張武崗，郎一帆，姚 云，楊武亮，楊世林，陳海芳*，馮育林*

1. 江西中醫(yī)藥大學(xué) 中藥固體制劑制造技術(shù)國家工程研究中心，江西 南昌 330004

2. 江西中醫(yī)藥大學(xué) 現(xiàn)代中藥制劑教育部重點實驗室，江西 南昌 330004

寬筋藤（譯名勒哲）為防已科植物中華青牛膽Tinosporasinensis(Lour.) Merr.的干燥莖藤，收載于《藏藥標(biāo)準(zhǔn)》，具有舒筋活絡(luò)、祛風(fēng)止痛等功效，常用于治療跌打損傷、風(fēng)濕痹痛等[1]。現(xiàn)代臨床研究表明，寬筋藤對風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎具有良好的治療效果[2-4]，生物堿是其主要的抗炎活性成分，小檗堿[5-6]、藥根堿[7]等能夠明顯改善大鼠類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎癥狀。但是，目前對寬筋藤中生物堿類成分的報道僅有非洲防己堿、藥根堿、四氫巴馬汀、小檗堿、巴馬汀等[8-13]，未有全面分析，為探尋寬筋藤中更多治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的生物堿類成分，本研究采用UPLC-Q-TOFMS/MS 技術(shù)分析寬筋藤中生物堿類成分，為寬筋藤的后續(xù)研究開發(fā)提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器與設(shè)備

Tripie TOF 5600 Plus 型高分辨質(zhì)譜儀、Analyst TF1.6、peakview 1.2 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)（美國Sciex 公司）；LC-30A 型超高效液相色譜儀，包括LC-30AD高壓輸液泵、CBM-20A 系統(tǒng)控制器、SIL-30AC 自動進(jìn)樣器、DUG-20A5 在線脫氣機(jī)、CTO-30A 柱溫箱（日本島津公司）。

1.2 材料與試劑

寬筋藤（批號20150329）購自成都荷花中藥材專業(yè)市場，經(jīng)江西中醫(yī)藥大學(xué)徐艷琴教授鑒定為防己科植物中華青牛膽T.sinensis(Lour.)Merr.的干燥莖藤。甲醇、乙腈（色譜純）購自美國Thermo Fisher Scientific 公司；蒸餾水由屈臣氏集團(tuán)提供；其余試劑為分析純。對照品小檗堿（批號19072501）、巴馬汀（批號19022604）、四氫巴馬汀（批號16032710）、黃柏堿（批號17112110）、木蘭花堿（批號18071701）、木蘭箭毒堿（批號20092304），以上對照品質(zhì)量分?jǐn)?shù)均大于98%，購自成都曼斯特生物科技公司；鹽酸、三氯甲烷、濃氨水、無水乙醇均為分析級，購自成都科隆化學(xué)品有限公司；地塞米松（批號C100916501）購自上海麥克林生化科技有限公司；脂多糖（批號017M4112V）購自美國Sigma 公司；胎牛血清（FBS，批號233473CP）、DEME 培養(yǎng)基（批號L110KJ）購自美國Gibco 公司；一氧化氮檢測試劑盒（批號20220312）購自南京建成生物工程研究所。

2 方法

2.1 對照品溶液的制備

分別精密稱定各對照品適量，用甲醇溶解制備對照品儲備液。精密吸取各對照品儲備液適量，于10 mL 量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，得小檗堿、巴馬汀、四氫巴馬汀、黃柏堿、木蘭花堿、木蘭箭毒堿質(zhì)量濃度分別為45.76、19.31、31.23、26.18、25.76 μg/mL 的混合對照品溶液。

2.2 供試品溶液的制備

將寬筋藤藥材30 g 置于圓底燒瓶中，加入10倍（300 mL）70%乙醇，加熱回流提取2 次，每次1 h，合并提取液，減壓濃縮得到1.92 g 浸膏。取浸膏加20 mL 2%鹽酸水溶液，攪碎攪拌，放置4 h，濾過，濾液加濃氨水調(diào)PH 至9～10，氯仿萃取，回收氯仿，得寬筋藤生物堿0.12 g。

2.3 液相色譜條件

采用Waters UPLC C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm)，流動相為0.1%甲酸水（A）-乙腈（B）；梯度洗脫：0.01～5 min，5%～8% B；5～20 min，8%～15% B；20～25 min，15%～30% B；25～38 min，30%～95% B；38～38.01 min，95%～5% B；38.01～40 min，5% B。體積流量0.3 mL/min，柱溫30 ℃，進(jìn)樣量5 μL。

2.4 質(zhì)譜條件

使用電噴霧離子源（ESI），正離子模式，質(zhì)量掃描范圍為m/z100～1250；噴霧電壓4500 V；離子化溫度500 ℃；碰撞能量35 eV；氣簾氣206.85 kPa；霧化器和輔助氣均為344.75 kPa；去簇電壓100 V；數(shù)據(jù)采集時間40 min。

2.5 數(shù)據(jù)處理

采用AB Sciex 公司的軟件PeakView 1.6 中的XIC Manager、Mass Calculators 和Formula Finder功能，對UPLC-Q-TOF-MS/MS 采集的數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。

2.6 抗炎活性研究

2.6.1 細(xì)胞活力實驗 采用CCK-8 法檢測寬筋藤生物堿對RAW264.7 細(xì)胞的毒性。取對數(shù)生長期的RAW264.7 細(xì)胞用含10% FBS 培養(yǎng)液的DMEM 培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞密度至1×104個/mL，接種于96 孔板中，將含不同藥物濃度寬筋藤生物堿的細(xì)胞培養(yǎng)液以100 μL/孔加入96 孔板中，另設(shè)對照組中加入無藥物的細(xì)胞培養(yǎng)液，每組6 個復(fù)孔。于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)24 h 后，棄去上清液加入10%的CCK-8 溶液，每孔100 μL，于酶標(biāo)儀450 nm 處測定吸光度（A）值，計算細(xì)胞存活率。

2.6.2 抗炎活性檢測 采用Griess 法測定寬筋藤生物堿對脂多糖誘導(dǎo)的RAW264.7 細(xì)胞產(chǎn)生一氧化氮的抑制作用。取對數(shù)生長期的RAW264.7 細(xì)胞接種于96 孔板中（5×104個/孔），37 ℃、5% CO2條件下培養(yǎng)24 h，棄去舊培養(yǎng)基，給藥組分別加入100 μL 寬筋藤生物堿（15.63、31.25、62.50、125.00 μg/mL）的DMEM 培養(yǎng)基，同時設(shè)置對照組（僅培養(yǎng)液）、模型組（僅培養(yǎng)液）和地塞米松（40 μmol/L 地塞米松＋培養(yǎng)液）組，培養(yǎng)1 h 后，除對照組外，其余各組加入100 μL 的脂多糖（1 μg/mL）溶液，繼續(xù)培養(yǎng)24 h 后，每孔吸取50 μL 上清液于新的96 孔板中，先后加入Griess I 液50 μL 與Griess II 液50 μL，用酶標(biāo)儀在540 nm 處測其A值，計算一氧化氮抑制率。

3 結(jié)果

3.1 生物堿成分的分析鑒別

為便于對寬筋藤生物堿的化學(xué)成分進(jìn)行分析，首先從CNKI、GoogleScholar、scifinder 等數(shù)據(jù)庫中檢索寬筋藤化學(xué)成分，再通過 chemspider、chembook、massbank、Pubmed 數(shù)據(jù)庫等獲取對應(yīng)成分的化學(xué)成分信息，包括化合物的名稱、分子式、相對分子質(zhì)量等信息，以此建立寬筋藤的生物堿化合物數(shù)據(jù)庫。在此基礎(chǔ)上，通過 UPLC-QTOF-MS/MS 正離子模式共檢測出89 個化合物，鑒定出73 個生物堿，見表1，包括12 個原小檗堿型生物堿、23 個四氫原小檗堿型生物堿、20 個芐基異喹啉類生物堿、9 個阿樸啡類生物堿、9 個其他類生物堿。寬筋藤提取液基峰圖（BPI）如圖1所示。

表1 寬筋藤生物堿成分鑒定結(jié)果Table 1 Results of identification of alkaloid constituents of Tinospora sinensis

續(xù)表1

續(xù)表1

圖1 正離子模式下寬筋藤提取物的基峰圖Fig. 1 BPI chromatogram of the Tinospora sinensis extracts in positive mode

3.2 原小檗堿類生物堿

原小檗堿類生物堿由于碳碳單鍵的存在，使母核很容易失去2 個氫而形成穩(wěn)定的大π 共軛系統(tǒng)，所以原小檗堿類生物堿的母核一般不會發(fā)生裂解，主要碎片離子是由小分子取代基的掉落形成，很少存在低于m/z230 的產(chǎn)物離子。當(dāng)取代基包含2 個或多個甲氧基時，特征碎片離子為 [M－CH4]+、[M－CH3]+和 [M－2CH3]+，如小檗堿和巴馬汀。結(jié)合碎片離子及文獻(xiàn)，共鑒定出原小檗堿類生物堿共12 個，分別為化合物26、55、60、62、64、70、73、77、79、80、82 和83。

化合物55 為小檗堿，分子式為C20H18NO4，在正離子模式下，準(zhǔn)分子離子峰為m/z336.123 8 [M]+。小檗堿含有鄰二甲氧基，產(chǎn)生了特征碎片離子m/z321.099 6 [M－CH3]+、320.091 6 [M－CH4]+、306.077 6 [M－2CH3]+，在二級質(zhì)譜中還可以觀察到由m/z320.091 6 [M－CH4]+相繼失去CO 和CH3產(chǎn)生的碎片離子m/z292.096 2 [M－CH4－CO]+、277.074 1 [M－CH4－CO－CH3]+和249.078 5 [MCH4－2CO－CH3]+。其裂解途徑見圖2。

圖2 小檗堿的MS/MS 圖與裂解途徑Fig. 2 MS/MS spectrogram and fragmentation pathway of berberine

化合物80 為巴馬汀，分子式為C21H22NO4，在正離子模式下，準(zhǔn)分子離子峰為m/z352.153 9[M]+。在二級質(zhì)譜中，可以觀察到特征碎片離子m/z336.122 8 [M－CH4]+，以及由碎片離子m/z336.122 8 [M－CH4]+相繼失去CO 和CH4的碎片離子m/z308.128 3 [M－CH4－CO]+、292.097 4 [M－2CH4－CO]+。其裂解途徑見圖3。

圖3 巴馬丁的MS/MS 圖與裂解途徑Fig. 3 MS/MS spectrogram and fragmentation pathway of palmatine

化合物70 和73：化合物70，在正離子模式下，準(zhǔn)分子離子峰為m/z338.138 0 [M]+，分子式為C20H20NO4。在二級質(zhì)譜中，可以觀察到特征碎片離子m/z323.115 6 [M－CH3]+和m/z322.107 4 [MCH4]+，表明該化合物取代基包含2 個或多個甲氧基。同樣可以觀察到丟失了CH3和CH4的碎片離子m/z307.084 9 [M－CH4－CH3]+以及丟失了CH4、CH3和CO 的碎片離子m/z279.089 3 [M－CH4－CH3－CO]+，結(jié)合文獻(xiàn)報道[18,21,24,26,29]推測化合物70 為非洲防己堿，可能的裂解途徑見圖4?；衔?3 的二級碎片為m/z338.138 1, 323.115 7, 322.107 1, 307.084 3, 294.112 2, 279.089 0, 250.086 4，其二級碎片信息與非洲防己堿的二級碎片相同，失去了一系列的CH4、CH3和CO。根據(jù)參考文獻(xiàn)及此類化合物的裂解規(guī)律，推測化合物73 為藥根堿。

圖4 非洲防己堿的MS/MS 圖與裂解途徑Fig. 4 MS/MS spectrogram and fragmentation pathway of columbamine

3.3 四氫原小檗堿類生物堿

該類生物堿與原小檗堿類生物堿類似，但無剛性C 環(huán)結(jié)構(gòu)，在質(zhì)譜中易發(fā)生RDA 裂解并繼續(xù)丟失一些取代基，很少存在質(zhì)荷比高于m/z200 的碎片離子。RDA 裂解產(chǎn)生高峰度的含氮碎片可作為四氫小檗堿型生物堿的特征碎片，特征碎片離子與取代基的位置和類型有關(guān)。當(dāng)在同一環(huán)上分別具有2個甲氧基、亞甲二氧基、1 個甲氧基和1 個羥基時，特征碎片離子分別為m/z192、176、178，如四氫巴馬汀和黃柏堿。結(jié)合碎片離子及文獻(xiàn)，共鑒定出四氫原小檗堿類生物堿23 個，分別為化合物9、10、18、21～23、25、30、31、37、38、41、42、44、49、51、53、56、57、65、67、68 和71。

化合物67 為四氫巴馬汀，分子式為C21H25NO4，在正離子模式下，準(zhǔn)分子離子峰為m/z356.185 6[M＋H]+。四氫巴馬汀在同一環(huán)上含有2 個甲氧基，會產(chǎn)生峰度較高的特征碎片離子m/z192.101 5 [MC10H12O2]+，在二級質(zhì)譜中還可以觀察到由碎片離子m/z192.1014 5 [M－C10H12O2]+丟失CH3后的碎片離子m/z177.078 1 [M－C10H12O2－CH3]+。其裂解途徑見圖5。

化合物38 為黃柏堿，分子式為C20H24NO4，在正離子模式下，準(zhǔn)分子離子峰為m/z342.169 9 [M]+。黃柏堿在同一環(huán)上含有2 個甲氧基，會產(chǎn)生峰度較高的特征碎片離子m/z192.102 5 [M－C9H10O2]+，在二級質(zhì)譜中還可以觀測到由碎片離子m/z192.102 5[M－C9H10O2]+相繼失去CH2和CH3的碎片離子m/z178.086 1 [M－C9H10O2－CH2]+和碎片離子m/z163.063 0 [M－C9H10O2－CH2－CH3]+。其裂解途徑見圖6。

圖6 黃柏堿的MS/MS 圖與裂解途徑Fig. 6 MS/MS spectrogram and fragmentation pathway of phellodendrine

化合物23 和44：化合物23，在正離子模式下，準(zhǔn)分子離子峰為m/z342.170 6 [M]+，分子式為C20H24NO4。在二級質(zhì)譜中，觀察到峰度較高的碎片離子m/z192.102 0，表明該化合物在同一環(huán)上含有2 個甲氧基，且母核發(fā)生了裂解，碎片離子m/z177.085 9 比192.102 0 少15，推斷為碎片離子m/z192.102 0 失去了中性碎片CH3。同時，化合物44的二級碎片為342.170 3, 192.102 3, 177.085 7，與化合物23 的二級碎片離子相同，因此推測化合物23和44 為同分異構(gòu)體，為四氫呋喃非洲防己堿或四氫呋喃藥根堿。

3.4 阿樸啡類型生物堿

該類生物堿具有聯(lián)苯型四環(huán)結(jié)構(gòu)，與其他生物堿在結(jié)構(gòu)上存在較大的差異，若結(jié)構(gòu)中存在氮甲基，在質(zhì)譜中會產(chǎn)生 [M－NH2CH3]+、[M－NH(CH3)2]+等特征碎片離子，同時也會出現(xiàn)CH3、CH4的分子丟失。阿樸啡類生物堿只有側(cè)鏈的斷裂與重組，不會形成m/z較低、豐度較大的碎片離子，如木蘭花堿。結(jié)合碎片離子及文獻(xiàn)，共鑒定出阿樸啡類生物堿9 個，分別為化合物15、28、35、40、50、58、76、88 和89。

化合物28 為木蘭花堿，分子式為C20H24NO4，在正離子模式下，準(zhǔn)分子離子峰為m/z342.169 9[M]+。木蘭花堿中含有NH(CH3)2結(jié)構(gòu)，會產(chǎn)生特征離子碎片m/z297.112 0 [M－NH(CH3)2]+，在二級質(zhì)譜中，在二級質(zhì)譜中還可以觀察到由碎片離子[M－NH(CH3)2]+相繼丟失CH3和OH 產(chǎn)生的碎片離子m/z282.088 9 [M－NH(CH3)2－CH3]+、265.085 5[M－NH(CH3)2－CH3－OH]+，碎片離子m/z265.085 5 在斷裂的過程中會發(fā)生異構(gòu)化，繼續(xù)失去CO 和CH3形成的碎片離子m/z237.091 0 [MNH (CH3)2－CH3－OH－CO]+和m/z222.067 5 [MNH (CH3)2－CH3－OH－CO－CH3]+。其裂解途徑見圖7。

圖7 木蘭花堿的MS/MS 譜圖與裂解途徑Fig. 7 MS/MS spectrogram and fragmentation pathway of magnoflorine

化合物40、50 和76：化合物40，在正離子模式下，準(zhǔn)分子離子峰為m/z296.166 4 [M]+，分子式為C19H22NO2。在二級質(zhì)譜中，觀察到特征碎片離子m/z251.108 2 [M－NH(CH3)2]+，碎片離子m/z251.108 2, 236.082 6, 219.079 2, 191.084 5，依次降低15、17、28，推測依次掉落CH3、OH 和CO，與木蘭花堿掉落順序一致。同時，化合物50 和76 碎片離子與化合物40 一致，因此推測化合物40、50 和76 為同分異構(gòu)體，為annonamine 或其異構(gòu)體。

3.5 芐基異喹啉類生物堿

該類生物堿易出現(xiàn)氮甲基結(jié)構(gòu)，同樣在質(zhì)譜中會產(chǎn)生 [M－45]+、[M－31]+等特征碎片離子，如果還存在相鄰的羥基和甲氧基，則還會失去CH3OH從而形成 [M－45－32]+或 [M－31－32]+的碎片。該類生物堿會發(fā)生母核骨架斷裂，根據(jù)芐基所連接基團(tuán)的不同，形成m/z107、137、151 特征碎片，如木蘭箭毒堿。結(jié)合碎片離子及文獻(xiàn)，共鑒定出芐基異喹啉類生物堿20 個，分別為化合物4、6、7、8、11、13、14、16、17、19、24、27、33、34、43、45、48、52、69 和72。

化合物11 為木蘭箭毒堿，分子式為C19H24NO3，在正離子模式下，準(zhǔn)分子離子峰為m/z314.175 1[M]+。在二級質(zhì)譜中，可以觀察到母核斷裂后的特征碎片離子m/z107.049 1、151.077 1，掉落氮甲基后的特征碎片離子m/z269.111 6 [M－NH(CH3)2]+，木蘭箭毒堿中存在相鄰的羥基和甲氧基結(jié)構(gòu)，則還會失去 CH3OH 從而形成m/z237.089 5 [MNH(CH3)2－CH3OH]+。其裂解途徑見圖8。

圖8 木蘭箭毒堿的MS/MS 圖與裂解途徑Fig. 8 MS/MS spectrogram and fragmentation pathway of magnocurarine

化合物34：在正離子模式下，準(zhǔn)分子離子峰為m/z330.168 9 [M＋H]+，分子式為C19H23NO4。在二級質(zhì)譜中，碎片離子m/z192.100 6 為母核斷裂所產(chǎn)生，且比母離子峰度高，碎片離子m/z299.127 5 比m/z330.168 9 少了31，是母核發(fā)生RDA 裂解丟失NH2CH3所產(chǎn)生，可確定是芐基異喹啉類生物堿。二級質(zhì)譜得到m/z267.101 0 碎片，推測為化合物34 在丟失NH2CH3的基礎(chǔ)上丟失CH3OH 所致，其余碎片離子m/z192.100 6，177.077 7 等推測為該化合物的母核裂解及裂解后丟失CH3產(chǎn)生，結(jié)合文獻(xiàn)推測該化合物為番荔枝堿[14,19,21-22,25-27]。其裂解途徑見圖9。

圖9 番荔枝堿的MS/MS 圖與裂解途徑Fig. 9 The MS/MS spectrogram and fragmentation pathway of reticuline

3.6 其他類生物堿

本實驗還鑒定出9 個其他類生物堿，分別為化合物1、2、3、20、78、81、84、85 和87。

3.7 寬筋藤生物堿的抗炎活性

3.7.1 寬筋藤生物堿對RAW264.7 細(xì)胞活力的影響采用CCK-8 法檢測不同濃度寬筋藤生物堿對RAW264.7 細(xì)胞活力的影響，結(jié)果見表2。在寬筋藤生物堿質(zhì)量濃度為7.83～500 μg/mL，RAW264.7細(xì)胞的存活率高于80%，表明寬筋藤生物堿對RAW264.7 細(xì)胞的生長活性沒有明顯的抑制作用；寬筋藤生物堿在1000 μg/mL 時，對RAW264.7 細(xì)胞活力產(chǎn)生顯著的抑制作用（P＜0.01）。

表2 不同濃度給藥組對 RAW 264.7 細(xì)胞活力影響(±s, n = 3)Table 2 Effects of different concentrations of drug groups on the viability of RAW264.7 cells (±s, n = 3)

表2 不同濃度給藥組對 RAW 264.7 細(xì)胞活力影響(±s, n = 3)Table 2 Effects of different concentrations of drug groups on the viability of RAW264.7 cells (±s, n = 3)

與對照組比較：**P＜0.01**P < 0.001 vs control group

組別 劑量/(μg·mL?1） 細(xì)胞存活率/%對照 - 100.00寬筋藤生物堿 1 000.00 26.78±7.46**500.00 81.96±2.98 250.00 88.44±10.48 125.00 96.58±18.04 62.50 96.63±6.04 31.25 94.60±6.83 15.63 97.19±14.71 7.83 95.52±18.43

3.7.2 寬筋藤生物堿對脂多糖誘導(dǎo)的RAW264.7 細(xì)胞活力的影響 采用Griess 法測定寬筋藤生物堿對脂多糖誘導(dǎo)的RAW264.7 細(xì)胞產(chǎn)生一氧化氮的抑制作用，結(jié)果見表3。與模型組比較，寬筋藤生物堿15.63～125.00 μg/mL 對脂多糖誘導(dǎo)RAW264.7 分泌一氧化氮具有明顯的抑制作用，抑制率為19.10%～97.01%，并呈現(xiàn)出明顯的劑量相關(guān)性，其半數(shù)抑制濃度為22.87 μg/mL。

表3 不同濃度給藥組對脂多糖誘導(dǎo)的RAW264.7 細(xì)胞一氧化氮水平影響 (±s, n = 3)Table 3 Effects of different concentrations of drug groups on lipopolysaccharide induced nitric oxide release in RAW264.7 cells (±s, n = 3)

表3 不同濃度給藥組對脂多糖誘導(dǎo)的RAW264.7 細(xì)胞一氧化氮水平影響 (±s, n = 3)Table 3 Effects of different concentrations of drug groups on lipopolysaccharide induced nitric oxide release in RAW264.7 cells (±s, n = 3)

組別 劑量 一氧化氮抑制率/%對照 - -模型 - -地塞米松 40.00 μmol·L?1 97.28±0.21寬筋藤生物堿 15.63 μg·mL?1 19.10±3.75 31.25 μg·mL?1 54.33±8.36 62.50 μg·mL?1 82.37±4.15 125.00 μg·mL?1 97.01±0.33

4 討論

近年來，隨著人們經(jīng)濟(jì)水平的提高，骨質(zhì)疏松癥、關(guān)節(jié)炎類疾病的發(fā)病率呈上升趨勢，且發(fā)病人群呈年輕化趨勢，給患者帶來很大的困擾。藏藥寬筋藤作為藏醫(yī)藥治療此類疾病的臨床常用藥，展現(xiàn)出良好的應(yīng)用價值。

本研究首次采用UPLC-Q-TOF-MS/MS 技術(shù)對其生物堿類成分進(jìn)行了全面分析。在實驗過程中為了獲取較好的分離效果，針對有機(jī)相：乙腈、甲醇；水相：水、0.1%甲酸水、0.2%甲酸水流動相進(jìn)行了考察，最終將0.1%甲酸水溶液-乙腈確定為流動相。

基于化合物的結(jié)構(gòu)多樣性使得在單一質(zhì)譜條件下無法獲得每個化合物的最優(yōu)參數(shù)，因此，本實驗以寬筋藤藥材中已知的原小檗堿類生物堿（小檗堿、巴馬?。⑺臍湓￠迚A類生物堿（四氫巴馬汀、黃柏堿）、阿樸啡類生物堿（木蘭花堿）和芐基異喹啉類生物堿（木蘭箭毒堿）4 種類型生物堿為參照，通過對碰撞能量、碰撞能量范圍、離子化溫度、氣簾氣等參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，獲取相應(yīng)結(jié)構(gòu)的最優(yōu)碎片離子。同時結(jié)合保留時間、相對分子質(zhì)量、二級質(zhì)譜的碎片離子、相關(guān)文獻(xiàn)，共推測鑒定出73 個生物堿，包括12 個原小檗堿型生物堿、23 個四氫原小檗堿型生物堿、20 個芐基異喹啉類生物堿、9 個阿樸啡類生物堿和9 個其他類生物堿。

綜上，本研究運用UPLC-Q-TOF-MS/MS 技術(shù)對藏藥寬筋藤生物堿類成分進(jìn)行全面系統(tǒng)地解析，為后續(xù)的深入研究提供理論依據(jù)。

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