性狀主要鑒別點(diǎn)見(jiàn)表2。

3.2 顯微鑒別結(jié)果 對(duì)收集到的貝母藥材樣品進(jìn)行打粉、制片,觀(guān)察并比較不同種類(lèi)貝母的淀粉粒和導(dǎo)管的差異。見(jiàn)圖2、表3。

圖2 川貝母及其市場(chǎng)易混品顯微特征

表3 川貝母及其市場(chǎng)易混品顯微特征鑒別區(qū)分

3.2.1 川貝母 暗紫貝母粉末類(lèi)白色,淀粉粒極多,多為單粒,三角狀卵形、類(lèi)圓形、燈泡形、橢圓形或長(zhǎng)橢圓形,邊緣較平整、略不平或有尖突,直徑4～64 μm;臍點(diǎn)明顯,線(xiàn)條較粗,大多位于較小端,形如點(diǎn)狀、短縫狀、“人”字狀或馬蹄狀;紋隱約可見(jiàn)。導(dǎo)管為螺紋或環(huán)紋—螺紋,直徑10～55 μm。

甘肅貝母粉末類(lèi)白色。淀粉粒極多,多單粒,類(lèi)圓形、廣卵形或燈泡形,邊緣較平整,少數(shù)邊緣為凹凸或一邊稍隆起,直徑4～56 μm;臍點(diǎn)明顯,線(xiàn)條較粗,多位于近小端多近中央,形如點(diǎn)狀、短縫狀、“人”字狀或馬蹄狀;層紋隱約可見(jiàn),有的較明顯。螺紋或環(huán)紋—螺紋導(dǎo)管,直徑10～45 μm。

卷葉貝母粉末類(lèi)白色。淀粉粒極多,多為單粒,圓形、橢圓形或類(lèi)貝殼形,形狀較均一,邊緣較平整,直徑5～56 μm。臍點(diǎn)大多不明顯,少數(shù)可見(jiàn),線(xiàn)條較細(xì),位于較小端,形如點(diǎn)狀、短縫狀或馬蹄狀;層紋清晰,較粗。螺紋導(dǎo)管直徑6～67 μm。

梭砂貝母粉末淺黃色。淀粉粒極多,單粒類(lèi),圓形、廣卵形、燈泡形,邊緣較平滑或略凹凸不平,直徑5～76 μm;臍點(diǎn)明顯,線(xiàn)條較粗,多位于較小端,少數(shù)位于較大端或中央形如“人”字狀、短縫狀、弧線(xiàn)狀、馬蹄狀、星狀或“大”字狀;層紋隱約可見(jiàn),少數(shù)明顯。螺紋導(dǎo)管直徑50 μm。

3.2.2 伊貝母 新疆貝母粉末類(lèi)白色。淀粉粒極多,多單粒,類(lèi)圓形、廣卵形或類(lèi)貝殼形,邊緣多數(shù)較平滑,有的小端較尖。直徑5～66 μm;臍點(diǎn)小,大多不明顯,線(xiàn)條極細(xì),位于較小端或近中央,形如點(diǎn)狀、短線(xiàn)狀、馬蹄狀或“人”字狀;層紋明顯。螺紋導(dǎo)管直徑約18 μm。

伊犁貝母粉末淡黃色。淀粉粒極多,多單粒,廣卵形、燈泡形、三角卵狀、貝殼形,邊緣較平滑或稍凹凸不平,有的較小端稍尖,直徑6～70 μm;臍點(diǎn)不甚明顯,線(xiàn)條較細(xì),多位于較小端,少數(shù)位于中央,形如點(diǎn)狀、“人”字狀、馬蹄狀或“十”字狀;層紋較明顯,有的深淺不一。螺紋導(dǎo)管直徑約50 μm。

3.2.3 平貝母 平貝母粉末類(lèi)白色。淀粉粒極多,多單粒,類(lèi)圓形、廣卵形、燈泡形或類(lèi)扇形,邊緣多數(shù)較平滑,直徑6～77 μm;臍點(diǎn)大多明顯,線(xiàn)條較細(xì),多位于較小端,偶有位于較大端或近中央,形如點(diǎn)狀、短縫狀、“人”字狀、馬蹄狀或“十”字狀;層紋明顯,較細(xì)密。螺紋導(dǎo)管直徑約25 μm。

3.2.4 浙貝母 浙貝母粉末淡黃白色。淀粉粒極多,多單粒,廣卵形、長(zhǎng)卵形、類(lèi)圓形、燈泡狀、類(lèi)貝殼形,邊緣多平整,直徑5～66 μm;臍點(diǎn)隱約可見(jiàn),線(xiàn)條較細(xì),位于較小端,形如點(diǎn)狀、短縫狀、“人”字狀或馬蹄狀;層紋明顯且細(xì)密,有的深淺不一。螺紋導(dǎo)管居多,直徑約18 μm。

3.2.5 湖北貝母 湖北貝母粉末淡棕黃色。淀粉粒極多,多單粒,廣卵形、類(lèi)圓形或圓貝殼形,形狀較均一,邊緣平整,直徑4～60 μm;臍點(diǎn)隱約可見(jiàn),線(xiàn)條極細(xì),位于較小端,有的明顯,短縫狀、點(diǎn)狀、“人”字狀或馬蹄狀;層紋明顯。螺紋或環(huán)紋—螺紋導(dǎo)管直徑5～36 μm。

4 討論

2010年版、2015年版和2020年版《中華人民共和國(guó)藥典》雖按性狀將川貝母分為松貝、青貝、爐貝和栽培品,但經(jīng)實(shí)地中藥材市場(chǎng)調(diào)研發(fā)現(xiàn),川貝母市場(chǎng)規(guī)格等級(jí)分類(lèi)主要為松貝、青貝、爐貝。因此,關(guān)于川貝母及其市場(chǎng)常見(jiàn)混偽品的性狀鑒別,主要為川貝母(松貝、青貝、爐貝)與伊貝母、平貝母、浙貝母、湖北貝母之間的性狀鑒別。通過(guò)性狀對(duì)比結(jié)果可知,川貝母與伊貝母、平貝母、浙貝母、湖北貝母之間具有一定的差異,可以此作為鑒別川貝母與其他種類(lèi)貝母的參考依據(jù)。

然而,經(jīng)實(shí)地考察及網(wǎng)絡(luò)搜索發(fā)現(xiàn),市場(chǎng)存在用小平貝、小浙貝冒充松貝或摻偽松貝,新疆貝母摻偽青貝,伊犁貝母摻偽爐貝進(jìn)行銷(xiāo)售的情況。因此,單憑性狀對(duì)不同種類(lèi)貝母進(jìn)行鑒別,需要操作者有非常熟練的專(zhuān)業(yè)知識(shí)和經(jīng)驗(yàn)。另外,性狀鑒別多適用于外觀(guān)形狀比較完整的不同種類(lèi)貝母之間的鑒別。隨著不同種類(lèi)貝母的栽培品涌入市場(chǎng),人工干預(yù)下生長(zhǎng)的貝母與傳統(tǒng)野生的貝母在外觀(guān)形狀上勢(shì)必會(huì)發(fā)生一定的變化,也增加了性狀鑒別的難度,導(dǎo)致市場(chǎng)上貝母類(lèi)藥材性狀的多樣性以及臨床用藥的混亂。

由顯微實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知:暗紫貝母、甘肅貝母、梭砂貝母臍點(diǎn)大多明顯,較大,顏色較深,臍點(diǎn)線(xiàn)條雜亂不規(guī)整;卷葉貝母和伊犁貝母臍點(diǎn)稍不明顯;湖北貝母、浙貝母及平貝母臍點(diǎn)大多不明顯;新疆貝母臍點(diǎn)極不明顯。平貝母、浙貝母、湖北貝母、伊犁貝母層紋明顯,且尤以平貝母和浙貝母層紋較為細(xì)密;新疆貝母層紋較明顯,深淺不一;川貝母類(lèi)層紋不明顯。9種貝母的導(dǎo)管類(lèi)型均為螺紋或螺紋—環(huán)紋,其中以浙貝母、平貝母導(dǎo)管直徑較小,伊犁貝母、湖北貝母次之,其余直徑大小相當(dāng)。

通過(guò)顯微實(shí)驗(yàn)觀(guān)察到的淀粉粒的形狀、邊緣形態(tài),臍點(diǎn)的大小、明顯與否,層紋的明顯程度以及螺紋或螺紋—環(huán)紋導(dǎo)管的大小,可將川貝母類(lèi)與伊貝母、平貝母、浙貝母、湖北貝母等不同種類(lèi)的貝母進(jìn)行初步鑒別。然而顯微實(shí)驗(yàn)僅能鑒別單一貝母品種的粉末,對(duì)于兩種或多種品種貝母粉末摻雜的情況不能予以準(zhǔn)確鑒別區(qū)分。

因此,除性狀鑒別、顯微鑒別外,還應(yīng)借助更為準(zhǔn)確、精密的儀器與其他鑒別手段相結(jié)合才能更準(zhǔn)確無(wú)誤地鑒別川貝母及其市場(chǎng)混偽品。